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ORIGEM DOS POTENCIAIS ELTRICOS DAS CLULAS NERVOSAS

Jorge A. Quillfeldt
Departamento de Biofsica, IB, URGS

s clulas vivas dependem de uma

srie de reaes qumicas em seu interior, que, delicadamente articuladas entre si, em sequncia ou em paralelo, operam para manter o frgil equilbrio dinmico que significa estar vivo. Esse incessante turbilho bioqumico libera energia quebrando ligaes qumicas de nutrientes ingeridos, constri e reconstri biopolmeros como protenas, cidos nucleicos, lipdios e glicdios, e tambm desfaz e descarta os restos destas substncias, uma vez que qualquer biomolcula funcional apenas por um tempo limitado dentro das clulas. Mas a atividade biolgica no envolve apenas reaes qumicas, embora estas estejam sempre na origem da captao e distribuio de energia e sntese de constituintes moleculares em qualquer organismo vivo. Podemos encontrar tambm atividades biolgicas derivadas: eltrica, mecnica (movimentos, comportamentos), trmica (especialmente nos vertebrados endotrmicos) e at luminosa (bioluminescncia). Alis, muito antes de se ter clareza sobre a natureza bioqumica da vida, achava-se que o impulsionador deste processo o chamado lan vital era a prpria eletricidade. No a toa que a histria do descobrimento da eletricidade confunde-se com os primrdios da prpria biologia, com a disputa acirrada, no sculo XVIII, entre Galvani e Volta acerca da natureza da
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eletricidade (Figura 1). Sob esta inspirao, hoje ultrapassada, a literatura fantstica do sculo XIX nos legou o clssico de Mary Shelley, Frankenstein, uma criatura artificial contruda a partir de tecidos mortos e animada por... eletricidade! Os fenmenos bioeltricos podem envolver tanto a gerao, quanto o resultado da ao de campos ou correntes eltricas sobre os processos biolgicos. Em vertebrados como os humanos, so particularmente notveis em trs tipos de tecidos, o neural (incluindo suas interfaces com os diferentes rgos sensoriais), o muscular (esqueltico, liso ou cardaco) e o endcrino (glndulas secretoras), onde desempenham um papel central. Podem tambm manifestar-se potenciais eltricos em situaes excepcionais, como em tecidos lesionados. Uma categoria especial de uso da bioletricidade encontrada em alguns peixes, onde um msculo modificado, o rgo eltrico, pode ser utilizado como rgo sensorial ou, por vezes, como rgo de ataque/defesa.

I Alguns conceitos bsicos


A atividade eltrica nos tecidos vivos um fenmeno que se d em nvel celular, sendo estritamente dependente da membrana celular. Em praticamente todas as clulas vivas em que isso foi medido detectou-se alguma diferena de

potencial (DDP) eltrico entre o citoplasma e o exterior das mesmas. Este o chamado Potencial de Repouso ou Potencial de Membrana, cujo valor varia em diferentes tipos de clulas, indo de 5 a 100 mV, quase sempre com o interior negativo em relao ao exterior. QUEM CONDUZ ELETRICIDADE NOS SERES VIVOS? - Uma vez que nos tecidos biolgicos no h disponibilidade de eltrons livres para movimentar-se de forma anloga que ocorre nas bandas de valncia dos metais condutores, as cargas eltricas em questo s podem estar nos ons de compostos dissociados no meio aquoso que tudo preenche, dentro e fora da clula. Deste modo, a causa principal do potencial de repouso seria a distribuio desigual dos ons em soluo nos dois lados da membrana, compartimentados ativa ou passivamente pelos mecanismos seletivos de transporte inico transmembrana. A membrana, portanto, atua com um capacitor, armazenando energia nesta distribuio espacial de ons eletricamente carregados; esta energia potencial eltrica est disponvel para ser recuperada rapidamente, alm de estabilizar a membrana evitando que este sistema seja perturbado por qualquer fator de menor importncia. Como dissemos, as clulas vivas tm um potencial de repouso de cerca de 0,1V ou menos, negativo em relao ao exterior. Isto especialmente notvel nas chamas clulas excitveis, que so os neurnios, micitos e clulas endcrinas: nestas clulas, quando ativadas, o potencial sai do repouso eltrico e muda de valor, chegando a inverter sua polaridade e, por um breve perodo (da ordem das dezenas de microssegundos), o interior da clula fica positivo, e o exterior, negativo; rapidamente, ento, a membrana da clula recobra seu potencial
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de repouso. Este processo, com suas fases de despolarizao e repolarizao, envolve correntes eltricas (inicas) transmembrana - com ons fluindo para dentro e para fora em diferentes etapas -, consome cerca de 1 milissegundo, e chamado de Potencial de Ao. Os potenciais de ao propagam-se ao longo da membrana celular, indo do ponto de origem at o outro extremo, mobilizando rigorosamente todos os recursos (canais e bombas) da membrana; da, em parte, a expresso tudo-ou-nada que descreve o fenmeno. Voltaremos mais tarde a este assunto em maior detalhe. REGISTROS INCIDENTAIS - Estas pequenas correntes inicas percorrem distncias fsicas pequenas, sendo que a maioria dos ons permanece sempre muito prximo membrana, mas as variaes dos campos eltricos podem ser detectadas a considervel distncia, at por que seus valores no so desprezveis. Nas trs classes de clulas excitveis dos animais acima mencionadas, estas correntes inicas s tm relevncia funcional no local exato em que aparecem, portanto, quando medidos distncia, devemos consider-las como registros incidentais, ou seja, seu significado s existe para o experimentador que realiza o registro. Somente nos peixes eltricos tais manifestaes mensurveis possuem um significado fisiolgico e adaptativo: neste caso, a organizao citoarquitetnica do rgo eltrico, com a conexo serial de muitas clulas, permite a soma de suas voltagens at atingir valores bastante elevados. Para se ter uma idia, no eletroencefalograma e no eletrocardiograma, os biopotenciais incidentais que so medidos a alguma distncia de suas fontes celulares originais so, respectivamente, da ordem dos 20-30V (microvolts) ou do mV

(milivolt); nos peixes eltricos, por outro lado, esta voltagem pode chegar a 1.000V, suficiente para atordoar ou mesmo matar muitas de suas vtimas. VOLTAGEM E CORRENTE ELTRICAS - Mas no nos impressionemos com valores de voltagem eltrica, pois estes nem sempre expressam adequadamente o efeito que podem causar. De fato, um potencial eltrico uma forma de energia potencial, isto , uma forma de armazenar energia para realizar trabalho, como, por exemplo, fazemos quando armazenamos grandes quantidades de gua no lado de cima de uma represa (potencial gravitacional), e o trabalho recuperado na queda da gua, que, deste modo, aciona uma turbina e gera corrente eltrica. Neste exemplo, a quantidade de trabalho obtido depende do fluxo de gua que permitirmos passar, pois, como sabemos, nenhuma turbina ser acionada se apenas abrirmos uma pequena torneira. De forma anloga, a verdadeira expresso do trabalho eltrico o fluxo de cargas eltricas que deixamos passar, isto , a corrente eltrica: assim, correntes grandes, mesmo de baixa voltagem, podem ser letais (como em baterias de automvel), e voltagens altas, com baixas correntes, geralmente no so (como quando escutamos os estalos da eletricidade esttica ao tirar o casaco de l em um dia seco de inverno, fenmeno que pode envolver milhares de volts). As diferenas de potencial eltrico (ddp) so medidas em V (Volts), enquanto que as correntes eltricas, em A (Ampres). Apesar das diferenas bvias com as fontes eltricas artificiais que tanto utilizamos, tais correntes eltricas breves e cambiantes so chamadas de CA (corrente alternada) pelos eletrofisiologistas. J o potencial de repouso, que, como veremos, tambm pode envolver correntes eltricas
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transmembrana, , por vezes, tratado como CC (corrente contnua). Os potenciais CC so relativamente estveis ou de variao muito lenta, como aqueles que medimos em tecidos lesionados, o chamado potencial de ferida, com cerca de -50mV e causado pelo vazamento de potssio. So encontrados em outras situaes tambm, como quando medimos diferenas de potencial eltrico entre dois pontos do encfalo (at 1mV) ou da pele (at 10mV), no interior de glndulas ativas (por exemplo, nos folculos da tireide, onde chega aos 60mV) ou de rgos sensoriais (no canal interno da cclea medimos cerca de +80mV). Para uma noo mais tctil acerca das intensidades de corrente eltrica e seus efeitos sobre um tecido vivo, observe-se que uma corrente de 2mA, passando atravs de uma parte de nosso corpo, mal ser percebida. Acima dos 10mA, porm, o choque eltrico ter consequncias graves, uma vez que os eltrons e ons mobilizados fora pelo tecido, causam seu aquecimento (efeito Joule) e, consequentemente, lesionam-no. Entre os 100 e os 200mA, as correntes eltricas so letais para humanos. Curiosamente, choques acima destes valores podem no ser letais se houver ateno mdica imediata; mesmo assim, podem causar queimaduras e inconscincia: a letalidade geralmente causada pela fibrilao ventricular, que, contudo, acima dos 200mA, menos comum, uma vez que, nesta situao, o corao fica rigidamente contrado (e, assim, parcialmente protegido). Os riscos de leso aumentam se a pele estiver molhada, quando a resistncia eltrica diminui muito.

II O Meio aquoso e a Membrana das Clulas


Antes de entrar na dinmica inica particular que explica os biopotenciais eltricos do sistema nervoso, convm ressaltar que estes fenmenos se do em uma escala de tamanho da ordem das dezenas de nanmetros, intermediria entre os fenmenos puramente moleculares (nanomtricos) e os celulares (micromtricos). Neste mundo, o ambiente molecular totalmente comandado pelas propriedades fsicoqumicas da gua, e essencial compreend-las para entender o que fazem ons e protenas. O meio aquoso preenche a maioria dos espaos intra e extracelulares, e onde esto suspensas quase todas as molculas (solveis, claro) que interagem entre si para animar o metabolismo intermedirio, a mobilizao de fontes energticas e nutrientes, e os processos de manuteno e reparao molecular e celular. PROPRIEDADES DA GUA - A gua um lquido nico, e talvez o fator mais decisivo a explicar porque a vida to onipresente na terra (e por que to difcil encontr-la em planetas vizinhos do sistema solar, ainda que esta possibilidade exista). presso de 1 atmosfera, encontra-se na forma lquida entre 0oC (273K) e 100oC (373K), condies encontradas apenas em nosso planeta. Devido a uma estrutura simples de dipolo eltrico, as molculas de gua interagem fortemente entre si, ainda que de forma rpida: as chamadas pontes de hidrognio tm energias apenas 5 a 10 vezes menores que as de ligaes covalentes, e duram cerca de 10-9 segundos. Isto, porm, suficiente para conferir uma elevada coeso interna ao

meio aquoso, e explica por que, quando comparada com outros lquidos de peso molecular semelhante, a gua aquele que apresenta o maior ponto de ebulio, o maior calor especfico1 e a maior capacidade trmica 2 (calor de vaporizao), alm de uma das maiores tenses superficiais (Figura 2). Outras propriedades sui generis da gua so o chamado ponto anmalo (a densidade mxima da gua se d em +4oC 3 ), a auto-ionizao (que gera uma baixa concentrao de ons H+ e OH-, base da escala de pH) e sua alta solubilidade. Na verdade a gua considerada o melhor solvente que existe para sais, cidos e bases, ou seja, todas aquelas substncias que so polares (dessas, algumas so carregadas, isto , possuem cargas eltricas inteiras 4), e o faz pois combina
Que explica seu poder de verdadeiro tampo trmico ambiental. Por exemplo, a quantidade de vapor de gua na atmosfera determina as variaes de temperatura. Por outro lado, as guas de lagos, rios e oceanos no variam sua temperatura to rpida, nem to intensamente quanto a massa de ar adjascente, permitindo algum conforto vida presente. 2 Esta propriedade explica, por exemplo, a sudorese, quando gua secretada sobre a superfcie da pele passa ao estado gasoso, roubando boa quantidade de calor, e, assim, refrescando-nos. 3 J o gelo de gua possui uma estrutura cristalina, regular e repetitiva, e menos densa que a gua lquida: por isso que o gelo flutua, e tambm por isso que, no inverno, quando lagos e rios congelam, este congelamento no vai at o fundo nos locais mais profundos, pois o peso da coluna de gua impede que ela assuma a forma de gelo, menos densa. A forma cristalina do gelo, em clulas hexagonais, conhecida como gelo I, uma vez que h outras seis formas estruturalmente diferentes, todas elas mais densas que a gua lquida. 4 Por outro lado, a gua no dissolve, quimicamente falando, substncias apolares (tambm conhecidas como hidrofbicas), no mximo permitindo que fiquem em suspenso, geralmente mediante agitao mecnica. Em qumica, somente o semelhante dissolve o
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outras duas propriedades fsico-qumicas: a solvatao (hidratao) dos solutos, com sua consequente blindagem eletrosttica (a gua um bom isolante eltrico 5) e a difusibilidade, ou seja, o fato de a agitao trmica manter as molculas de gua movendo-se em direes aleatrias e colidindo constantemente umas com as outras e tambm com os solutos, impulsionandoos: esse movimento errtico dos solutos, muitas vezes chamado de movimento browniano, fatalmente afastar os solutos que esto sendo removidos de um cristal maior (por exemplo, de NaCl), favorecendo a dissoluo do restante. EFEITO HIDROFBICO - Para os seres vivos, porm, no s a solubilidade importante: tambm o que a gua no dissolve decisivo. E tambm aqui valem as propriedades to particulares da gua lquida. Molculas apolares no so dissolvidas por que no estabelecem interaes com as molculas de gua (pontes de hidrognio e outras interaes eletrostticas, as foras de Van der Waals), mas, em meio aquoso, ficam em um estado termodinamicamente instvel, de alta energia, pois as molculas de gua que a envolvem, no podendo interagir com ela, interagem mais fortemente entre si. Quando duas molculas apolares em
semelhante (simile fac simile), isto , polar dissolve polar, apolar dissolve apolar. 5 Isso apela contra o senso comum, mas a gua lquida s atua como condutor quando tem sais em soluo, e seus eletrlitos servem de condutor. Como toda gua que normalmente encontramos (fora do laboratrio) sempre possui algum sal dissolvido, natural que, na prtica, atue como um condutor. A quantidade de vapor de gua na atmosfera determina os extremos possveis de variao de temperatura. Por outro lado, as guas de lagos, rios e oceanos no variam sua temperatura to rpida, nem to intensamente quanto a massa de ar adjascente, permitindo algum conforto vida presente.

