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Quim. Nova, Vol. 31, No.

7, 1820-1830, 2008 A toxicidAde em Ambientes Aquticos: discusso e mtodos de AvAliAo

Reviso

carla Regina costa e Paulo olivi* Departamento de Qumica, Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo, Av. Bandeirantes, 3900, 14040-901 Ribeiro Preto - SP, Brasil clarice m. R. botta e evaldo l. G. espindola Ncleo de Estudos em Ecossistemas Aquticos, Centro de Recursos Hdricos e Ecologia Aplicada, Escola de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 292, 13560-970 So Carlos - SP, Brasil Recebido em 5/10/07; aceito em 31/1/08; publicado na web em 24/9/08

TOXICITY IN AQUATIC ENVIRONMENTS: DISCUSSION AND EVALUATION METHODS. Aquatic toxicity tests are assays performed with different aquatic organisms of different ecological organization levels. Such tests are a source of information on the toxicity of a given substance or wastewater under controlled conditions, and they complement the physico-chemical analyses. Moreover, they allow one to evaluate the risks resulting from the presence of toxic substances in the environment. Algae, crustaceans, fishes and bacteria are frequently used in toxicity tests. In this work, we will present the main aspects related to the aquatic toxicity tests and a discussion of their applicability will also be presented.

Keywords: aquatic ecotoxicology; toxicity tests; dose-response relationship.

intRoduo Testes de toxicidade so ensaios laboratoriais, realizados sob condies experimentais especficas e controladas, utilizados para estimar a toxicidade de substncias, efluentes industriais e amostras ambientais (guas ou sedimentos). Nesses ensaios, organismos-testes so expostos a diferentes concentraes de amostra e os efeitos txicos produzidos sobre eles so observados e quantificados.1-3 Os testes de toxicidade no permitem obter uma resposta absoluta sobre o risco que uma determinada amostra apresenta para a populao humana, uma vez que muito difcil extrapolar para os seres humanos os resultados de toxicidade obtidos para os organismos em laboratrio e at mesmo correlacionar os resultados de toxicidade entre organismos de diferentes espcies.1 Testes de toxicidade so ferramentas desejveis para avaliar a qualidade das guas e a carga poluidora de efluentes, uma vez que somente as anlises fsico-qumicas tradicionalmente realizadas, tais como demanda qumica de oxignio (DQO), demanda bioqumica de oxignio (DBO), slidos suspensos, concentraes de metais e de outras substncias de carter orgnico ou inorgnico, cujos limites encontram-se estabelecidos nas legislaes ambientais, no so capazes de distinguir entre as substncias que afetam os sistemas biolgicos e as que so inertes no ambiente e, por isso, no so suficientes para avaliar o potencial de risco ambiental dos contaminantes. Apesar disso, os testes de toxicidade no substituem as anlises qumicas tradicionais. Enquanto as anlises qumicas identificam e quantificam as concentraes das substncias txicas, os testes de toxicidade avaliam o efeito dessas substncias sobre sistemas biolgicos. Assim, as anlises qumicas e os testes de toxicidade se complementam. Em se tratando de amostras de natureza qumica complexa, como o caso de efluentes industriais, os quais so constitudos por uma variedade de substncias qumicas, seria analtica e economicamente invivel detectar, identificar e quantificar todas as substncias presentes, mesmo que os padres de emisso fossem estabelecidos para cada uma delas. Alm disso, somente
*e-mail: olivip@ffclrp.usp.br

