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ETEC Cnego Jos Bento

Microbiologia
Contagem total de mesfilos viveis
Alan Carlos Anna Julia Erick Barros Ludmilla Michele Suelem Moretti Thais Lamoglia

Ttulo: Contagem total de mesfilos viveis

Objetivo: Identificar o numero de contagem total de bactrias mesfilas em alimentos (no caso do leite que ser analisado), obtendo assim as condies higinicas do produto.

Introduo:

A analise conhecida como mesfilos viveis tambm conhecido como contagem em placa, que estima o nmero de clulas viveis (isto , capazes de se reproduzir) em uma amostra. Esta metodologia envolve a coleta de alquotas de uma cultura microbiana em diferentes tempos de crescimento, as quais so ento inoculadas em meio slido. Aps a incubao dos meios, geralmente por uma noite, o nmero de colnias contado. Como uma colnia normalmente originada a partir de um organismo, o total de colnias que se desenvolvem no meio corresponde ao nmero de clulas viveis presentes na alquota analisada. Esta tcnica deve sempre realizada empregando-se vrias dilues (100 a 104 clulas) das amostras. A contagem de viveis pode ser feita pela semeadura em superfcie ou em profundidade ("pour plate"). Geralmente o volume a ser inoculado no deve ultrapassar 0,1 ml, para evitar a confluncia das colnias. Se a tcnica de semeadura em profundidade for utilizada, pode-se inocular de 0,1 a 1,0 ml de clulas. Esta tcnica precisa quando o nmero de colnias (ou placas de lise, no caso de partculas virais ) contadas situa-se entre 30 e 300 e quando as condies culturais e ambientais esto adequadas para os microrganismos analisados. Este tipo de contagem est sujeito a grandes erros (agregados, duas clulas prximas, originando uma colnia), que podem ser minimizados pela realizao de triplicatas para cada diluio. Esta metodologia amplamente utilizada, exibindo elevada sensibilidade, detectando baixos nmeros de clulas e permitindo tambm a contagem de diferentes tipos de microrganismos, pelo emprego de meios seletivos (meios que favorecem o crescimento de um determinado tipo ou grupo de organismo) e/ou seletivos e diferenciais (meios que alm de favorecerem o desenvolvimento de um tipo ou grupo de organismo, tambm permite sua distino, a partir de alguma caracterstica fenotpica).

Tambm podem ser usadas membranas filtrantes, onde os lquidos so filtrados e as membranas colocadas diretamente sobre os meios de cultura. O trabalho de bancada em microbiologia (preparao de diluies padronizadas de microrganismos, transferncia de entre meios, manuteno por tempos curtos) exige a utilizao de um diluente inerte, com pH e presso osmtica estveis, livre de carboidratos que favoream o crescimento bacteriano, o que leva ao acmulo de cidos e outros excretas txicos. A gua peptonada tamponada rene estas caractersticas. Basicamente uma soluo de peptona 0,1% preparada com a soluo tamponada de Sorensen.

Material:

- Pipetas 10ml/1ml - Pera - Tubos de ensaio - Estante para tubos de ensaio - Becker

- Estufa - Contador de colnias - Bico de Bunsen - Placas de Petri

Reagentes:

- PCA (Plate Count Agar) - gua peptonada - Leite para analise

Metodologia: - Preparar 100ml de gua peptonada e colocar 10ml em cada tubo de ensaio. - Pipetar 10ml da amostra a ser analisada em 90ml de gua peptonada (soluo 10 1

- Colocar 1ml dessa soluo em uma placa de Petri esterilizada, e 1ml em um tubo de ensaio contendo 9ml de gua peptonada, obtendo assim uma soluo 10 -2. - Adicionar 1ml da soluo 10-2 em uma placa de Petri estrelisada e 1ml em um tubo de ensaio contendo 9ml de agua peptonada, obtendo assim uma soluo 10 -3. - Adicionar 1ml da soluo 10-3em uma placa de Petri.

- Colocar o meio de cultura fundido e resfriado a + ou 45C. Fazer movimentos com as placas de Petri em formas rotativas, para uma boa homogeneizao do meio de cultura com o inoculo. Inocular a 35C por 48 horas.

Esquema de montagem

Resultados e discusso:

Aps a incubao, realizamos a leitura das placas de petri, e verificamos com a contagem que o nmero de colnias de Mesfilos viveis insignificante.

Concluso:

Aps a leitura das placas de petri, observamos que o nmero de colnias de Mesfilos viveis muito pequeno, assim podemos concluir que as condies higinicas do leite esto dentro do padro de qualidade estabelecido.

Referncia bibliogrfica:

http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/crescimento/crescimento.html

http://www.scientia.blog.br/wordpress/?p=3426