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FACULDADE SANTA RITA CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA:

Fabiano Pereira dos Santos

Conselheiro Lafaiete 2012

MICROBIOLOGIA: Relatrio Aula Pratica 01: Esterilizao e Assepsia para trabalhos Microbiolgicos

Conselheiro Lafaiete 2012

SUMRIO

1 IDENTIFICAO .........................................................................4 2 RESUMO 3 INTRODUO .......................................................................... 4 .......................................................................... 5

4 MATERIAIS E MTODOS.............................................................. 6 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 Materiais utilizados ..................................................................... 6 Vidrarias ...................................................................................6 Acessrios ................................................................................. 7 Equipamentos ............................................................................ 8 Mtodos .................................................................................... 9

5 RESULTADOS E DISCUSSES..................................................... 11 6 CONCLUSO ............................................................................. 11 7 REFERNCIAS ...........................................................................12

1. Identificao: Relatrio Aula Pratica 1 Ttulo: Esterilizao e Assepsia para trabalhos Microbiolgicos Nome dos autores:

Fabiano Pereira dos Santos

2. Resumo:

Em Microbiologia importante a esterilizao de meios, solues e materiais usados em Microbiologia. Uma das formas de esterilizao atravs do uso da Autoclave, para grandes quantidades de meios, para pequenas quantidades de meios. Um produto microbiologicamente estril quando no contem nenhuma forma de microrganismo vivo. A assepsia extremamente importante na microbiologia. Todas as condies, gestos e atitudes tendentes a manterem o estado de ausncia de microrganismos contaminantes no meio em que atua. Alguns instrumentos de disseco como tesouras, pinas podem ser esterilizadas mergulhando em 70% de lcool (70 ml de etanol absoluto e 30 ml de gua destilada).

3. Introduo: Na natureza encontramos vrias espcies de organismos (bactrias, fungos, algas e protozorios) convivendo no mesmo ambiente. Para estudar as propriedades de um determinado microrganismo em particular, deve-se em primeiro lugar isol-lo em cultura pura, ou seja, uma cultura isenta de todos os demais tipos de organismos, onde todas as clulas da populao sejam idnticas (originrias de uma mesma clula parental). Ento algumas manobras asspticas tiveram que ser utilizadas neste tipo de laboratrio, que foram as seguintes: ao chegar ao laboratrio o ambiente que se vai trabalhar deve estar o mais limpo possvel, quanto mais livre de microrganismos,melhor para obteno de um bom resultado no experimento. Para garantir um ambiente limpo deve primeiramente lavar as mos com detergente e lcool, incluindo tambm os antebraos, deve-se limpar toda a bancada, onde ser feito o trabalho com lcool, preferencialmente iodado.

4. Materiais e Mtodos:

No incio e trmino de cada trabalho prtico, a superfcie da bancada deve ser Todo material contaminado antes de ser lavado, deve passar pelo processo de

Desinfetada com lcool 70%, no mesmo sentido;

Esterilizao, para que toda a sua flora microbiolgica seja completamente destruda, evitando-se que o mesmo seja uma fonte de contaminao.

Nunca se deve deixar sobre a bancada de trabalho, lminas retiradas do

microscpio. Este material deve ser colocado em recipiente contendo uma soluo desinfetante adequada.

Todo material que deve ser esterilizado e/ou lavado (tubos, pipetas, placas

frascos, etc.) dever ser colocado em lugar indicado, ao final de cada atividade desenvolvida no laboratrio.

As alas e as agulhas inoculadas, aps o uso, devem ser esterilizadas chama.

A autoclave, que um equipamento usado nas atividades rotineiras do

laboratrio, deve ser inspecionado e verificado quanto eficincia de esterilizao periodicamente.

Em caso de acidentes provocados por respingos, quebras de frascos, tubos e

placas que contenham materiais contaminados deve-se proceder imediatamente desinfeco.

4.1 Materiais Utilizados:


Vidrarias; Acessrios; Equipamentos;

4.2 Vidrarias

4.2.1)Tubo de cultura

So tubos de vidro, sem borda ou com tampa de plstico rosquevel. Seu tamanho pode variar de acordo com o trabalho a ser realizado.

4.2.2) Placas de Petri

So recipientes redondos, de vidro ou plstico, com tampa rasa. Geralmente recomendado determinarse o seu dimetro e altura, de acordo com o tipo de trabalho a ser realizado.

Placa de Petri - facilita o isolamento de microrganismos devido grande superfcie de crescimento que apresenta, possibilitando o aparecimento de colnias separadas .So utilizados no cultivo de microrganismos em pequeno volume de meio de cultura, trazendo a vantagem de economizar meio e espao fsico.

4.3

Acessrios

4.3.1) Bico de Bunsen

um aquecedor a gs com chama cuja temperatura varia de acordo com a regulagem. A utilizao do Bico de Bunsen essencial, pois visa diminuio de microrganismos no campo de trabalho atravs do calor. No caso da Microbiologia deve ser utilizada a chama azul porque esta atinge maior temperatura e no forma fuligem.