suspenso na gua se encontram, elas experimentam a oportunidade de justapor-se e, assim, diminuir o nmero de molculas de gua necessrias para envolv-las no instvel esquema recmdescrito. Deste modo, a energia do sistema diminui, e a tendncia as molculas apolares permanecerem justapostas (no necessariamente interagindo entre si com qualquer tipo de ligao qumica): isto o que chamamos de efeito hidrofbico, um importante fenmeno fsico que atua na organizao espacial de pelo menos duas estruturas biologicamente fundamentais, as protenas e as membranas celulares, compostas por molculas ditas anfipticas, parcialmente polares e parcialmente apolares. TIPOS DE PROTENAS - A maioria das enzimas metablicas so protenas globulares, formada por uma cadeia linear (sem ramificaes) de resduos de aminocidos ligados covalentemente uns aos outros e articulados espacialmente, primeiro em espirais (alfa-hlices) ou estruturas ziguezagueantes (betaestruturas), e, a seguir, em novelos tridimensionais, os domnios. Estes so, respectivamente os nveis estrutrurais secundrio (alfas e betas) e tercirio (domnios) das protenas globulares. Um domnio tercirio tem o formato aproximadamente esfrico e enovela-se por efeito hidrofbico - escondendo a maioria de seus segmentos alfa e/ou beta no interior, deixando exposto superfcie principalmente os trechos sem estrutura definida (chamados de alas); sua superfcie, portanto, de carter polar, e, por isso, a protena, como um todo, fica sendo solvel. As protenas globulares so todas solveis e encontram-se dissolvidas e mveis nos compartimentos intra ou extracelulares.

Os outros dois tipos de protena tambm organizam-se em funo do efeito hidrofbico. As protenas fibrosas organizam-se em feixes compactos geralmente com funo estrutural 6; como so insolveis, precipitam em meio aquoso. As protenas de membrana, como diz seu nome, encontram-se imersas na estrutura das membranas celulares, e sua forma se deve a esta intensa associao: trechos em alfa (ou beta) trespassam a regio hidrofbica da membrana (ver a seguir) e apenas as alas, hidroflicas, ficam expostas ao meio aquoso, dentro e fora da clula. Este tipo de protena fundamental para o tema abordado neste captulo, pois todos os carreadores e canais de membrana, bem como os receptores metabotrpicos, so protenas de membrana. LIPDIOS EM MEIO AQUOSO outro tipo de molcula anfiptica, essencial para compreendermos a vida como ela , so os lipdios anfipticos. Com uma extremidade polar (cabea) e outra apolar (cauda), tambm precisam articular-se coletivamente, em meio aquoso, para minimizar a energia do sistema, o que fazem separando-se em fases distintas (quando as quantidades so muito grandes), ou formando micelas ou vesculas com bicamada. Lipdios anfipticos com uma cauda tm uma geometria que favorece aglutinar-se em micelas, com as caudas reunidas no bojo de uma partcula, longe da gua, e as cabeas polares recobrindo-a, em contacto direto com a gua, tambm polar; a micela, portanto, embora no seja solvel, consegue assim manter-se suspensa em emulso sem precipitar. J
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lipdios de duas caudas no conseguem formar micelas estveis, preferindo organizar-se em lminas, dispondo-se lado a lado; como uma face dessa lmina necessariamente ser formada por caudas apolares, duas dessas lminas geralmente ocorrem justapostas, escondendo, assim, suas pores apolares do meio aquoso. Essa organizao pode constituir uma vescula revestida por com duas camadas concntricas ou bicamada lipdica, com o meio aquoso por fora e tambm no interior. Tal fenmeno natural est na origem das prprias clulas vivas, e tambm explica como so as membranas das organelas intracelulares, todas elas bicamadas lipdicas. A MEMBRANA CELULAR - O modelo atualmente aceito para a organizao tridimensional das membranas biolgicas foi formulado por Singer e Nicholson (1972), e conhecido como modelo do mosaico fluido (Figura 3). Este modelo destaca que, alm dos lipdios, abundam as protenas de membrana, distribudas em meio aos lipdios constituindo o mosaico. A palavra fluido descreve o fato de que, apesar da estabilidade estrutural das membranas em duas camadas lipdicas, todos os lipdios em cada camada, so livres para deslocar-se lateralmente, fazendo-o com grande desenvoltura e rapidez. As protenas integrais trespassam ambas camadas lipdicas, mas tambm podem mover-se lateralmente sem empecilhos; como so maiores, deslocamse com menos rapidez devido inrcia. Na prtica, as membranas biolgicas funcionam como um verdadeiro mar bidimensional, com completa liberdade de movimento nas duas dimenses de sua superfcie, mas com restrio (ainda que no absoluta) aos movimentos que levariam um lipdio

Podem ser feixes de alfa-hlices, beta-estruturas, ou de um terceiro tipo de nvel secundrio, o colgeno, uma tripla hlice com elevada resistncia mecnica.

(ou protena) a sair da membrana 7 perdendo-se no compartimento adjascente, ou aos movimentos ditos basculantes (flip-flop em ingls) em que um lipdio vai espontaneamente de sua monocamada para a outra atracvessando, com sua poro polar, a regio hidrofbica da membrana 8. Os lipdios so os principais componentes estruturais das membranas, enquanto que as protenas, os agentes funcionais. Tambm encontramos glicdios ligados a lipdios e protenas, geralmente na face extracelular (constituindo o glicoclice), geralmente conferindo uma identidade biolgica nica a cada clula, fator decisivo no reconhecimento antignico ou durante o desenvolvimento. Os lipdios constituem de 20 a 40% do peso das membranas, enquanto que a contribuio das protenas pode ir de 20 a 70% do peso. A maioria dos lipdios que constituem as membranas so fosfolipdios, mas tembm temos glicolipdios, esfingolipdios e esteris, como o colesterol. Este ltimo tem a funo de ajudar a manter afastados os fosfolipdios para que no passem da fase fluida chamada fase gel, desprovida de fluidez, o que mataria a clula, pois as funes das protenas de membranas so quase todas baseadas na sua mobilidade bidimensional e colises com outras protenas; em excesso, porm, deixa instvel a membrana, o que pode ser fatal
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em clulas de tecidos que costumam variar muito de volume de forma rpida (como a musculatura lisa dos vasos sangneos). FUNES DAS MEMBRANAS - A funo mais bvia das membranas compartimentalizar, separar dois ambientes qumicos, papel que desempenham perfeio, pelo menos com relao a molculas polares e/ou grandes. O livre-trnsito de molculas para dentro da clula poderia facilmente comprometer seu metabolismo ou, mesmo, envenen-la. Como a membrana tem um interior hidrofbico, molculas polares no conseguem penetr-la, a no ser que sejam muito pequenas e velozes, como o caso da gua (o que explica o efeito osmtico que promove variao do volume das clulas 9 ); molculas apolares, porm, passam pela matriz lipdica das membranas sem dificuldades. A maioria dos principais nutrientes bioqumicos, contudo, de molculas polares com razoveis dimenses, e estes precisam, definitivamente, entrar nas clulas; o mesmo vale para os ons, que, com sua carga eltrica inteira, tambm no conseguem passar diretamente pelo interior hidrofbico das membranas. Para estas substncias existem os carreadores (passivos ou ativos) e os canais inicos (de vazamento permanentemente abertos ou com porto), que, alm de deix-las passar, o fazem de forma altamente seletiva. Os mecanismos de transporte atravs da membrana, alis, dividem-se em duas classes, dependendo da
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A rigor os lipdios esto confinados, cada um, a sua monocamada, enquanto que as protenas integrais pertencem a ambas; os dois tipos de molcula, porm, sofrem restries a movimentos na terceira dimenso. Em estudos biofsicos de membranas, contudo, estes movimentos podem ser facilitados com o emprego de detergentes ou dos chamados agentes caotrpicos, inclusive com algum poder de seletividade molecular. 8 O movimento basculante, por ser termodinamicamente desfavorvel, ocorre muito raramente.

Hoje sabemos que o efeito osmtico no se deve apenas gua que entra diretamente pela matriz lipdica ou atravs dos canais inicos eventualmente disponveis, mas tambm se d por canais especiais dedicados, chamados de aquaporinas.

termodinmica que obedecem. Os mecanismos passivos, do-se espontaneamente, sem gasto de ATP, geralmente seguindo as leis da difuso 10, seguindo o gradiente qumico 11 de concentraes; os ativos, por outro lado, so realizados contra qualquer tendncia entrpica espontnea, ou seja, contra o gradiente, e, por esta razo, envolvem gasto de ATP. As principais classes de transporte atravs da membrana esto esquematizadas a seguir:
TRANSPORTE PASSIVO Difuso Simples: diretamente atravs da matriz lipdica (como molculas apolares ou a gua). Difuso Mediada: por canais seletivos (ons) ou carreadores (ions ou molculas). TRANSPORTE ATIVO Primrio: o carreador processa tambm o ATP, como o caso da Bomba Na+,K+ - -ATPase. Secundrio: o gasto de ATP ocorre indiretamente, para criar um gradiente qumico que acumula energia e, ento, mobilizada (como fazem os carreadores ativos Na+.glicose, por exemplo).

componentes da cadeia respiratria / fosforilao oxidativa, na mitocndria). Tambm atuam na transduo de sinais entre compartimentos (via receptores metabotrpicos) e podem at mesmo servir de substrato para reaes enzimticas 12.

IIIPotenciais Eletroqumicos
Aps toda a contextualizao que desenvolvemos acima, no ser muito difcil reunir toda a informao de forma a explicar como as clulas vivas, e, em especial, as clulas excitveis, estabelecem seus potenciais eltricos. Como vimos, todas as clulas vivas apresentam alguma diferena de potencial eltrico entre o citoplasma e o espao extracelular, sendo geralmente negativa do lado de dentro (potencial de repouso das clulas). Algumas clulas, porm, podem sair desta situao de repouso, propagando, ao longo de suas membranas, perturbaes que causam correntes inicas transmembrana por toda a clula e que podem chegar a inverter o perfil eltrico com relao ao repouso, chegando a deixar, por algum tempo, o citoplasma positivo com relao ao exterior: estas so as chamadas clulas excitveis, e incluem os neurnios, as clulas musculares e as clulas secretoras endcrinas; as demais, so chamadas de clulas no-excitveis. MEDINDO BIOPOTENCIAIS A medio de diferenas de potenciais eltricos no nvel das clulas nervosas
Por exemplo, a transformao do cido araquidnico (um fragmento de fosfolipdio) em prostaglandina, reao importante na resposta inflamatria.
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A compartimentalizao metablica ou inica, porm, no a nica funo das membranas, que tambm podem atuar organizando espacialmente complexos multienzimticos que precisam operar, por exemplo, em sequncia (exemplo,
A primeira lei de Fick diz que o fluxo do soluto difusvel depende da diferena de concentrao entre os compartimentos visitados, da rea da regio que comunica os dois compartimentos e da distncia percorrida, sendo que o sentido do fluxo da maior para a menor concentrao (do soluto). 11 A expresso gradiente qumico ser usada aqui significando a variao espacial da concentrao de uma determinada substncia; assim, seguir a favor do gradiente significa mover-se de onde est mais concentrado para onde est menos concentrado, exatamente como preconizado pela primeira lei de Fick (ver nota anterior).
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enfrenta duas dificuldades: (a) as correntes eltricas (ainda que no as voltagens) so muito pequenas, e (b) como so correntes inicas em meio aquoso, e as clulas, geralmente muito pequenas, o emprego de eletrodos metlicos muito ineficiente, pois tm elevadssima impedncia eltrica 13, a ponto de no conseguir ler nada. A soluo para contornar estes dois obstculos consiste em utilizar amplificadores de corrente eltrica e eletrodos de vidro, respectivamente. Embora medies extracelulares possam ser feitas com relativo sucesso utilizando-se eletrodos que consistem de um simples fio metlico revestido com material isolante (exceto a extremidade), as medidas intracelulares so muito mais delicadas e s foram possveis com o desenvolvimento dos microeletrodos de vidro (Figura 4) a partir da metade do sculo XX (anos 1940-1950), quando finalmente a tecnologia necessria tornou-se disponvel; somente a partir deste perodo foi possvel obter-se conhecimento detalhado acerca da natureza da atividade eltrica nos seres vivos. Os microeletrodos de vidro para medies intracelulares servem-se de uma vantagem descoberta por Plowe em 1931: se empalarmos uma clula viva com uma micropipeta de vidro utilizando um golpe brusco, sua membrana no se
Impedncia o termo tcnico para resistncia eltrica no caso de correntes alternadas, isto , correntes que variam (de intensidade e/ou sentido de fluxo de cargas), que exatamente a realidade quando medimos potenciais em clulas nervosas. Difere da resistncia eltrica convencional por que depende de forma complicada da frequncia da corrente e da prpria natureza do circuito, mas tambm obedece lei de Ohm (V diretamente proporcional a I, e V=RI) caso o condutor seja hmico, isto , quando a resistncia passagem da corrente eltrica no depende da prpria corrente.
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rasgar (nem o interior da clula vazar) e a micropipeta ficar integrada poro hidrofbica da membrana, servindo de canal de acesso ao interior da clula (Figura 4a). Preenchida com uma soluo eletroltica (por exemplo), e contendo um eletrodo metlico (geralmente de prata e revestido com AgCl) imerso nesta soluo, tal configurao permite medir com preciso as grandezas eltricas do interior da clula com relao ao exterior, onde posicionamos o chamado eletrodo de referncia. A mesma configurao serve para medies extracelulares, desde que o eletrodo de referncia (a outra polaridade) esteja posicionado em lugar distante. O orifcio na ponta do eletrodo, com cerca de 1 micrmetro de abertura (Figura 4b), permite uma certa continuidade do meio aquoso intracelular com o do interior do eletrodo, mas no necessariamente favorece que os ons fluam atravs dele 14. Esta continuidade favorece uma separao de cargas dentro do microeletrodo no momento em que este entra em contacto com o meio eletroltico que ir medir. Uma vez que geralmente o interior da clula negativo com relao ao exterior, os ons K+ dentro do eletrodo, positivos, sero atrados para a ponta do mesmo, e os ons Cl, negativos, sero repelidos para a outra extremidade, prximo a onde est o fio de prata: este, ento, perceber o entorno de cargas negativas (os ons Cl -) que fazem uma imitao precisa do interior negativo da clula. O fio metlico, que o verdadeiro eletrodo, afinal, faz a medio sem estar efetivamente dentro da clula, situao
Isso, porm, pode ser feito foradamente se aplicarmos uma ddp no fio metlico ali imerso, o que expulsar, por repulso eletrosttica, ions de mesma carga para o citoplasma da clula-alvo, porcesso conhecido como microiontoforese.
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em que a impedncia (resistncia) dificultaria um registro adequado 15. Neste ponto, devemos tentar responder pergunta: por que o citoplasma das clulas vivas geralmente negativo com relao ao espao extracelular? A aposta mais bvia a de que o fato se deve a um excedente de cargas negativas (ons solveis) naquele compartimento. Bastaria, ento, determinar que cargas negativas so estas e o potencial de repouso das clulas estaria explicado? Infelizmente a coisa no to simples. POTENCIAIS ELETROQUMICOS EMERGEM DA SEPARAO DE CARGAS RESULTANTE DE DIFUSO INICA Se os biopotenciais medidos so, efetivamente, potenciais eletroqumicos, devemos compreender um pouco melhor sua natureza. Potenciais eletroqumicos so medidas termodinmicas que refletem a energia resultante de fenmenos entrpicos e eletrostticos e se manifestam sempre que processos moleculares envolvem a difuso de ons em soluo. A complicao acima mencionada surge do fato de que as cargas negativas em excesso dentro das clulas, em particular dentro dos neurnios, constitui-se de protenas aninicas (com carga residual externa

