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Tcnicas bsicas da engenharia gentica

A engenharia gentica define-se como sendo a manipulao artificial de genes, nomeadamente a transferncia de genes de um organismo para outro. Uma designao mais ampla tecnologia de recombinao de DNA. Dois exemplos tpicos so o fabrico respectivamente de plantas do tabaco resistentes aos herbicidas e de tomates imunes degradao por longo transporte e armazenamento. O resultado final sempre o mesmo: a obteno de organismos contendo genes diferentes no seu genoma: da a definio de organismos transgnicos. A tecnologia de recombinao de DNA baseia-se na utilizao de vectores (transportadores de DNA), como plasmdeos de bactrias ou vrus, que transportam como seus, DNA estranho neles inserido e consequentemente replicveis. Por outras palavras o DNA de plantas ou animais clonado mediante a sua insero em bactrias ou vrus. Ferramenta importante na tecnologia gentica, a clonagem de DNA exige, antes de mais, que tanto o DNA estranho como o do vector sejam compatveis entre si; tarefa de que encarregam as chamadas enzimas de restrio bacterianas , assim chamadas por cortarem o DNA (tesouras qumicas) em pequenos fragmentos. Um exemplo de enzima de restrio a EcoRI, comercializada a partir da Escherichia coli. A EcoRI reconhece a sequncia de nucletidos GAATTC e, cortando o DNA entre a guanina e a adenina, acaba por deixar duas terminaes livres de cadeia simples, ao retirar uma poro intermdia da cadeia dupla de DNA; estas terminaes livres podem agora ser unidas, por ligaes de hidrognio, a terminaes complementares de um fragmento de outra molcula de DNA obtido com recurso mesma enzima de restrio ( figura 1).

O passo seguinte na clonagem do DNA, utiliza este processo para inserir esse DNA num vector adequado; este pode ser um plasmdeo ( figura 2) ou um vrus bactrifago. A bactria modificada, com um gene estranho no seu plasmdeo, vai reproduzir-se fazendo assim cpias desse gene.

Convm notar que usando os vrus para clonar genes de interesse, como estes so parasitas, tm de ser reintroduzidos nos seus hospedeiros antes que possam replicar o DNA recombinado. Todo um genoma pode ser cortado por enzimas de restrio, sendo muitos dos fragmentos de DNA resultantes passveis de insero em numerosos vectores adequados. Estes vectores podem ser cultivados e a correspondente informao gentica armazenada e sempre recupervel, como se de uma verdadeira biblioteca de genes se tratasse; da o nome de biblioteca genmica aplicado ao conjunto de fragmentos clonados de um genoma. Mas tambm se podem construir bibliotecas utilizando DNA complementar (cDNA), para o que se recorre enzima transcriptase inversa que cataliza a reaco RNA DNA. Mais recentemente, tornou-se possvel construir cromossomas artificiais clonveis em leveduras ( Sscharomyces cervisiae). Diferentemente dos vectores bacterianos e virais, os cromossomas artificiais de levedura ( YACs) podem unir-se a milhes de nucletidos de DNA estranho , e assim serem replicados. Infelizmente, o uso de YACs to complexo e dispendioso que o torna actualmente limitado ao genoma humano. Em animais uma tcnica de engenharia gentica utiliza micromanipuladores que inserem DNA estranho no ncleo de clulas fecundas. Outra metodologia mais recente a biolalstica, tcnica que emprega microprojcteis em alta velocidade para transportar DNA a clulas ou organismos.

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