4.3.2) Ala de platina

um

fio

de

platina

ou

outra

liga

metlica,

medindo

aproximadamente cinco centmetros, recurvado em uma de suas extremidades. Este material utilizado para transferir inoculou slido ou em suspenso

4.4

Equipamentos

4.4.1)Contador de colnias utilizado para contagem de colnias em Placa de Petri. constitudo de um suporte onde colocada a placa e acima desta, em distncia definida, situa-se uma lente (lupa) que possibilita o aumento.

4.4.2)Autoclave

um equipamento destinado esterilizao pelo calor mido (vapor d gua sob presso). Normalmente, so utilizados para esterilizar guas de diluies, meios de cultura que suportem temperaturas elevadas (115-120C), materiais contaminados que vo ser descartados e outros.

autoclave de laboratrio pode ser do tipo horizontal ou vertical, contendo os seguintes acessrios: caldeira cilndrica hermeticamente fechada por uma tampa de bronze ou cobre, dotada de manmetro, vlvula de escape de ar e de segurana. Em seu interior existe uma

cesta metlica (mvel) onde so colocados todos os materiais a serem esterilizados.

4.4.2) Microscpio tico

Equipamento utilizado para o estudo dos microrganismos. Os equipamentos mais usados permitem o aumento de at 1.250 vezes e podem ser monocular ou binocular.

4.4.4)Solues

As solues desinfetantes so utilizadas para anti-sepsia das mos (lcool 70% m/m), ou desinfeco das bancadas (hipoclorito de sdio 2,5%, lcool 70% m/m ou lcool 70% m/m+ Iodo 0,1-0,5% m/v), ou ainda para descarte de resduos lquidos e de pipetas contaminadas (no usar soluo inflamvel com lcool 70%). Antes de iniciar qualquer atividade as bancadas devem ser desinfetadas e providenciado recipiente com soluo de hipoclorito de sdio para descarte das pipetas. As solues podem ser armazenadas em pissetas plsticas.

4.5 Mtodos Para execuo da aula, houve a utilizao de uma placa de Petri onde foi feita a cultura de microorganismo, um Bico de Bunsen para esterilizao de materiais e ambiente em torno onde foi feito a experincia, uma ala de platina para fazer o cultivo e tambm a

esterilizao. Para esta prtica,como j descrito, usaram-se as duas placas no contaminadas, cedidas pela professora, contendo o mesmo meio de cultura das que foram preparadas pelo grupo. Deve-se tomar alguns cuidados para a execuo deste trabalho como, por exemplo: Cabelos longos devem ser amarrados de forma a no interferir com reagentes e equipamentos. Limpar e desinfetar a superfcie das bancadas antes e depois de cada aula prtica. Lavar e higienizar as mos ao iniciar a anlise, ao sair do laboratrio e sempre que for necessrio. Se for portador de algum ferimento nas mos, procurar no tocar no material. Identificar as amostras, bem como o material a ser utilizado antes de iniciar a anlise. Utilizar exclusivamente material estril para a anlise. No caso de derramamento do material contaminado, proceder imediatamente desinfeco e esterilizao. O mesmo procedimento dever ser repetido se ocorrer ferimentos ou cortes. No comer, beber ou fumar no laboratrio. Manter canetas, dedos e outros longe da boca. No utilizar material de uso pessoal para limpar os objetos de trabalho. Avisar ao professor em caso de contaminao acidental. Depositar todo o material utilizado em recipiente adequado, jamais os deixando sobre a bancada. Flambar as alas, agulhas e pinas antes e aps o uso. Os cultivos aps a leitura devem ser esterilizados, portanto no os colocar na estufa ou despejar na pia. Ao acender o Bico de Bunsen, verificar se no h vazamento de gs ou substncias inflamveis por perto.

Trabalhe

sempre

prximo

ao

fogo.

5. Resultados e Discusso Cultivando os microorganismos em tubos de ensaio, h facilidade de manipulao das culturas, alm da vantagem de economizar meio e espao fsico. Tambm possvel fazer o cultivo em o placas de petri onde de de facilitar o isolamento que de microorganismos,devido ,possibilitando grande superfcie crescimento colnias apresenta separadas.

aparecimento

6. Concluses Sendo assim, com os resultados obtidos, pode-se concluir que estamos cercados por microrganismos que podem vir a afetar negativamente, nossos experimentos e materiais. E, essa contaminao, se no previamente diagnosticada, poder causar uma falsa anlise, um falso laudo. Por isso tambm, necessrio obedecer todas aquelas manobras asspticas citadas.

7. Referncias Penn, C (1991). Chapter 1. Equipment and materials; Chapter 5. Sterility and aseptic technique. In Handling Laboratory Microorganisms, Open University Press, Philadelphia: 5-25 e 41-48 pp. DIFCO Manual, Section 1: 12-16. Internet: recife. ifpe.edu.br/recife/manual_microbiologia_5_ed_2007_final.pdf http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAHrAAK/relatorio-micro-manobras-assepticasmanipulacao-micro