negativa) no-difusveis 16; como sempre h um ou mais ons capazes de atravessar a membrana nas clulas e isso determinar o potencial eletroqumico atravs da membrana, necessrio conhecer o comportamento eltrico de ons difusveis. A Figura 5 mostra os dois tipos de equilbrio possveis com cargas difusveis movendo-se entre dois compartimentos separados por uma membrana dita semipermevel17, isto , permevel apenas a uma de duas ou mais espcies inicas em soluo. Na primeira situao (Figura 5 a e b), ilustramos o equilbrio qumico verdadeiro, que depende apenas da concentrao da espcie difusvel; no exemplo mostrado, o soluto o K+ (mas poderia ser de outra carga ou, mesmo, eletricamente neutro) e, aps difundir-se atravs da membrana semipermevel, atinge o equilbrio com concentraes iguais dos dois lados, situao em que permanece enquanto no for gasta energia para modific-la. importante notar que ao chegar neste equilbrio os movimentos dos solutos no cessam, pois esses so
Seria absurdo que fossem difusveis, pois protenas citoplasmticas so geralmente to grandes que se a membrana permitisse sua livre passagem ... seria intil como barreira seletiva: tudo passaria. O trnsito de protenas s possvel mediante complexos processos que envolvem alm de componentes da membrana, a prpria dinmica do citoesqueleto, a exocitose (ou endocitose). Os mecanismos de transporte transmembrana s atuam com molculas relativamente pequenas (ou ons, que so menores), e, ainda assim, o fazem de forma seletiva, isto , transportam apenas aquelas molculas reconhecidas estereoespecificamente (ver item II Funes das Membranas, acima). 17 Por definio, uma membrana semipermevel ideal permevel apenas a uma das espcies inicas em soluo nos dois compartimentos. Na prtica, essas membranas so muito difceis de fabricar (geralmente so de cermica) e s funcionam idealmente nos primeiros minutos dos experimentos, mas o princpio aqui mostrado continua vlido.
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A causa disso que o eletrodo, se fosse apenas um fio cortado na extremidade, teria que (a) ser revestido por alguma resina isolante para no causar curto circuito na hora do empalamento, e (b) somente a seco circular da extremidade estaria livre para o contacto eltrico: como uma rea muito pequena e as cargas no so eltrons livres, mas, sim, ons em soluo, no h rea suficiente para que estes ons se acumulem junto quela regio e ali renam a carga total real a ser medida. A impedncia (resistncia) eltrica imensa, da ordem dos gigaohm (109 ohm).

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causados pela agitao trmica das molculas de gua 18; o que cessa o movimento lquido (no sentido matemtico do termo) de solutos de um lado a outro e vice-e-versa. Como os movimentos aleatrios prosseguem, possvel at que algum on acabe indo para o outro lado criando momentaneamente uma nova, embora pequena, assimetria de cargas, mas tal situao ser muito passageira, pois o sistema rapidamente retornar situao de equilbrio. Alis, esta a prpria definio termodinmica de equilbrio 19 , um estado que no varia com o tempo pois est em um mnimo de energia, um estado para o qual o sistema sempre retorna caso flutue (espontaneamente) para longe dele. Como dissemos, equilbrios qumicos verdadeiros como o do exemplo acima, dependem somente da concentrao do soluto difusvel, sendo indiferente carga eltrica. A presena de cargas eltricas, porm, introduz mais um nvel de complexidade no sistema pois h mais um tipo de interao para se levar em conta. Como cargas eltricas podem atrair-se ou repelir-se mutuamente, as situaes em que cargas mveis de sinais opostos coexistem tendem a atingir somente equilbrios em que as cargas ficam estavelmente distribudas de forma assimtrica. A situao exemplificada na Figura 6 (c e d), em que a carga (negativa), no permevel, retm, do seu lado, um excedente de cargas positivas difusveis (o K +), fazendo com que as medies eltricas acusem voltagens diferentes de zero; este equilbrio com
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cargas assimtricas chamado de equilbrio eletroqumico de GibbsDonnan. Note-se que apesar de uma maior quantidade de cargas positivas ficar concentrada do lado esquerdo, este compartimento ter uma carga eltrica lquida negativa, determinada precisamente pela carga (negativa) dos nions no difusveis que ficaram a descoberto, sem quem as neutralize daquele lado. Na seo seguinte veremos como calcular exatamente o valor desse potencial eltrico atingido no equilbrio eletroqumico de Gibbs-Donnan utilizando a equao de Nernst, que, alm de prever o valor quantitativo exato deste potencial, determina tambm seu sinal (negativo no compartimento da esquerda). A EQUAO DE NERNST CALCULA O POTENCIAL ELETROQUMICO GERADO POR CARGAS MVEIS ASSIMETRICAMENTE DISTRIBUDAS Como o on potssio o principal on difusvel na maioria das clulas, sejam elas excitveis (como os neurnios) ou no (como a glia), o sentido em que tende a deslocarse ao atravessar a membrana, bem como a propenso com que o far, depender da diferena de potencial eletroqumico entre os dois lados da membrana. Esta DDP, por sua vez, ser determinada por trs fatores: (a) a diferena de concentrao do soluto nos dois lados da membrana, (b) a carga eltrica (ou valncia) da molcula solvel, e (c) a diferena de voltagem entre os dois lados da membrana (o chamado potencial transmembrana). Quando a diferena de potencial eletroqumico entre os dois lados for zero (o chamado potencial de inverso), o fluxo lquido de cargas atravs da membrana ser tambm zero, ou seja, h uma situao de equilbrio eletroqumico. Se a espcie difusvel consistir de apenas um on, podemos usar
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Os movimentos aleatrios e colises ente solutos e/ou molculas de gua s cessariam, de fato, na temperatura de zero absoluto, isto , em 0 (zero) graus Kelvin. 19 Esta a definio de equilbrio estvel, existindo tambm equilbrios do tipo instvel e indiferente.

a equao derivada em 1888 pelo fsicoqumico alemo Walter Nernst (1) para predizer teoricamente este potencial eletroqumico:
RT Von X = [X]e ----- . ln ( ------- ) zF [X]i

previsto pela equao de Nernst (1) acima.

(1)

IV O Potencial de Repouso das clulas no-excitveis


O POTENCIAL DE REPOUSO DAS CLULAS NO-EXCITVEIS UM POTENCIAL DE EQUILBRIO ELETROQUMICO DE GIBBSDONNAN Tanto no meio aquoso (extracelular) que banha a maioria das clulas vivas reais, quanto em seu citoplasma (intracelular), encontramos diversos ons potencialmente mveis (i.e., difusveis atravs da membrana), que dependem, para s-lo, da existncia de canais transmembrana especficos. Macromolculas eletricamente carregadas, contudo, predominam apenas no interior das clulas, como o caso das protenas aninicas, incapazes de atravessar a membrana. Nas clulas gliais 21, nosso exemplo de clula no-excitvel, apenas o K+ permevel atravs da membrana, geralmente saindo da clula seguindo seu gradiente de concentrao. Na Figura 7a vemos a situao da glia, com sua tpica distribuio assimtrica dos trs principais ons inorgnicos (K+, Na+ e Cl)22 alm das protenas aninicas, que fazem o papel de nions no-difusveis (ver Figura 5d 23): fica evidente, portanto,
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onde R a constante universal dos gases ideais (8,314570 J K-1 mol-1), T a temperatura em graus Kelvin, z a valncia do on em questo 20, F a constante de Faraday (96,485 C mol-1). O logaritmo natural (base e=2,7172...) da razo das concentraes [X] extracellar (e) e intracelular (i) do on mvel em questo. A Figura 6 ilustra o tipo de situao em que um potencial eletroqumico emerge em funo da distribuio assimtrica de um on difusvel (o outro no permevel). Na primeira situao (Figura 6a), com dois compartimentos isolados, apesar de haver concentraes diferentes do sal dissolvido (KCl) em cada lado, em nenhum compartimento h diferena lquida no nmero de cargas positivas e negativas: para cada carga positiva h uma negativa, e o soma final zero, garantindo a eletroneutralidade do compartimento. Se posicionarmos eletrodos nos dois compartimentos, mediremos uma diferena de potencial igual a zero, isto , V=0. Na segunda situao (Figura 6b), separamos os dois compartimentos com uma membrana semipermevel - no caso permevel apenas s cargas positivas, e assim obtemos um movimento lquido dessas cargas para o lado direito at atingir um novo equilbrio no qual temos uma distribuio assimtrica de cargas. A V medida, consequentemente, ser diferente de zero e seu valor pode ser

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Por exemplo, K+ z= +2.

z = +1, Cl-

z = -1, Ca++

As clulas gliais, juntamente com os neurnios, so os principais constituintes do SNC - mas, diferena desses, no so capazes produzir potenciais de ao. 22 Denominados, respectivamente, potssio, sdio e cloreto (e no cloro, como erradamente se usa). 23 Que, alis, semelhante situao mostrada na figura 6b; observe-se, entretanto, que se tratam de dois exemplos hipotticos mostrando situaes

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que o potencial de repouso da glia o prprio potencial de equilbrio eletroqumico de Gibbs-Donnan para o K+. Isto confirmado pelo fato de que a maioria das clulas gliais exibe um potencial de repouso de cerca de 75 mV, que exatamente o potencial previsto pela equao de Nernst (1) para uma distribuio inica anloga quela registrada no axnio (do neurnio) gigante da lula, aqui tomada como representativa dos valores que ocorrem nas clulas gliais (ver tabela I). PERFIL DA DISTRIBUIO INICA DENTRO E FORA DAS CLULAS - A Tabela I, a seguir, mostra uma distribuio dos principais ons que tpica da maioria das clulas. Fica claro que, enquanto o potssio concentra-se dentro das clulas, o espao extracelular uma soluo salina mais concentrada na qual predominam os ons sdio e cloreto; as protenas aninicas concentram-se maciamente dentro das clulas e o clcio um ction divalente raramente encontrado no citoplasma no repouso eltrico da clula (veremos, adiante, como isso serve para controlar uma infindade de processos). A tabela mostra os exemplos especficos do axnio gigante de neurnio de lula, um invertebrado marinho, e nas clulas de msculo esqueltico de mamferos, ambas clulas excitveis (e por isso mais bem estudadas). notvel a semelhana entre os perfis inicos dessas duas clulas, e, embora os valores absolutos possam diferir, propores semelhantes so mantidas. Para os fins deste captulo, assumiremos que as concentraes mostradas para o caso das clulas de msculo esqueltico so representativas daquelas encontradas em neurnios de
extremamente simplificadas: a figura 7a mostra uma situao mais prxima ao real.

