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C L O N A G E M /A R T I G O S programada para voltar ao estdio embrionrio.

Identificar como essa condio pode ser conseguida representa um dos principais desafios para desenvolver melhores protocolos para clonar animais (1). Maria Anglica Miglino A baixa eficincia do processo de clonagem animal envolve problemas, tais como anomalias cromossmicas, alocao anorclonagem animal representa sem dvida um mal do nmero de clulas no boto embrionrio e trofoectodos maiores avanos obtidos at hoje no derma e formao deficiente do fuso mittico. campo da biotecnologia animal. Quando ocorre clivagem e desenvolvimento de blastocisto, a Os recentes resultados de clonagem por taxa de implantao menor e as perdas fetais normalmente transferncia nuclear tm encorajado os elevadas sugerem deficincias do processo normal de desenvolpesquisadores cada vez mais a elucidarem alguns aspectos vimento biolgico da espcie. ainda obscuros relativos a essa tcnica. A importncia do proApesar das causas do desenvolvimento anormal continuarem cesso est relacionada no somente produo animal, como obscuras, genes que so marcados (imprinted) de forma difetambm preservao de espcies em extino. rente tem sido responsabilizados por essas anormalidades (2). Se a tecnologia sugere perspectivas e possibilidades para as apliFoi demonstrado em bovinos, uma expresso anormal do comcaes prticas bem como a utilizao dessa plexo de histocompatibilidade maior do tipo I conquista na pesquisa fundamental, de outra no trofoblasto, e um maior acmulo de linfciA BAIXA parte, a produo de clones d origem a inmetos T no endomtrio de gestaes produzidas EFICINCIA ros e controversos debates sobre os aspectos ticom embries clonados comparados com aniDO PROCESSO mais controle. Estes resultados sugerem que cos, morais e legais da clonagem. DE CLONAGEM uma rejeio imunolgica tambm possa estar Sabe-se, hoje, que no processo de clonagem ANIMAL animal apenas um nmero mnimo de gestacontribuindo para a grande incidncia de perENVOLVE es levado a termo, se comparado com gesdas gestacionais com embries clonados (3). PROBLEMAS... Uma das causas apontadas por perdas gestaciotaes de animais produzidos por fertilizao in vitro. Outro dado muito relevante, que nais a deficincia placentria. Aproximadaaparece em gestaes de animais clonados, a ocorrncia de mente 82% de bovinos clonados por transferncia nuclear no perdas embrionrias, fetais e ps-natais. sobrevivem entre o 30- e 90- dias de prenhez. Os autores atriA baixa viabilidade dos embries clonados principalmente exbuem a essa viabilidade deficiente, o desenvolvimento de um pressa pela reduo na taxa de implantao, pelo aumento na corioalantide rudimentar, quando comparado quele dos anitaxa de mortalidade fetal e perinatal, e pelas diversas anomalias mais de controle. De outra parte, os problemas podem estar asobservadas nos animais recm-nascidos. Esses problemas ocorsociados aos fatores que promovem o crescimento placentrio rem possivelmente porque os ncleos de clulas diferenciadas e vascular e suas interaes materno-fetais tais como conexes no so corretamente reconduzidos a um estgio embrionrio placentrias e formao de vilos corinicos (4). A deficincia do nos embries clonados, o que leva expresso errnea de genes desenvolvimento vascular placentrio pode ser evidenciada nos que so necessrios para sustentar o desenvolvimento normal. ruminantes (bovinos) por estruturas cotiledonrias reduzidas Todavia, pelo menos em bovinos, uma pequena proporo dos ou ausentes (5). animais clonados fenotipicamente normal, cresce de forma Fetos anormais, hepatomegalia, hemorragia drmica (5) e hisaudvel, possui um sistema imunitrio funcional e pode redropsia em vacas receptoras de animais clonados (6) so alteraproduzir-se e produzir normalmente. Mesmo que ainda no es constantes envolvidas no processo gestacional de clones, existam provas definitivas de que os animais clonados sejam tode maneira a sugerir que o desenvolvimento normal de gestatalmente normais, os resultados desses estudos sugerem que, es representa casos de exceo. em certas condies especficas, pelo menos uma pequena proPlacentaes ineficientes em embries clonados foram obserporo dos ncleos diferenciados pode ser adequadamente revadas em camundongos (7), bovinos e ovinos (8, 9). Tais anor31