com a identificao e a quantificao dessas substncias no seria possvel estimar os efeitos que elas apresentam sobre a biota, uma vez que a atividade biolgica de uma substncia pode depender de suas interaes com os outros componentes do efluente, incluindo aqueles que no so txicos mas que afetam as propriedades qumicas ou fsicas do sistema e, conseqentemente, as condies de vida dos organismos. Assim, impossvel identificar uma nica substncia como responsvel por um determinado efeito txico.2,4-6 A cincia que estuda os efeitos nocivos causados por substncias qumicas sobre organismos vivos chamada toxicologia.7-9 Por conveno, essa cincia tambm estuda os efeitos danosos causados por agentes fsicos, tais como radiaes de diferentes tipos e poluio sonora.9 A toxicologia tem como principais objetivos identificar os riscos associados a uma determinada substncia e determinar em quais condies de exposio esses riscos so induzidos.10 A ocorrncia, natureza, incidncia, mecanismo e fatores de risco associados s substncias txicas so parmetros experimentalmente investigados pela toxicologia.10 Ela no serve somente para proteger os seres vivos e o ambiente dos efeitos deletrios causados pelas substncias txicas, mas tambm para facilitar o desenvolvimento de agentes qumicos nocivos mais seletivos, tais como drogas clnicas e pesticidas.9 A toxicologia compreende basicamente os seguintes ramos:7,9 toxicologia clnica, a qual estuda o efeito de drogas sobre pacientes humanos; toxicologia forense, cujo objetivo detectar o uso ilegal de agentes txicos para fins judiciais e toxicologia ambiental, a qual se preocupa com o destino dos agentes txicos, seus metablitos e produtos de degradao no ambiente e nas cadeias alimentares e com o efeito desses contaminantes sobre os organismos e as populaes. Esse ltimo ramo considera que a sobrevivncia humana depende do bem-estar de outras espcies e da disponibilidade de ar, gua, solo e alimentos limpos e considera tambm que as substncias qumicas antropognicas podem causar efeitos danosos aos organismos vivos e aos processos biolgicos. Embora na definio de toxicologia ambiental estejam includas substncias qumicas txicas naturalmente encontradas no ambiente, como venenos animais e toxinas microbianas e vegetais, a toxicologia ambiental tipicamente associada com o estudo de agentes qumicos de origem antropognica.9,11

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Assim, a toxicologia ambiental se preocupa com a influncia que os agentes txicos ambientais exercem sobre a sade e o bem-estar de humanos, animais e plantas, por meio da interao desses organismos.11 A toxicologia ambiental uma cincia altamente ecltica e multidisciplinar que envolve diversas reas de estudo como biologia, qumica (orgnica, analtica e bioqumica), anatomia, gentica, fisiologia, microbiologia, ecologia, cincias do solo, gua e atmosfera, epidemiologia, estatstica e legislao.7,9,11 Os objetos de estudo de algumas dessas reas so apresentados na Figura 1.7

Figura 2. Seqncia de etapas compreendidas pela ecotoxicologia e denominada cadeia da causalidade

Figura 1. Objetos de estudo de algumas reas compreendidas pela toxicologia ambiental

A ecotoxicologia uma rea especializada da toxicologia ambiental que centra seus estudos nos efeitos ocasionados por agentes qumicos e fsicos sobre a dinmica de populaes e comunidades integrantes de ecossistemas definidos.2,8 O termo ecotoxicologia algumas vezes utilizado como sinnimo do termo toxicologia ambiental, entretanto, este ltimo tambm abrange os efeitos dos agentes qumicos do ambiente sobre os seres humanos.12 Basicamente, a ecotoxicologia compreende a seqncia de eventos apresentada na Figura 2, a qual referida como cadeia da causalidade.13 As informaes obtidas por meio dessa cadeia so essenciais para: determinar os nveis de contaminantes no ambiente e seus destinos; estimar o grau de periculosidade dos contaminantes e seus metablitos para os organismos vivos; indicar nveis mximos permitidos de contaminantes, ou seja, os padres a serem mantidos; diagnosticar e prognosticar o efeito dos contaminantes no ambiente e o efeito das medidas tomadas; controlar a emisso de efluentes e avaliar os riscos ecolgicos.13 A ecotoxicologia aqutica tem como objetivo avaliar o efeito de substncias qumicas txicas sobre organismos representativos do ecossistema aqutico.14 Os efeitos txicos podem se manifestar em diferentes nveis de organizao, desde estruturas celulares at indivduos, populaes e comunidades.2,15 A ecotoxicologia aqutica envolve o transporte, a distribuio, a transformao e o destino final dos contaminantes no ambiente aqutico.16 Os testes de toxicidade aqutica so bastante utilizados porque os ecossistemas aquticos constituem os principais receptculos de contaminantes, sejam eles lanados diretamente nos corpos dgua por meio das descargas de efluentes, emitidos no ar ou depositados nos solos.4,8 o Ambiente Aqutico O ambiente aqutico altamente complexo e diverso. Ele compreende vrios tipos de ecossistemas dentre os quais se encontram rios, lagos, esturios, mares e oceanos. Todos esses ecossistemas so produtos dinmicos de interaes complexas entre os componentes biticos e abiticos caractersticos de cada um deles.14