vertebrados (de fato, so muito parecidas). Apesar de somente dispormos de dados precisos referentes a clulas excitveis, estes valores so semelhantes aos encontrados nas clulas noexcitveis em geral; assumiremos, por exemplo, que os dados do axnio da lula so representativos de valores encontrados nas clulas gliais. CANAIS DE VAZAMENTO SELETIVOS PERMITEM QUE O POTSSIO SAIA DA CLULA - A permeao dos ons K+ se faz atravs de canais proteicos permanentemente abertos, os chamados canais de vazamento 24. Como todo transportador transmembrana, estes canais so altamente seletivos e somente deixam permear uma espcie inica, no caso o K+. A seletividade de canais inicos no pode ser feita por estereoespecificidade, como fazem os carreadores transmembrana, at porque os ons tm, todos, um formato esfrico semelhante... a seletividade, no caso determinada por dois fatores: (a) o tamanho da abertura do prprio canal protico, pelo qual outros ons semelhantes no tm espao para passar (por exemplo, o Na+), e (b) a presena de cargas opostas intracanal que favorecem a passagem do potssio (de carga positiva) e repelem ons de carga oposta. Assim, o potssio escapa pelos seus canais de vazamento (permanentemente abertos) at que a atrao eletrosttica do excedente de cargas negativas intracelulares no-difusveis (predominantemente protenas aninicas),
Estes canais passivos distingem-se daqueles ativos, chamados de canais com porto (ver item VI, mais adiante), que podem regular seu estado aberto/fechado. Estes canais, porm, podem ser bloqueados por agentes naturais ou sintticos, geralmente em situaes nofisiolgicas.
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que vai se acumulando no interior, detm o processo. A difuso do K+ para fora da clula um fenmeno autolimitante, pois ao atingir um equilbrio estvel, isto , um estado de energia mnima (equilbrio termodinmico de Gibbs-Donnan, no caso), o K+ o faz de forma completamente espontnea, sem gasto de ATP em nenhuma etapa. Este sistema em equilbrio responde a qualquer perturbao do perfil inico ajustandose automtica e espontaneamente, reorganizando os gradientes sempre sem consumir energia (ATP). Seus nicos de -

terminantes so (a) o gradiente de concentrao do K+, (b) seus canais de vazamento, e (c) a grande concentrao intracelular de protenas aninicas nodifusveis (abreviadas como PAND na Figura 7a). Os gradientes dos demais ons, mesmo que desigualmente distribudos dentro e fora da clula, no afetam tal equilbrio, pois so ons que no se difundem atravs destas membranas: por definio, portanto, no entram no clculo da equao de Nernst, que, alis, s permite computar o gradiente de concentrao de uma nica espcie inica mvel.

Tabela I
Distribuio tpica de ons dentro e fora das clulas vivas on
(concentraes em mM)

Axnio (de neurnio) da Lula


Intracelular (mM) Extracelula r (mM)
Potencial de Nernst (mV)

Msculo Esqueltico de Vertebrado


Intracelular Extracelular (mM) (mM)
Potencial de Nernst (mV)

400 50 52 385

20 440 560 -

- 75 + 55 - 60 *

155 12 4,2 **

4 145 123 -

- 98 + 67 - 90 -*

Na Cl

nion nodifusvel Ca
++

0,4

10

+81

10 M

-7

1,5

+ 129

Fontes: Shepherd, 1994; Kandel et al., 1999; Hille, 2001. (*) No calculvel pela equao de Nernst, pois no difusvel; (**) dado no localizado, mas que pode ser assumido como semelhante ao medido no axnio de lula para os efeitos deste captulo. Alguns valores so, na verdade, estimativas baseadas na eletroneutralidade entre ctions e nions. Fica evidente tambm que estas distribuies no asseguram o equilbrio osmtico entre o interior dessas clulas e o meio externo.

A MEMBRANA PLASMTICA, PALCO CENTRAL DA BIOELETRICIDADE - A Figura 7b mostra, em maior detalhe, como efetivamente se distribuem as cargas dentro e fora da clula noexcitvel em seu repouso eltrico: o

excedente de cargas negativas internas (as protenas aninicas) distribuem-se prximas membrana em sua face citoplasmtica, e as cargas positivas que se difundiram para fora (os ons K+), por sua vez, distribuem-se prximas

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membrana em sua face extracelular. A negatividade interna exibida pela clula (seu potencial de repouso) causado por este excedente de cargas negativas internas no-difusveis, que no est neutralizado uma vez que as cargas positivas que o fariam saram da clula obedecendo lei de Fick. Os ons potssio, nicos para os quais h canais de vazamento na glia, difundiram-se at estabelecer-se um equilbrio eletroqumico de Gibbs-Donnan, que j explicamos acima. Porm, mesmo saindo da clula, as protenas aninicas confinadas do lado de dentro da membrana continuam exercendo alguma atrao eletrosttica sobre este excedente externo de ons K+, fazendo com que no se afaste muito da membrana. Estes ons, ento, ficam distribudos nas proximidades dela, como que formando uma espcie de nvoa de cargas. Olhada em perspectiva (Figura 7b), isto confere membrana plasmtica as propriedades de um capacitor eltrico, que (a) retm cargas opostas frente a frente (b) separadas por um material dieltrico (isolante), porm (c) atradas mutuamente por seus campos eltricos. Estes campos eltricos, inclusive, so de grande intensidade, pois a membrana, apesar de isolante, pouco espessa (cerca de 20nm), e convm ter sempre isto em mente quando pensamos no que so capazes de fazer as molculas que integram o mosaico fluido das biomembranas 25. A principal propriedade
Isso quer dizer que todos os lipdios bem como todas as protenas intramembrana esto imersas em um forte campo eltrico. Como vrias dessas molculas possuem cargas eltricas as protenas, principalmente fcil entender que seu comportamento ser influenciado por este campo eltrico. Esta propriedade decisiva para compreendermos a dinmica dos chamados canais com porto dependentes de voltagem, que estudaremos na seo VI Potencial de Ao.
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de um capacitor a de que ele funciona com uma reservatrio de cargas eltricas, prontas para serem disponibilizadas e realizar trabalho: de fato, o gradiente assimtrico de cargas eltricas estabelecido pode mobilizar outras cargas de diferentes formas. Por exemplo, no caso do potencial de ao (que estudaremos na prxima seo), este gradiente impulsionar, em parte, a entrada brusca e macia de ons sdio para o interior da clula, despolarizando-a. A membrana plasmtica est, portanto, no centro dos principais eventos causadores dos potenciais eltricos de repouso e de ao. A Figura 7b tambm sugere outra consequncia importante desta membrana como palco: em cada um dos compartimentos a maioria das cargas eltricas tem alguma carga oposta em suas vizinhanas, de modo que o grosso do compartimento eletroneutro. Voltagens como a da glia (-75mV) no so desprezveis, mas notvel que possam ser geradas atravs das membranas celulares mediante a mobilizao de to pequeno excedente de cargas26, atestando a grande economia de recursos deste processo biolgico, caracterstica que certamente ajudou a selecion-la ao longo da evoluo da vida.

V O Potencial de Repouso das clulas excitveis


AS CLULAS EXCITVEIS SO PERMEVEIS A MAIS DE UM ON As clulas excitveis (capazes de realizar potenciais de ao) - como os neurnios, as clulas musculares e as
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A rigor, no mais que algumas dezenas de milhares de ons trocam de lado no processo.

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endcrinas so caracterizadas primariamente por serem permeveis a mais de um on. Nelas, alm do K+, tambm o Na+ e o Cl- passam pela membrana atravs de canais seletivos prprios para cada tipo. O que vai diferenci-los apenas a taxa de vazamento que cada on exibir, ou seja, sua permeabilidade, fator que determinado pelo nmero de canais disponveis: quanto mais portas de sada, mais fcil ser para um on vazar. Nestas clulas, apesar do cenrio mais complicado que no caso da glia, o K+ ainda o principal on difusvel, uma vez que tem a maior permeabilidade, e, como est mais concentrado dentro das clulas, tende a sair atravs de seus canais de vazamento da mesma forma que faz nas clulas no-excitveis. A Tabela II, abaixo, mostra o perfil de permabilidades destes trs ons:

Tabela II
Permeabilidade relativa dos ons: repouso eltrico dos neurnios
Espcie inica K
+

Na

Cl

Permeabilidade
(repouso)

0,04

0,45

Na+ mais permevel atravs da membrana e (b) como est mais concentrado fora da clula, ele tender a entrar na clula. Parte das cargas positivas (K+) que saram deixando de neutralizar protenas aninicas do citoplasma, ser substituda por cargas igualmente positivas 27, os ons Na+, e, deste modo, o citoplasma no ficar to negativo... em consequncia, mais ons K+ podero sair. O processo se repetiria iterativamente, como que erodindo os gradientes inicos, at que, com o passar do tempo, as concentraes de K+ ficariam iguais dentro e fora, em um simulacro de equilbrio qumico verdadeiro, situao em que a equao de Nernst preveria V=0 (ver Figura 5b). Neste caso, com gradientes nulos, a DDP entre os compartimentos tambm seria zero, e o potencial de repouso desapareceria. Como no vemos este tipo de eroso dos gradientes inicos ocorrendo nos neurnios, somos obrigados a reconhecer que algum outro processo est atuando no sentido de manter os gradientes estveis, constantes. Este processo, ao contrrio do que observamos nas clulas no-excitveis, no poder dar-se espontaneamente, pois deixado fluir livremente, o que acontecer a eroso acima descrita. Dever ser, portanto, um processo ativo, com gasto de energia. A BOMBA Na+,K+-ATPase O CARREADOR ATIVO QUE MANTM OS GRADIENTES INICOS NO POTENCIAL DE REPOUSO DOS NEURNIOS. Quem faz isso a Bomba Sdio-Potssio ATPase,
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O POTENCIAL DE REPOUSO DAS CLULAS EXCITVEIS UMA SITUAO DE NO-EQUILBRIO PORQUE H MAIS DE UM ON DIFUSVEL. O problema que em sendo permevel tambm ao sdio, as clulas nervosas jamais alcanaro qualquer tipo de equilbrio eletroqumico. Explicamos: o K+ sai da clula e tende ao j descrito equilbrio eletroqumico de Gibbs-Donnan; porm, (a) como o on

Os ons sdio e potssio, apesar do nmero atmico e da massa atmica diferentes, tm, ambos, a mesmssima carga eltrica +1, ou seja, do ponto de vista eltrico so indistingveis entre si.

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descoberta em 1957 por Jens Skou (que lhe deu o prmio Nobel de qumica de 1997). Esta complexa estrutura proteica localizada nas membranas de quase todas a clulas vivas um carreador de transporte ativo (ver item II, acima). Recordemo-nos que ativo, em linguagem biolgica, significa envolvendo gasto de ATP 28. Desta forma, este carreador liga-se a 3 ons Na+ na face citoplasmtica (alm do ATP, claro), e 2 ons K+ na face extracelular; quando o ATP hidrolisado em ADP e Pi (fosfato inorgnico), a energia qumica liberada, e o carreador sofre uma extensa mudana conformacional que carreia os ons citoplasmticos para fora, e, simultaneamente, os ons extracelulares para dentro da clula (Figura 8). Note-se que todos os cinco ons foram transportados contra seus gradientes qumicos, isto , foram levados do compartimento em que esto menos para o em que esto mais concentrados, situao termodinamicamente impossvel de ocorrer espontaneamente, da a necessidade de ser um processo realizado ativamente. A Figura 9 mostra uma viso geral de todos os componentes do potencial de repouso das clulas excitveis, ou seja, (a) os trs ons (K+, Na+ e Cl-) com suas diferentes permeabilidades (tabela II), (b) as protenas aninicas no-difusveis junto face citoplasmtica da membrana (PAND, na figura), e (c) as bombas Na+,K+-ATPase, que mantm os gradientes inicos. Apesar de no ser uma situao de real equilbrio eletroqumico,
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o resultado final muito parecido com aquele mostrad na Figura 7b e valem as mesmas idias ali mostradas: (a) o pequeno excedente de cargas inicas de cada lado da membrana concentra-se nas proximidades dela, dentro (PAND) e fora (K+), (b) a maior parte do volume de cada compartimento , grosso modo, eletroneutra, e (c) tudo isto produzido de forma muito econmica, com a mobilizao de relativamente poucas cargas. QUEM O PRINCIPAL RESPONSVEL PELO POTENCIAL DE REPOUSO DOS NEURNIOS, AFINAL? Se o potencial de repouso (PR) emerge da distribuio assimtrica dos ons dentro e fora da clula, fcil ver que a prpria bomba sdio-potssio contribui para essa DDP j que sua estequiometria envolve a retirada de 3 cargas positivas e a reposio de apenas 2; a cada ciclo da bomba, a clula ficar um pouco mais negativa do lado de dentro (funo eletrognica da bomba). Significa isto dizer que a bomba o principal responsvel pela manuteno do potencial de repouso dos neurnios? Na verdade, no, pois, como vimos, sua causa muito parecida com a do potencial de repouso de clulas noexcitveis, ou seja, o vazamento do K+ rumo ao seu equilbrio de Gibbs-Donnan (com seu consequente potencial V de Nernst); ocorre que como tambm h permeabilidade para o Na+, este on se difunde atravs da membrana no sentido contrrio daquele e acaba fazendo as vezes do K+ no citoplasma (j que do ponto de vista eltrico, so idnticos). Esta situao de um equilbrio frustrado , na verdade, um no-equilbrio, que, como vimos, se no contraposto ativamente (pelas bombas), desorganizar completamente os gradientes inicos. Ainda assim, o K+ principal agente
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ATP: adenosina 5-trifosfato, molcula descoberta por Lohman em 1929, armazena e transporta energia qumica livre em duas ligaes fosfato de alta energia, recupervel mediante sua hidrlise. O mecanismo de sntese do ATP foi decifrado por Paul Boyer e John Walker, que dividiram o prmio Nobel de qumica com J. Skou em 1997.