CLONAGEM ANIMAL E PLACENTAO

C L O N A G E M /A R T I G O S malidades em ruminantes incluem irrigao sangnea deficiente, aumento da ocorrncia de hidroalantide, e reduo do nmero e aumento do tamanho dos placentomas. Destas condies decorrem as perdas gestacionais, as anomalias e a menor viabilidade de animais clonados. Casos de hidroalantide so normalmente detectados em bovinos durante o terceiro trimestre de gestao, e esto associados ao aumento da concentrao plasmtica materna da glicoprotena (PSP60). A PSP60 produzida pelas clulas trofoblsticas binucleadas as quais desenvolvem um processo migratrio em direo ao epitlio uterino (10). O nmero reduzido de placentomas 39 menor que em gestaes normais (11), o dimetro aumentado destas estruturas 21cm maior que os grandes placentomas de gestaes normais 11cm (12), e o peso e a espessura exagerada dos mesmos 153g , indicam que a placentao em bovinos clonados apresenta anormalidades dignas de maiores esclarecimentos (13) e (14). De outra parte, reas hemorrgicas aparentes sobre a superfcie dos placentomas edemaciado certamente sugerem comprometimento da gestao. Estruturalmente existe total desorganizao das rvores vilosas fetais, as quais aparecem inseridas nas criptas endometriais em placentas de bovinos clonados. Outro fato notvel a menor densidade de vilos presentes nos chamados megacotiledones. Somam-se a esses fatos a deficiente ramificao vascular sobre a superfcie das chamadas rvores vilosas, bem como as dilataes anormais das criptas endometriais onde esses vilos se inserem. Os capilares fetais (5-10m de dimetro) so menos calibrosos que aqueles observados em gestaes normais (7-12m). De maneira semelhante, os capilares maternos, so menos calibrosos (9-14m), que os encontrados em gestaes normais (1428m), porm mais ramificados. A interface materno-fetal apresenta-se desorganizada e as clulas trofoblsticas que se evidenciam como binucleadas encontram-se polinucleadas (tri, tetra, pentanucleadas), com alteraes nucleares significativas (13, 14). Em um caso de hidroalantide diagnosticado em uma receptora utilizada para a gestao de clone de clula fetal, o processo culminou com a morte da me, de cujo tero foram retirados quase 200 litros de lquido alantoideano. Alm do risco estabelecido, os fentipos anormais observados em clones so possivelmente decorrentes de uma reprogramao nuclear inadequada, sugerindo a necessidade de uma remodelagem dos ncleos transplantados.
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O procedimento requer, portanto, aperfeioamento para a correta aplicao da tcnica, necessria to somente recuperao de espcies em extino, ao incremento da produo animal e mesmo aplicao teraputica para o uso em terapias celulares e regenerativas.
Maria Angelica Miglino professora titular da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo (USP).

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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se de livre-docncia Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia, Universidade de So Paulo. 13. Miglino, M.A.; Verechia, F.T.; Visintin, J.A; Mello, M.R.B.; Garcia, J.M.; Yamazaki, W.; Ambrsio, C.E.; Carvalho,A.F.; Braga, F.C.; Santos, T.C.; Leiser, R.; Carter, A.M. Placentao em bovinos clonados: arquitetura microvascular e estrutura. Acta Scientiae Veterinaria. Supl. 31, P. 484-485, 2003a. 14. Miglino, M.A.; Verechia, F.T.; Visintin, J.A; Mello, M.R.B.; Garcia, J.M.; Yamazaki, W.; Ambrsio, C.E.; Carvalho,A.F.; Braga, F.C.; Santos, T.C.; Leiser, R.; Carter, A.M Cloned cattle placentation: microvascular arquitecture and structure. Placenta, A.37, P113, P. 484-485, 2003b.

A IMPORTNCIA DE DISCUTIR O USO DE CLULASTRONCO EMBRIONRIAS PARA FINS TERAPUTICOS


Patricia Pranke

clula-tronco (CT) definida como a clula com capacidade de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tecidos. Alm disso, a CT apresenta a propriedade de auto-renovao, ou seja, gerar uma cpia idntica a si mesma. As clulas-tronco podem ser chamadas de adulta e embrionria. As clulas-tronco adultas (CTA) mais facilmente disponveis e comumente utilizadas nas clnicas de fertilizao so as clulas-tronco hematopoticas, cujas principais fontes so a medula ssea e o sangue de cordo umbilical. As clulas-tronco embrionrias (CTE) so definidas por sua origem, e so derivadas do estgio do blastocisto do embrio (1). A CTE normalmente utilizada, em alguns pases, a partir dos blastocistos gerados em clnicas de fertilizao, onde o casal doa, para a pesquisa com fins teraputicos, os blastocistos no utilizados para a fertilizao in vitro. O blastocisto corresponde s clulas entre o quarto e quinto dias aps a fecundao, mas antes ainda da implantao no tero, que ocorre a partir do sexto dia (1, 2). O blastocisto compreende cerca de 150 clulas. Esse estgio precede a fase embrionria, denominada gstrula, considerada uma clula indiferenciada da fase de mrula ou blstula de um embrio (3). A CTE apresenta grande plasticidade. A propriedade de plasticidade refere-se capacidade da clula em originar diferentes tipos de tecidos. A grande plasticidade das CTE deve-se ao fato do blastocisto ser capaz de originar todos os rgos do corpo humano. Aps a fecundao, o zigoto divide-se e diferencia-se at produzir um organismo adulto que consiste em mais de 200 tipos de clulas. Entre esses, neurnios, clulas musculares (micitos), clulas epiteliais, clulas sangneas, clulas sseas (ostecitos), cartilagem (condrcitos) e outras (4). Sendo assim, as CTE podem reconstituir qualquer tecido do organismo humano, comprovando que as CTE so as clulas que mais apresentam plasticidade (5-11). Devido a sua grande plasticidade, as CTE tm sido vistas como a melhor fonte de clulas reconstituidoras de qualquer te-

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