causador deste potencial fora-deequilbrio dos neurnios, uma vez que ainda o on mais permevel (como mostra a tabela II, o K+ chega a ser 25 vezes mais permevel que o Na+ no repouso eltrico destas clulas): quem mais permevel, comanda o processo. A EQUAO GHK CALCULA O POTENCIAL ELETROQUMICO GERADO POR TRS TIPOS DE ONS DIFUSVEIS ASSIMETRICAMENTE DISTRIBUDOS Ento podemos calcular o valor do potencial de repouso com a equao de Nernst? Na verdade, no, porque muito embora o K+ domine ao ser o mais permevel, ele no o nico on a passar pela membrana e isto deve ser levado em considerao no clculo do PR. A equao de GoldmanHodgkin-Katz 29 (2) mais completa pois contempla os trs ons e suas diferentes permeabilidades:
RT PK[K ]e + PNa[Na ]e + PCl[Cl ]i VGHK = ---- .ln (----------------------------------------) + + F PK[K ]i + PNa[Na ]i + PCl[Cl ]e
+ + -

do cloreto os ndices e e i aparecem trocados, o que d conta da carga (negativa) deste on. NAS CLULAS EXCITVEIS SO OS ONS CLORETO QUE SE DISTRIBUEM PASSIVAMENTE Dissemos que os ons Cl- eram tambm permeveis atravs da membrana utilizando canais especficos (com cargas intracanal positivas) e que sua contribuio precisa ser leva em conta no clculo do PR mediante a equao GHK, mas o que fazem este ons, afinal? Estes ons tendem a entrar passivamente por seus canais de vazamento seguindo seu gradiente qumico, mas, como o interior da clula negativo, eles sofrero repulso eletrosttica. A rigor, as concentraes de Cl- dentro e fora da clula sero determinadas por um equilbrio eletroqumico de GibbsDonnan que `simplesmente uma verso s avessas do mesmo equilbrio exibido pelo potssio nas clulas gliais: este on, portanto, distribui-se passivamente em funo do perfil eltrico definido, em ltima instncia, pelos outros dois ons permeveis. Como est em equilbrio, sempre que suas concentrao variar, voltar rpida e espontaneamente aos valores mostradas na tabela I. Teria no mximo um papel coadjuvante tamponando rapidamente flutuaes que ocorressem no PR destas clulas. Apesar de serem os ons diferencialmente permeveis os principais causadores do PR das clulas excitveis (como prova a equao GHK), no est errado dizer que este papel feito predominantemente pelos ons sobre os quais a bomba ATPase atua ativamente (i.e., o K+ e o Na+). Em clulas que possuem transporte ativo de cloreto30, por
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(2) onde os termos tm o mesmo significado que na equao (1): R a constante universal dos gases ideais (8,314570 J K-1 mol-1), T a temperatura em graus Kelvin, e F a constante de Faraday (96,485 C mol-1). Dentro do logaritmo natural aparecem as concentraes extra (e) e intracelular (i) de cada on, cada qual ponderada (multiplicada) por sua permeabilidade relativa P (ver Tabela II). Notem que onde aparece a concentrao
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E equao GHK foi derivada a partir dos estudos em torno da teoria do campo constante realizados por Goldman (1943) e Hodgkin e Katz (1949), sendo, na verdade, uma generalizao da equao de Nernst, o que pode ser comprovado simplesmente fazendo-se PNa=PK=0.

Para o cloreto, existem diversos tipos de transporte ativo secundrio (aqueles em que o

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exemplo, uma vez que este on estaria sendo ativamente bombeado, ele tambm poderia ser considerado causa do PR ali registrado. PERMEABILIDADE DIFERENCIAL: QUAL O TAMANHO DOS ONS HIDRATADOS DE K+ E DE Na+ ? No esqueamos que os ons que se difundem no meio aquoso esto, em funo da solvatao que os suspende em soluo, envolvidos por algumas camadas de molculas de gua 31. Isso implica que seu tamanho real em soluo sempre maior que o do simples tomo ionizado n, e o tamanho da luz do canal deve adequar-se a isto. Deste modo, os canais de vazamento do K+ so permeveis apenas a este on. O on Cl-, apesar de ter o mesmo tamanho que o K+ quando hidratado, no passa por este canal porque as cargas seletoras intracanal (negativas, no caso) oferecem resistncia por repulso eletrosttica. J os canais de vazamento do Na+ (que tambm tm cargas seletoras intracanal negativas) geralmente so tambm permeveis ao K+, o que se deve ao fato de o on hidratado de Na+ ser maior que o do K+ tambm hidratado, e onde passa um, passa o outro 32. claro
ATP no processado diretamente na prpria molcula carreadora), mas a comprovao de uma verdadeira bomba Cl--ATPase ainda controversa (Gerencser & Zhang, 2003). 31 Cada on possui uma carga eltrica inteira (de 1,6.10-19 C). Esta carga, positiva no caso do potssio e sdio, atrai eletrostaticamente a poro negativa das molculas de gua, que, como vimos, so polares (logo, formam dipolos eltricos). Como a carga eltrica de cada plo da molcula de gua muito pequena (no uma carga inteira) cada on consegue atrair muitas molculas de gua simultaneamente, criando, assim, uma verdadeira esfera de hidratao ao seu redor. 32 Este fato surpreendente se considerarmos que o tomo do sdio (Z=11, A=23) , isoladamente, menor que o do potssio (Z=19, A=39); mas se lembrarmos que, apesar dessa diferena, ambos

que pelos canais de vazamento para o sdio, o potssio, se passar, ter de fazlo fluindo na direo oposta do fluxo do sdio em contrafluxo, que entra na clula seguindo seu gradiente qumico, o que no garante grande permeabilidade a ele por esta via alternativa 33.

VI Potenciais de Ao: a sinalizao propagada nos neurnios


A pergunta natural que se segue : por que um sistema to complexo de causao do PR nas clulas excitveis? Se o objetivo apenas possuir um PR, bem, a multido de clulas no-excitveis tambm os tm, mas de forma muito mais simples e econmica, mediante um equilbrio eletroqumico e sem qualquer custo energtico (ATP) para a clula. A opo por um sistema mais complexo e custoso deve ter algo a ver com o fato de apenas estas clulas conseguirem fazer potenciais de ao. DEFININDO ALGUNS TERMOS Sempre que uma clula sai da voltagem (negativa) de repouso eltrico passando a valores menos negativos (inclusive rumando a valores positivos), dizemos que a clula est sendo despolarizada; quando, pelo contrrio, a clula fica mais negativa que no repouso, dizemos que
tm a mesmssima carga eltrica +1, o que vai determinar quantas molculas de gua sero atradas para envolver o on em soluo ser o raio do tomo em questo, pois a fora eltrica, como bem sabemos, inversamente proporcional ao quadrado da distncia (Fe ~ q1.q2/r2): assim, o tomo pequeno ter a maior esfera de hidratao, e o grande, a menor. 33 Este movimento em contrafluxo tambm contribui para a seletividade do canal ao on Na+, pois como so maiores (hidratados) no do muita chance aos menores, como o K+, que acabam literalmente atropelados.

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est hiperpolarizada34. A despolarizao , de fato, a reduo progressiva da separao de cargas que era mantida no repouso eltrico do neurnio; j a hiperpolarizao corresponde a um aumento na separao de cargas 35. Podemos promover artificialmente a variao da voltagem de uma clula estimulando-a eletricamente (o que a despolariza) ou, se quisermos ter um controle mais preciso da resposta neuronal, injetando cargas eltricas em seu citoplasma mediante 36 microiontoforese . Para registrarmos potenciais de ao (PA), temos de colocar eletrodos junto ao (externo) ou dentro do (interno) axnio do neurnio desejado, pois nesta poro da clula que os PA se propagam, geralmente indo do soma s regies telodndricas, isto , aos terminais, que podem ser sinpticos (sobre outras clulas) ou livres. Os eletrodos intracelulares faro registros mais claros

e de maior amplitude, como o mostrado na Figura 1037. Como axnios so pequenos e delicados (e os V medidos, de valor reduzido), no difcil entender porque os primeiros estudos, entre os anos de 1930-1950, foram todos realizados em axnios de neurnios de lula gigante (ver Figura 12), invertebrado marinho que possui um dos maiores neurnios conhecidos no reino animal (da no ser exagero cham-los de gigantes). Alguns desses axnios gigantes so macroscpicos, chegando a medir quase um milmetro de dimetro, dimenses que contornam quaisquer dificuldades tcnicas advindas do tamanho e da amplificao eletrnica do sinal (ver detalhe na Figura 12). SE DESPOLARIZARMOS UM NEURNIO, PODEREMOS OU NO TER UM POTENCIAL DE AO - Se promovermos a despolarizao de um neurnio por uma das tcnicas acima mencionadas, observaremos que a V - que parte de valores tpicos do repouso eltrico (no exemplo da figura, -70mV) muda para valores menos negativos. Se as despolarizaes forem de pouca monta, a asceno da curva se dar at um certo ponto, e a V logo retornar aos valores do repouso (repolarizao). A Figura 10 mostra dois desses pequenos picos de despolarizao (disparos frustrados). Note-se que, neles, a asceno (despolarizao) se d mais ou menos no mesmo tempo que a descida (repolarizao), dando a estas curvas um
As curvas de registro de PA sero diferentes conforme o eletrodo seja intra ou extracelular, pela simples razo de que cada um parte de uma voltagem diferente (e de sinal oposto) e muda para a outra, retornando a seguir, para os valores de repouso. Uma medio extracelular do PA mostrado na figura 10 seria como uma imagem invertida do mesmo, com amplitude menor.
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A clula que est exatamente no potencial de repouso poderia ser denominada polarizada, mas essa terminologia nunca , na realidade, empregada. 35 Enquanto despolarizaes so capazes de promover PA no neurnio, hiperpolarizaes somente produzem PEs, que so respostas passivas que, como dissemos, afastam a clula do seu limiar de disparo, ou seja, hiperpolarizaes no produzem respostras celulares ativas. 36 Tcnica em que injeo de cargas feita por um microeletrodo de vidro muito parecido ao descrito na III1, onde o fio metlico usado no para registrar, mas para aplicar uma DDP que o deixa com uma carga positiva ou negativa; deste modo, o microeletrodo expulsa pela sua extremidade aberta (ver figura 4b) por repulso eletrosttica os ons de mesma carga, injetandoos no citoplasma. Se o eletrodo ficar positivo, injetar cargas positivas (K+, por exemplo), que faro a clula despolarizar; se ficar negativo, injetar cargas negativas (como o Cl-), que hiperpolarizaro a clula.

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aspecto simtrico. Estes picos so, inclusive, relativamente lentos, e so, na verdade, respostas passivas da membrana chamadas de potenciais eletrotnicos (por vezes denominados potenciais sinpticos). A intensidade (amplitude) destes PE proporcional intensidade dos pulsos de corrente que os criaram, isto , eles nem sempre so idnticos entre si numa mesma clula. Quando, porm, a despolarizao produzida for elevada o suficiente a ponto de ultrapassar um certo valor (especfico de cada clula) denominado limiar (ver seo VI), o eletrodo intracelular registrar um verdadeiro PA, semelhante ao mostrado na Figura 10. O PA, quando

surge, tem sempre a mesma amplitude (para uma mesma clula) e exibe suas diferentes fases (ver diagrama abaixo) sempre com a mesma durao. O pico de ultrapassagem o momento (breve) em que o potencial da membrana ultrapassa o limite da V=0 e fica momentaneamente positivo. A curva evidentemente assimtrica, com uma asceno (despolarizao) rpida e uma descida (repolarizao) mais lenta e com certas peculiaridades, como o fato de que, antes de atingir o repouso, ficar hiperpolarizado por algum tempo. As fases do PA (com suas subfases) mostradas na figura, so, ento, as seguintes:

V < limiar Despolarizao V > limiar

Despolarizao parcial: Potencial Eletrotnico (Sinptico) Despolarizao completa: Potencial de Ao

pico de ultrapassagem (V>0)


Potencial Ps-Despolarizao

Repolarizao
Potencial Ps-Hiperpolarizao

A fase de repolarizao do PA mais complexa e demorada que a de despolarizao (da a assimetria) e inclui (a) uma demora em retornar ao valor do repouso o chamado potencial psdespolarizao38, e (b) uma fase em que fica temporariamente mais negativa que o repouso o potencial pshiperpolarizao39.
38

Que antigamente se chamada de ps-potencial negativo, nomenclatura hoje em desuso. 39 Este, por sua vez, denominava-se antigamente ps-potencial positivo, nomenclatura no mais usada. Positivo referia-se a particularidades da montagem experimental que fazia com que estes valores aparecessem (arbitrariamente) acima de zero.

NO PERODO REFRATRIO UM SEGUNDO PA NO PODE SER DISPARADO DURANTE O PRIMEIRO - Paralelamente ao registro do PA, observamos o que chamamos de Perodo Refratrio, uma fase em que a clula exibe menor excitabilidade: se tentarmos forar um segundo PA enquanto o primeiro ainda estiver em andamento, nada acontecer. O perodo refratrio inicia-se logo aps o estmulo que provoca a despolarizao que leva ao PA, e encerra-se no meio do potencial pshiperpolarizao. No se trata, porm, de um limitante muito rigoroso, pois ele

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tambm se divide em duas subfases: o perodo refratrio absoluto, durante o qual nenhum tipo de estmulo consegue produzir um segundo evento de PA; a seguir, vem o perodo refratrio relativo, etapa em que um novo PA pode ser provocado se a intensidade do estmulo despolarizante for mais alta que a normalmente usada para causar um PA, e este segundo evento se acumula sobre o anterior. O POTENCIAL DE AO UM FENMENO TUDO-OU-NADA Pelo menos dois motivos podem ser elencados at aqui para justificar a caracterizao do PA como fenmeno tudo-ou-nada. O primeiro o fato de ele s se dar quando a despolarizao ultrapassa o valor do limiar, caso contrrio, no acontece ( tudo, ou nada). O segundo motivo sugerido pelo perodo refratrio, a resistncia do neurnio em iniciar um segundo evento aps iniciado o primeiro, sugere que cada PA, de alguma forma, consome todos os recursos disponveis na clula, no podendo ser estimulado novamente enquanto o primeiro evento no se concluir. O QUE CAUSA O PA? Como dissemos acima, as clulas excitveis utilizam um sistema mais complexo e custoso para estabelecer seu PR, e a razo disso que, assim fazendo-o, estas clulas esto em total prontido para mudar seu potencial. No final da seo IV discutimos a membrana polarizada como um capacitor pronto para fornecer energia para deslocar cargas de lado a lado. Em 1938, K. S. Cole e H. J. Curtis registraram, em um osciloscpio, um potencial de ao sobreposto a um registro (simultneo) de condutncia eltrica atravs da membrana, mostrando pela primeira vez que a explicao

fisiolgica do PA passava por fluxos inicos cambiantes. No repouso eltrico, em particular no caso das clulas excitveis (que so mantidas assim com gasto de ATP), os trs ons podem atravessar a membrana atravs de seus canais de vazamento, mas suas permeabilidades esto ajustadas para que o K+ ainda seja o on dominante, saindo da clula; o Na+, que entra na clula, o faz em muito menor taxa que o K sai (ver tabela II), e o resultado disso que as clulas excitveis nunca atingem um equilbrio eletroqumico de GibbsDonnan. Pelo contrrio, ficam fora do equilbrio, mantidas ativamente em um estado que se denomina estado estacionrio, que pode parecer-se a um equilbrio termodinmico, mas no . O terceiro on, o Cl-, que no transportado ativamente contra seu gradiente qumico, distribui-se passivamente. Neste cenrio, o Na+ represado fora da clula tem no um, mas dois bons motivos para entrar na clula se puder faz-lo: entraria (a) seguindo seu gradiente qumico, pois est menos concentrado no citoplasma, e, como se no bastasse, entraria (b) seguindo seu gradiente eltrico, pois o interior da clula , no repouso, negativo do lado de dentro. Ou seja, o Na+ tem uma grande avidez por entrar na clula, e, se puder faz-lo, entrar causando uma extensa despolarizao, que pode ou no promover um PA dependendo do limiar da clula. Resta saber como um on 25 vezes menos permevel que o K+ no PR pode passar, subitamente, a ser muito mais permevel (Tabela III, a seguir). OS CANAIS COM PORTO PODEM SER ATIVADOS E CAUSAR A VARIAO DO POTENCIAL ELTRICO DAS CLULAS Se um grande nmero de canais adicionais for disponibilizado, por exemplo, ao on Na+,
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ele poder entrar e far exatamente o que mostra a Figura 10 na fase de despolarizao do potencail de ao. Isto exatamente o que fazem os chamados canais com porto (gated channels), ou CCPs. Os CCPs envolvidos no PA podem ser abertos por dois tipos bsicos de estmulo, (a) a variao da voltagem transmembrana, ou (b) a ligao de uma molcula transmissora, respectivamente denominados, canais com porto dependentes de voltagem e canais com porto ativados por ligante 40. Geralmente esse ltimo tipo de CCP o responsvel pelos potenciais sinpticos gerados na rvore dendrtica do neurnio, enquanto que o primeiro tipo de CCP ajudar a propagar o potencial de ao ao longo da membrana axonal.

quantidade de CCPs seletivos para o K+, ambos aguardando em prontido para serem recrutados coletivamente e produzir o PA. A Figura 11a mostra esquematicamente algumas diferenas entre estes dois CCPs, com destaque para o fato de que o CCP do Na+ tem dois portes (o 1o chamado de porto de ativao, e o 2o, de inativao), enquanto que o do K+ s tem um 41. A CURVA DO POTENCIAL DE AO DETERMINADA PELA CINTICA INDIVIDUAL DE CADA TIPO DE CCP Outra diferena importante entre estes dois CCPs que o CCP do Na+ rpido para abrir (logo, abre primeiro), enquanto que o CCP do K+ lento. A ativao destes dois tipos de CCPs em momentos subsequentes, portanto, cria uma verdadeira coreografia temporal que ilustrada pela curva da Figura 10 (mais dados da Tabela IV, a seguir). O CCP do Na+ tambm se inativa rapidamente fechando seu porto de inativao logo aps ter aberto o de ativao; isso garante que no fique aberto muito tempo, pois j vimos quo vido para entrar na clula o on Na+. O preo desta rapidez que ficar inativo por um certo tempo, geralmente bem maior que o tempo que ficou aberto, at ser reengatilhado (o que s pode ser feito movendo-se os dois portes na ordem inversa). Assim, no incio do PA, a permeabilidade do Na+ aumenta cerca de 500 vezes de forma sbita, para ento
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Tabela III
Variao da permeabilidade dos ons no potencial de ao dos neurnios
Espcie inica K
+

Na

Cl

Pot. Repouso

0,04

0,45

Despolarizao

20

0,45

Repolarizao

100?

0,04

0,45

Volta ao repouso

0,04

0,45

Nas membranas das clulas excitveis h um grande nmero de CCPs seletivos para o Na+, e tambm boa
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Estes so os dois tipos mais importantes para compreender o PA, mas no so os nicos que existem. Por exemplo, nas clulas sensoriais existem canais com porto ativveis por outros estmulos, por exemplo, estmulo mecnico.

Foge ao escopo deste captulo detalhar qual a real natureza destes portes. As evidncias sugerem canais bastante parecidos com os de vazamento, mas dotados de certos estados conformacionais fechados intreconversveis que respondem aos estmulos de abertura. A representao da figura 11a , de fato, altamente esquemtica.

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rapidamente voltar ao valor de repouso (pela inativao dos CCPs). A + permeabilidade do K leva mais tempo para aumentar, e s est plenamente disponvel quando a do Na+ j voltou ao normal. Os valores estimados das permeabilidades relativas esto mostrados na Tabela III, acima. E os valores de volta ao repouso s so alcanados quando findo o potencial pshiperpolarizao.

Tabela IV
CCP do Na+
2 portes

Diferenas entre os CCPs de Na e de K

CCP do K+
1 porto

Rpido para abrir-se

Lento para abrir-se / mais lento p/fechar-se

Inativa-se

No se inativa

Precisa reengatilhar-se
( processo lento )

Apenas fecha-se
( mais lento )

Conhecendo-se estes canais dinmicos, podemos construir a explicao das fases do PA em funo de suas caractersticas: A Figura 11b mostra a cintica diferenciada de cada um destes CCPs, deixando claro que a fase de despolarizao causada basicamente pelo fluxo entrante de Na+, enquanto que a repolarizao deve-se ao fluxo (adicional) de sada de K+. Como eles se abrem em tempos diferentes, isso explica cada etapa do PA. A asceno (despolarizao) rpida e dura enquanto estiverem abertos os CCPs de Na+. O pico de ultrapassagem se deve a um excesso de ons Na+ que, no entusiasmo
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referido, adentraram o citoplasma. A repolarizao, por sua vez, tem duas etapas: a primeira rpida, com a V retornando rapidamente do pico de ultrapassagem para valores negativos, o que se explica pelo trmino da abertura dos CCPs de K+, que, saindo, ajudam a repolarizar rapidamente a membrana; a segunda bem mais lenta, e se subdivide nos j mencionados potenciais psdespolarizao (a demora em chegar V do repouso) e ps-hiperpolarizao (o perodo em que a V fica hiperpolarizada. Ambas subfases caracterizam-se pela demora em retornar ao PR, e podem ser explicadas pela mesma lentido intrnseca ao CCP de K+ (ver Tabela IV, acima). importante recordar mais uma coisa: aps a abertura dos dois tipos de CCP, os gradientes inicos estaro completamente desorganizados, o que exigir o bombeamento ativo de ambos, o que implica em um aumento da demanda sobre as bombas Na+,K+-ATPase prexistentes 42. A demora, conhecida como potencial ps-despolarizao, portanto, explica-se pelo fato de os CCP de K+ estarem abertos e serem bastante lentos para se fechar (mais que para abrir), de modo que o excesso de ons K+ que pode escapar conflita com o esforo feito pelas bombas Na+,K+-ATPases, ou seja, enquanto no estiverem totalmente fechados, estes CCPs atuaro desfazendo parte da reconstruo dos gradientes inicos pelas bombas. A lentido em fechar-se tal que, inclusive, mesmo aps as bombas terem conseguido
Ao contrrio de que muitos pensam, as bombas no passam a trabalhar mais em funo da necessidade, sendo apenas recrutadas, pelos prprios gradientes desorganizados, dentro de uma populao pr-existente de bombas que estava em prontido mas inoperante, em uma verso da lei de ao de massas que governa o recrutamento estequiomtrico de enzimas citoplasmticas nas vias metablicas.
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trazer a membrana a um potencial igual ao do repouso original, ainda restam muitos CCPs de K+ abertos, o que explica a hiperpolarizao da ltima subfase da repolarizao (potencial pshiperpolarizao). A COMPREENSO DOS CANAIS INICOS DEVE-SE AO ESFORO DE GRANDES CIENTISTAS - As Figuras 12 e 13 ilustram um pouco da histria da descoberta e compreenso do papel destes canais com porto. O passochave foi a inveno do mtodo de fixao de voltagem por Kenneth Cole (Figura 12) em 1946 (o mesmo que em 1938 medira o potencial de ao juntamente com uma variao concomitante da condutncia inica, abrindo caminho para as descobertas posteriores). Com isso estava driblada a dificuldade tcnica de estudar os CCPs dependentes de voltagem, pois o sistema, com dois eletrodos, um dentro e outro fora do axnio (da lula gigante, claro), permitia contrabalanar qualquer resposta autoestimulada da membrana mantendo os potenciais fixados em qualquer valor desejado. Esta tcnica est na raiz dos trabalhos de Hodgkin e Huxley (Figura 12), que elaboraram um modelo terico para explicar o PA - o chamado modelo HH que propunha canais inicos com cinticas diferentes e previa a forma exata e a velocidade de propagao medidos do PA; posteriormente, os dois, juntamente com Bernard Katz (Figura 12), realizaram uma srie de experimentos decisivos que comprovaram o completo acerto da teoria, num dos grandes feitos da histria da cincia no sculo XX. Katz seguiria seu caminho estudando as bases da neurotransmisso qumica que ocorre na extremidade do axnio percorrido com um PA. O modelo de Hodgkin-Huxley , ainda hoje, a base de muito do que

sabemos sobre o funcionamento dos CCPs dependentes de voltagem. A compreenso mais detalhada destes e outros CCPs dependentes de voltagem (como os diversos tipos existentes de canais para Clcio, por exemplo) precisou aguardar outro avano tcnico, proposto por E. Neher e B. Sakmann em 1976 (Nobis de Fisiologia de 1991): a tcnica da fixao de membrana, onde uma micropipeta consegue (literalmente) sugar uma pequena extenso da membrana plasmtica que contm uns poucos CCPs e, ali, control-la de forma semelhante ao que se faz na fixao de voltagem (ou de corrente), s que em muito menor escala. Com alguma sorte, consegue-se isolar canais nicos e estudar seu comportamento individual (ver Figura 13), evidenciando sua natureza estocstica. DENDRITOS, ESPINHOS E SINALIZAO LOCAL - Nas clulas neurais reais, geralmente o potencial de ao iniciado no cone de implantao do axnio, em uma regio conhecida como zona de gatilho, onde abundam os CCPs de Na+ prontos para disparar (ver Figura 16). nesta regio que o limiar atingido, e a deciso, tomada. Tal computao analgica feita mediante o somatrio de diversos pequenos potenciais sinpticos oriundos de diferentes pontos da rvore dendrtica do neurnio, que onde so coletadas as sinapses que vm de milhares de outros neurnios. A Figura 14 evidencia esta organizao polarizada (agora no sentido funcional, no apenas eltrico) em que a extremidade do soma / dendritos recebe as entradas, computando seu somatrio, e a outra, do axnio / terminaes, envia a sada; as entradas so potenciais sinpticos (eletrotnicos), de natureza

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passiva, e a sada, potenciais de ao, ativos. Em cada sinapse 43 sobre a rvore dendrtica, a poro ps-sinptica, posicionada sobre uma estrutura subcelular especializada chamada de espinho dendrtico (Figura 15), o potencial de ao chega e desencadeia uma srie de eventos neuroqumicos que resultaro em sua excitao (despolarizao) ou inibio (hiperpolarizao). Em suma, a chegada do PA abre canais de clcio dependentes de voltagem na terminao (telodendro) ou poro pr-sinptica. A entrada destes ctions divalentes aciona diversas respostas, entre elas, a mobilizao e exocitose de vesculas contendo os quanta de neurotransmissores qumicos caractersticos daquele neurnio. Os neurotransmisores, por sua vez, invadem a fenda sinptica e atingem certos alvos moleculares (pelos quais tm alta afinidade) na poro ps-sinptica, os chamados receptores. Os receptores podem ser, ou canais inicos propriamente ditos (receptores ionotrpicos), ou mediadores de transduo transmembrana sem nenhum tipo de transporte em particular (receptores metabotrpicos); ambos tipos, porm, acabam por produzir direta ou indiretamente uma variao no potencial eltrico local nas proximidades daquela sinapse. Se os receptores levarem despolarizao local, so ditos excitatrios; caso contrrio, se a hiperpolarizarem, so ditos inibitrios. Por exemplo, canais com porto para o Na+ ativados por neurotransmissor
As sinapses aqui descritas so todas sinapses qumicas. No tratamos das chamadas sinapses eltricas (junes comunicantes) que, a rigor, fazem com que duas clulas adjascentes sejam uma s do ponto de vista eltrico (compartilhando 100% dos seus fluxos inicos) o sinccio, ainda que sejam metabolicament independentes.
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(digamos, o glutamato) so receptores ionotrpicos excitatrios, pois despolarizam a regio ps-sinptica (o mesmo acontece com CCPs de Ca++ ativados por ligante); por outro lado, canais com porto para o Cl- ativados por ligante (por exemplo, o GABA) so receptores ionotrpicos inibitrios, pois hiperpolarizam a regio ps-sinptica (aqui tambm ocorreria o mesmo se fossem CCPs de K+ ativados por ligante) 44 . INTEGRAO NEURAL PELA PARTICIPAO COMPLEMENTAR DE DOIS TIPOS DE POTENCIAIS, OS PE E OS PA - Cada um destes efeitos despolarizao ou hiperpolarizao - se traduz em um pequeno potencial passivo (eletrotnico) que se propaga de forma decremental ao longo da rvore dendrtica e do soma neuronal at encontrar outro(s) e, com ele(s), somar-se. Estes potenciais, como j dissemos, tambm so chamados de sinpticos e so um exemplo de sinalizao local, em contraposio sinalizao propagada representada pelos PA. Os PE, quanto mais longe tiverem de deslocar-se, mais amplitude perdero pelo caminho e menos chance tero de contribuir somao neural. A tabela V, abaixo, resume estas vrias propriedades dos PE em contraposio s dos PA. No se trata de que um deles seja a resposta certa (o PA), e a outra, sua mera ausncia (o PE), como alguns livros-texto parecem sugerir quando omitem a descrio dos PE: ambos os tipos de potencial tm propriedades importantssimas que permitem exercer
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Os receptores metabotrpicos apenas disparam cascatas de sinalizao intracelulares (com seus 2os e 3os mensageiros) que indiretamente modulam e favorecem (ou no) a abertura de determinados CCP, ativados por ligante ou dependente de voltagem.

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funes altamente especializadas na poro neuronal onde surgem, funes que inclusive se complementam. Assim, os PE (ou potenciais sinpticos), que se propagam passivamente na membrana, apesar da desvantagem de serem decrementais, so os nicos potenciais que podem (a) codificar fidedignamente um sinal com amplitude proporcional intensidade do mesmo, e (b) adicionar-se efetivamente a outros potenciais semelhantes, e, desta forma, tentar atingir o limiar de disparo do neurnio, emprestando todo um significado funcional a sua pequena contribuio. Tudo isto feito na poro dendrtica/somtica do neurnio (Figura 14), em particular nesta verdadeira floresta de antenas que so os espinhos dendrticos (Figura 15), ancoradores das sinapses e sede dos principais eventos plsticos relacionados com funes to nobres como aprendizado e memria 45. J os PA, a sinalizao propagada, ativa, no permitem aditividade, uma vez que so tudo-ou-nada, nem servem para codificar informao sensorial, pois a amplitude do sinal sempre a mesma para um neurnio, independe da intensidade do estmulo 46; esta desvantagem, contudo, seu trunfo, pois, por suas propriedades, os PA so o melhor tipo de sinal para viajar longas distncias sem perdas decrementais de amplitude, o que comprometeria a comunicao ao longo da clula. Como axnios longos so uma constante para integrar respostas sensoriais e comportamentos em animais de mdio e
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grande porte, necessrio que exista um fenmeno ultra-estvel como este para levar a informao de forma confivel de uma extremidade a outra. A PROPAGAO DO PA NO AXNIO UM FENMENO COLETIVO DOS CCPs A Figura 16 mostra como se propaga um PA ao longo de um axnio. Neste caso, o exemplo mais simples de um axnio nomielinizado, onde o PA tem de se propagar ponto a ponto ao longo de toda a superfcie. Quando a zona de gatilho integra o somatrio de potenciais sinpticos que ali chegaram e detecta que ultrapassou-se o limiar de disparo da clula, uma grande quantidade de CCPs de Na+ abre-se iniciando uma verdadeira cascata de auto-ativao ao longo do axnio: a rigor, a abertura dos primeiros CCPs deixa entrar localmente grande quantidade de ons Na+, invertendo o potencial da membrana naquela regio; em consequncia, as linhas de induo do campo eltrico existente entre as cargas eltricas opostas internas e externas mudam de sentido, e, como falamos no final da seo IV, inevitvel que quaisquer molculas carregadas dentro da membrana (como protenas constituintes de canais, por exemplo) e nas proximidades dessa inverso do potencial eltrico sejam influenciadas. Na verdade, esse campo eltrico faz com que se abram CCPs dependentes de voltagem nas adjascncias da membrana, promovendo a despolarizao nestas vizinhanas. O processo se repete iterativamente, sucessivamente, at que toda a superfcie crivada de CCPs dependentes de voltagem disponveis tenha sido percorrida. O sentido do PA ser do soma ao telodendro, pois inicia-se na zona

Uma excelente reviso deste tema encontra-se em Lamprecht e LeDoux, 2004 (Nature Reviews in Neuroscience, 5: 45-54). 46 Isto no quer dizer que no se possa codificar informao utilizando-se PA: apenas tero de ser cdigos diferentes. Por exemplo, padres temporais de disparo, ou padres espaciais, ou combinaes destes.

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gatilho e normalmente prossegue rumo aos terminais 47 (ver Figura 14). O PA propaga-se ao longo do axnio em um sentido apenas (dito antergrado), portanto. A razo pela qual normalmente o PA no anda para trs (nem retornando ao soma, nem naturalmente voltando pelo axnio rumo ao soma 48) o prprio perodo refratrio de que falamos (Figura 16): os CCPs de Na+ necessrios despolarizao naquela direo esto temporariamente indisponveis para se abrir novamente. Isto inclui tanto aqueles canais que foram ativados pela passagem de PEs decrementais, quanto os que foram ativados pela passagem de um verdadeiro PA no-decremental. Fica claro que um nico CCP no pode explicar toda a dinmica da cascata de ativao auto-sustentada de uma clula inteira: trata-se, na verdade, de um fenmeno coletivo com CCPs. Alm do PA, outros fenmenos que s se pode compreender considerando-se muitos CCPs sendo recrutados em sequncia, incluem (a) o limiar de disparo do neurnio, (b) o perodo refratrio, (c) o PA em plat (por exemplo, do msculo cardaco), a (d) acomodao de membrana (somao temporal) e a (e) somao espacial. Estes dois ltimos, so exemplos tpicos de computaes feitas entre diferentes potenciais sinpticos em tempos e/ou sobre distncias diferentes, e explicam muito do que fazem os potenciais sinpticos quando se
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combinam: como a despolarizao rpida, vrias despolarizaes s podero se somar se acontecerem dentro de uma janela temporal restrita 49. ANALOGIA DO PA COM O EFEITO DOMIN - Mas o que se propaga ao longo do axnio, afinal? Correntes inicas? Somos tentados a fazer uma analogia com a conduo de eltrons ao longo de um condutor metlico. Nada mais equivocado. Se lembrarmos que as correntes inicas se do sempre atravs da membrana, pelos CCP, o que est de fato se propagando uma perturbao em cadeia, de carter auto-sustentado, e no uma corrente inica longitudinal. A abertura em sequncia de novos canais adjascentes leva o PA adiante despolarizando seus arredores, o que abre novos canais, o que despolariza a regio adjascente, o que por sua vez abre novos canais mais adiante, e assim at percorrer toda a superfcie. O fenmeno propagante lembra o efeito domin, em que cada pea s precisa ter energia para derrubar a pea vizinha, e esta se encarregar da seguinte, e assim por diante. Nenhuma pea precisa ter fora para derrubar todas as demais, mas, mesmo assim, todas acabaro sendo derrubadas, basta dar tempo ao tempo. Ou seja, este fenmeno no pode ser instantneo, sempre levar algum tempo para transcorrer, logo, ter uma certa velocidade de conduo 50 (ou de propagao).

Algumas vezes, porm, detectam-se PAs que retornam ao soma e ascendem pela rvore dendrtica, modulando os diferentes CCPs dependentes de voltagem ali presentes (especialmente os diversos tipos de CCDVs canais de clcio dependentes de voltagem) o que interfere com a computao que ali ser executada. 48 Situao que, porm pode ser produzida artificialmente, gerando os chamados PAs retrgrados.

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Quando isto no acontece, temos o fenmeno da acomodao de membrana mesmo que o sistema registre uma soma de potenciais capaz de superar o limiar 50 A terminologia importante: PAs so conduzidos (ou propagam-se) ao longo dos axnios, e no transmitidos. Transmisso o que fazem os neurotransmissores na fenda sinptica.

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O ALTO PREO ENERGTICO E METABLICO DE PAs EM AXNIOS NO-MIELINIZADOS Axnios como o da Figura 16 so chamados de amielnicos e ocorrem principalmente em organismos mais simples, como os invertebrados, sendo pouco frequentes nos vertebrados. A maioria dos axnios dos vertebrados revestida por uma capa isolante, a mielina, constituda por clulas gliais. Nos axnios do sistema nervoso perifrico, a glia que reveste a das clulas de Schwann, e cada trecho revestido, entre dois nodos de Ranvier, uma clula independente (at por que podem ser axnios muito longos). No SNC, quem reveste os axnios so os oligodendrcitos e uma mesma clula pode projetar vrios, seno todos, os trechos de mielina. A bainha de mielina uma aquisio recente na histria da vida, e veio trazer diversas vantagens, em especial, um aumento na velocidade de conduo, pois esta ocorrer de forma saltatria, como que pulando de nodo de Ranvier a nodo de Ranvier (Figura 17). Na verdade, em cada nodo de Ranvier a conduo idntica, ponto a ponto, quela descrita na Figura 16 para o axnio no-mielinizado, apenas h uma maior concentrao de CCPs de Na+ (e de K+, alm de bombas) em cada nodo, como se ele fosse uma pequena zona de gatilho. O resultado disso que a despolarizao de um nodo consegue alcanar o nodo seguinte. J dissemos que o PA no uma grande corrente inica longitudinal, mas em funo dos ons que entram e saem em cada ponto a cada momento, h, de fato, pequenssimas correntes locais, inclusive longitudinais (apenas que por uma distncia insignificante, at a regio adjascente da membrana veja na Figura 16). No caso do PA no axnio mielinizado estas
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correntes locais tm de avanar at o prximo nodo (Figura 17). Mas continua valendo a observao de que o PA no uma nica corrente inica longitudinal ao longo do axnio, como se fosse uma corrente eltrica ao longo de um fio condutor. O PA saltatrio tambm se propaga em um nico sentido, pois vai deixando a membrana para trs em perodo refratrio (Figura 16), mas tem um preo menor a pagar que o PA ponto a ponto, pois somente precisa de CCPs e bombas (e ATP para aliment-las) nos nodos de Ranvier. Comparativamente, axnios no-mielinizados precisam de uma quantidade muito maior de protenas de membrana, ou seja, muito mais canais, CCP, bombas, etc: isso significa clulas maiores com um ncelo grande e muitos ribossomos, enfim, para abrigar a grande fbrica de protenas de que necessitar. Como ter mais bombas (e far mais sntese proteica), consumir mais ATP, logo esta clula tambm precisar de mais e/ou maiores mitocndrias para dar conta desta demanda. Juntando tudo, neurnios amielnicos esto condenados a serem neurnios grandes; isto explica o axnio gigante da lula, ele prprio, amielnico. Os neurnios dos vertebrados, ao se mielinizarem, no apenas ganharam velocidade, o que importante adaptativamente para lidar com corpos membros distais grandes e articulados, mas tambm puderam miniaturizar suas clulas neurais em funo da economia na sntese protica e na gerao de ATP. Como essa segunda vantagem foi explorada pelos seres vivos? Com clulas menores, podia-se colocar muito mais neurnios onde antes s cabiam uns poucos. Isso favoreceu a complexificao das redes neurais e o surgimento de comportamentos novos e cada vez mais sofisticados. Podemos arriscar dizer que a mielina est na raiz da grande inteligncia

Tabela V
Diferenas entre os potenciais eletrotnicos e os de ao POTENCIAL ELETROTNICO * POTENCIAL DE AO

Forma

simtrica

Assimtrica

Propagao

decremental

no-decremental (tudo-ou-nada) Independente do estmulo (tudo-ou-nada) no-aditivo (tudo-ou-nada) ativa / auto-sustentvel

Amplitude

dependente do estmulo

Aditividade

aditivo (somao temporal e/ou espacial) passiva

Natureza

Localizao

dendritos & soma

Axnio

Funo

codificao & integrao neural

comunicao propagada fidedigna

(*) Sinnimo de potencial sinptico para os fins deste captulo.

exibida pelos vertebrados, e, em particular, pelos mamferos conhecidos como humanos. A grande capacidade mental exibida pelos seres humanos pode dever-se, em boa parte, a este pequeno mas eficente aperfeioamento evolutivo. DIFERENTES TIPOS DE POTENCIAIS, DIFERENTES FUNES COMPLEMENTARES A Tabela V, logo acima, resume as principais diferenas existentes entre os dois tipos de potenciais que podem surgir em funo da despolarizao de um neurnio, os potenciais eletrotnicos (ou sinpticos), passivos, e os potenciais de ao, ativos.

VII Atividade Eltrica em Massa do SNC: Bases do EEG


A maioria dos registros eltricos mencionados at aqui neste captulo so bastante focalizados, referindo-se atividade de um, ou - quando muito alguns neurnios disparando conjuntamente. Estes potenciais so chamados de unitrios (referindo-se a um nico neurnio) ou multiunitrios (medindo a atividade de vrios neurnios). So, em sua maioria, ferramentas primariamente dedicadas a estudos bsicos, e raramente so empregadas para fins de diagnstico, at porque sua interpretao muito

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complexa e difcil de padronizar / codificar a ponto de poder ser usada no contexto clnico. Por outro lado, como a maioria dos procedimentos diagnsticos ou teraputicos no atual campo da neurologia clnica opera geralmente no nvel de sistemas e subsistemas funcionais do SNC, evidente que registros muito focalizados no tm, por ora, muita utilidade prtica. por isso que as aplicaes clnicas de registros eletrofisiolgicos centram-se basicamente no EEG, que (a) um registro de atividade eltrica em massa do SNC, e, portanto, tem maior probabilidade de refletir a operao de sistemas e subsistemas funcionais, e (b) exibe padres de atividade regulares (ritmos de sincronizao coletiva), de carter predizvel e com alta correlao funcional 51 . Estes registros de massa so, como a expresso usada sugere, registros de grandes populaes neuronais e so denominados potenciais de campo. Os potenciais de campo podem ser do tipo CC (corrente contnua)52, geralmente de flutuao lenta, ou do tipo CA (corrente alternada), potenciais cuja polaridade alterna-se com frequncias mais ou menos regulares, situao tpicamente encontrada no EEG. TIPOS DE REGISTRO DE POTENCIAIS DE CAMPO - Posicionando-se um par de eletrodos sobre a superfcie do couro cabeludo, podemos registrar o chamado Eletroencefalograma (EEG). Se os eletrodos tiverem acesso direto massa nervosa (durante um procedimento cirrgico, por exemplo), teremos o Eletrocorticograma (ECoG) quando estes
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Embora muitas destas correlaes estejam mal ou apenas fragilmente demonstradas, e menos ainda possam ser consideradas, com segurana, relaes causais. 52 Ver item I, Voltagem e Corrente Eltricas.

estiverem posicionados sobre o crtex cerebral, ou, se abaixo deste, o Eletrograma. Com o Estereoeletroencefalograma (EEEG) podemos investigar a atividade eltrica de ncleos profundos utilizando mtodos estereotxicos. Registros de Potenciais Provocados (PPs)53 e Potenciais Relacionados com Eventos (PREs) so enfoques complementares da enorme importncia na clnica e em diversos procedimentos cirrgicos atuais. Podemos acrescentar o Eletromiograma (EMG), outro registro bioeltrico de apoio em diferentes procedimentos. Todos estes tipos de registro so a simples representao grfica da evoluo temporal da diferena de potencial eltrico (DDP) entre os eletrodos de registro. Esta DDP pode variar continuamente no tempo, e apresentar diferentes amplitudes e/ou freqncias em funo da regio estudada. Com o emprego de macroeletrodos externos (superficiais), porm, registramos principalmente a atividade da substncia cinzenta (i.e., da massa de neurnios). A atividade eletroencefalogrfica notavelmente persistente, ainda que possa manifestar-se de diferentes formas segundo a situao: alerta/viglia, excitao/estresse, sonolncia, sono, anestesia, crise epilptica ou coma. Apenas na morte cerebral aparece o que conhecido como silncio eltrico. Foi o mdico ingls Richard Caton que, em 1875, descobriu a atividade bioeltrica cerebral utilizando um galvanmetro e registrando a atividade cortical em coelhos e macacos. Em 1913 PrawdwiczNeminski descreveu o ECoG no co utilizando eletrodos cirrgicos. At o final dos anos 20, o mximo que podia ser feito eram esses registros intracerebrais, pois ainda no havia forma
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Do ingls Evoked Potentials (EPs).

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de se medir potenciais to pequenos como aqueles que se medem no EEG normal. Foi o neuropsiquiatra Hans Berger quem demonstrou, entre 1925 e 1929, que a atividade bioeltrica podia ser captada sobre o couro cabeludo do homem, com procedimentos no-invasivos e indolores. Berger tambm descreveu vrias das atividades eltricas normais (nopatolgicas), em especial um ritmo de 10 ciclos/s (10 Hz) que hoje leva seu nome; demonstrou, ademais, as variaes do EEG durante o sono e em algumas patologias. Em que pese seus achados terem sido inicialmente recebidos com ceticismo, pouco depois, em 1934, Adrian e Mathews, realizando experimentos com equipamentos mais sofisticados, comprovaram amplamente aquelas descobertas. A partir dos anos trinta, o EEG j era uma tcnica de amplo emprego clnico. No EEG, os dois principais parmetros so a amplitude e a frequncia. A amplitude dos potenciais captados na superfcie do crnio depende de vrios fatores: por exemplo, da localizao, dimetro e distncia entre os eletrodos, da prpria frequncia da onda, do estado funcional e mesmo do estgio de maturidade neural do indivduo. Em adultos, por exemplo, vale a chamada Lei do EEG: a amplitude do EEG funo decrescente de sua frequncia. As amplitudes registradas em humanos na superfcie do crnio so da ordem dos microvolts, variando de 50 a 200 V conforme o tipo de atividade e a regio cortical estudada. As frequncias, por sua vez, podem variar entre 0,5 e 100 Hz e h bons motivos para classific-las por bandas de frequncia (ver Tabela V, abaixo). Ainda que tenham um aspecto visual relativamente diferenciado (ver Figura 18), a distino entre estas bandas algo bastante arbitrrio, uma vez que o

espectro de frequncias , de fato, contnuo. DISTINO ENTRE BANDAS DE FREQUNCIAS E RITMOS - Um Ritmo cerebral identificado quando as ondas de potencial possuem uma frequncia e forma relativamente constantes durante um certo tempo. Ritmo no sinnimo de Banda de Frequncia, conceitos que, por vezes, so confundidos. possvel detectarmos certas ondas posicionadas dentro de uma determinada banda, mas estas podem no caracterizar um verdadeiro ritmo pois sua frequncia pode no se manter constante e, alm disso, podem estar associadas com ondas de outras bandas. incomum encontrarmos ritmos, por exemplo, dentro da banda Beta pois, ali, as ondas de diferentes frequncia costumam mesclarse de forma irregular. ORIGEM DAS ONDAS DO EEG Sugere-se que, em funo da amplitude eltrica observada, os neurnios piramidais seriam os principais responsveis pelas ondas do EEG, especialmente em sua regio dendrtica, onde se realizam as macias computaes com seus padres sinpticos cambiantes que se integraro para decidir se cada neurnio em particular disparar ou no seu potencial de ao. Neurnios piramidais fazem sentido tambm se considerarmos que (a) so as maiores clulas excitveis no SNC, (b) comunicam-se utilizando o glutamato, o principal neurotransmissor excitatrio no SNC, e (c) suas sinapses so palco dos principais eventos plsticos estudados na atualidade, como a potenciao de longa durao (LTP) e a depresso de longa durao (LTD), ambos fenmenos subjascentes a funes enceflicas

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decisivas, como, por exemplo, o aprendizado e a memria. quase consenso entre os neurofisilogos que eventos intracelulares geram correntes inicas no meio extracelular que, por sua vez, somam-se algebricamente e de forma linear. Tais

correntes, juntamente com uma profuso de potenciais sinpticos estabelecidos em inmeros espinhos dendrticos (incluindo todo um repertrio de respostas eltricas destas estruturas), contribuem para fazer emergir os padres oscilatrios que conhecemos como EEG.

Tabela V
Bandas de Frequncia das Ondas do EEG
Banda Alfa ()
Ondas de Berger

Frequncias de 8 a 13 Hz de 13 a 40 Hz (50Hz?) de 0,5 a 3 Hz

Ocorrncia Sujeito normal / desperto (olhos fechados) / amplitude de 20-200V Sujeito tenso, ativo ou concentrado (beta2) / Patolgico Sono profundo ou bebs / Leses ou encefalopatias Atividade mental superior, percepo e conscincia (some c/anestesia) Sonolncia / infncia ou juventude / Estado hipnaggico / meditao / hipnose Tranquilidade fsica c/ sensao de presena corporal: junto c/ usado p/o Neurofeedback em casos de dficit de ateno ou epilepsia

Origem Occipital Parietal / frontal

Beta ()

Delta ()

Gama ()

30-80 Hz

reas associativas? Hipocampo?

Teta ()

de 4 a 8 Hz

SMR - Ritmo Sensorimotor

de 12-16 Hz

Os neurnios piramidais tambm ajudam a amplificar as correntes sinpticas em funo de possuir mltiplas zonas gatilho em seus dendritos. Complementarmente, interneurnios inibitrios vizinhos tambm colaboram na construo do EEG: a presena de poderosas sinapses inibitrias junto ao soma piramidal permite (a) a gerao de potenciais inibitrios de grande amplitude e com durao 10-20 vezes maior que a da maioria dos potenciais inibitrios conhecidos; por outro lado, a ocorrncia
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de (b) minsculos ps-potenciais hiperpolarizantes de curta durao favorece a ocorrncia de disparos de alta freqncia, fazendo com que algumas ondas oscilem em at 100 Hz. Por fim, as prprias clulas gliais, com suas mudanas eltricas passivas diante das correntes geradas pelos neurnios, juntam-se a esta grande coreografia eltrica que o EEG; muitos trabalhos recentes tm mostrado o papel claramente ativo da glia nestes processos dinmicos, sepultando a velha concepo de que as

clulas gliais so apenas coadjuvantes inertes, clulas de suporte dos neurnios. O EEG , portanto, resultado do registro incidental das correntes extracelulares associadas atividade somada de grande nmero de clulas individuais. Os potenciais ps-sinpticos desempenham um papel fundamental na produo das ondas, mas os potenciais de ao, no, exceto quando um grande nmero deles viaja sincronizadamente ao longo das fibras talamocortiais ou quando registramos potenciais provocados54 por estmulos sensoriais. Vrias reas corticais e subcorticais parecem colaborar para gerar o EEG, mas nem sempre o crtex o principal articulador destes padres complexos: as evidncias sugerem, por exemplo, que o ritmo gerador bsico, ou marcapasso atuante sobre o crtex, residiria em circuitos subcorticais, mais precisamente em ncleos talmicos, capazes de provocar a propagao de sinais rtmicos que se projetam ao crtex cerebral. Quando chegam ao seu destino, promovem a despolarizao rtmica dos dendritos apicais das clulas piramidais o que, por sua vez, estimula fluxos de corrente inica dentro e fora das clulas. Se as clulas piramidais esto ativas e sincronizadas, suas correntes se somam e as ondas do EEG sero de considervel amplitude. Isto explica o que verificamos durante o sono, no ritmo alfa ou em qualquer das atividades mais salientes do EEG. Se os potenciais piramidais esto dessincronizados, as ondas sero tambm dessincronizadas e de baixa amplitude.

No desenvolveremos muito mais este tema aqui, pois, por sua extenso e complexidade, fugiria ao escopo de um captulo como este 55. Diante deste cenrio de atividade eltrica neural em massa, ficamos atnitos por sua enorme complexidade, mas tambm por sua incomparvel beleza. Isto s faz rebrilhar a potica assertiva de Sir Charles Sherrington acerca da natureza da atividade enceflica: como se a Via Lctea iniciasse algum tipo de dana csmica. Prontamente o encfalo transforma-se em um tear encantado, no qual milhes de lanadeiras cintilantes tecem uma nebulosa trama, sempre formando um padro significativo, ainda que efmero; uma inconstante harmonia de subpadres 56.
Uma boa reviso sobre este assunto encontra-se em Buzki, Traub & Pedley, "The Cellular Basis of EEG Activity" (IN: Current Practice of Clinical Electroencephalography, 3rd ed., J.S. Ebersole and T.A. Pedley Eds. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2003, pp. 1-11). Outro artigo interessante o de Florin Amzica, Physiology of sleep and wakefulness as it relates to the physiology of epilepsy (J Clin Neurophysiol. 19(6):488-503, 2002). Walter Freeman, ao nosso ver o maior conhecedor da natureza do EEG ver tambm livro citado nas referncias abaixo, publicou recentemente um estudo muito detalhado sobre este assunto em uma srie de 3 artigos que saram em Clinical Neurophysiology (Origin, structure, and role of background EEG activity, partes 1 a 3, Clin. Neurophysiol. 115(9):2077-107, 2004, e 116(5): 1118-29, 2005).
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Em portugus, a expresso potenciais provocados traduz evoked potentials com mais preciso.

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''It is as if the Milky Way entered upon some cosmic dance. Swiftly the brain becomes an enchanted loom, where millions of flashing shuttles weave a dissolving pattern, always a meaningful pattern though never an abiding one; a shifting harmony of subpatterns. '' IN: Sherrington C.S. (1941) Man On His Nature, Cambridge University Press, London.

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Jorge A Quillfeldt - v.3

12mai2005

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