As propriedades fsicas e qumicas dos ecossistemas aquticos podem afetar significativamente a atividade biolgica e o impacto dos agentes qumicos e outros xenobiticos. A vulnerabilidade do ambiente aqutico s substncias qumicas depende: das propriedades fsicas e qumicas dos contaminantes e dos produtos resultantes de sua transformao; da concentrao dos contaminantes no ecossistema; da durao e do tipo de descarga dos contaminantes (descarga intermitente ou contnua); das propriedades do ecossistema que lhe permitem resistir s alteraes resultantes da presena dos contaminantes, como a capacidade tamponante das guas e a concentrao de matria orgnica dissolvida nelas e, da localizao do ecossistema em relao ao stio de lanamento dos contaminantes.14 Os sistemas aquticos naturais so abertos e dinmicos e por isso sofrem modificaes contnuas na sua composio qumica. As guas marinhas so constitudas principalmente por ons cloreto, sdio, clcio, potssio, magnsio e sulfato, os quais so denominados componentes conservativos. Eles constituem aproximadamente 99% da massa total de slidos dissolvidos na gua do mar, sendo que os ons cloreto e sdio respondem sozinhos por aproximadamente 86%. Nas guas doces, clcio, magnsio e carbonato so os ons mais abundantes. Compostos de sdio, potssio, fsforo, ferro, enxofre e silcio tambm esto presentes nessas guas. Alm de componentes conservativos, as guas tambm so constitudas por componentes no conservativos, os quais incluem: gases dissolvidos como O2, CO2 e N2; nutrientes como fosfato e nitrato; compostos orgnicos dissolvidos como aminocidos e substncias hmicas; elementos traos como cobre, zinco, cromo, molibdnio, vandio, mangans, estanho, ferro, nquel, cobalto e selnio e, materiais particulados como areia, argila, colides, tecidos no vivos e excretos.14,17 Oxignio e dixido de carbono so os dois gases mais abundantes nas guas doces e marinhas. O oxignio importante porque atua como regulador em processos metablicos dos organismos e comunidades. Grande parte do oxignio dissolvido nas guas doce e salgada provm da atmosfera, mas ele tambm produzido pela ao fotossinttica das algas. Dixido de carbono atua como tampo impedindo que mudanas bruscas de pH ocorram nas guas naturais. Em soluo ele participa das reaes de equilbrio envolvendo os ons carbonato e bicarbonato. Bicarbonato a espcie predominante nas guas naturais com pH entre 6 e 10. Abaixo de pH 6 a espcie predominante o dixido de carbono e acima de pH 10, o on carbonato predominante. Dixido de carbono tambm participa como regulador em certos processos biolgicos que ocorrem no ambiente aqutico

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como no crescimento de plantas e na respirao animal.14 A concentrao, transporte, transformao e disposio final de um contaminante introduzido no ambiente aqutico dependem, principalmente, das propriedades do ambiente e das caractersticas do contaminante.14 As emisses de contaminantes no ar, no solo e principalmente nas guas (etapa 1, Figura 2) esto relacionadas aos processos naturais e, principalmente, s atividades humanas. As fontes de poluio podem ser classificadas em pontuais e no pontuais.18 Dentre as fontes pontuais podemos citar as estaes de tratamento de efluentes industriais, redes de esgoto domstico, derramamentos acidentais e minerao. As emisses de fontes pontuais so mais facilmente detectadas e controladas e, geralmente, resultam em descargas diretas dos contaminantes nos corpos dgua. Ao contrrio, as emisses de fontes no pontuais so de difcil controle, variam com o tempo e espao e podem envolver rotas que resultem na deposio parcial dos contaminantes antes deles atingirem os corpos dgua. Um exemplo tpico de fonte no pontual a utilizao de pesticidas no solo. Uma vez no ambiente, os contaminantes podem estar sujeitos a uma combinao de processos que podem afetar o seu destino e comportamento.18,19 As substncias potencialmente txicas podem ser degradadas por processos abiticos e biticos que ocorrem na natureza. No entanto, algumas delas resistem aos processos de degradao e por isso so capazes de persistirem no ambiente por longos perodos de tempo. O descarte contnuo no ambiente de uma substncia persistente pode levar sua acumulao em nveis ambientais suficientes para resultar em toxicidade.20 No ambiente aqutico, os contaminantes podem ser envolvidos em processos de transporte e transferncia de fase, em processos de transformao e em processos de assimilao18 (etapa 2, Figura 2). Os processos includos na primeira categoria no so degradativos, enquanto que os das duas ltimas categorias so.9 Na Figura 3 so apresentados alguns processos de transporte e transformao dos contaminantes no ambiente aqutico. Os processos de transporte e transferncia de fase determinam a distribuio temporal de um contaminante no ambiente.18 No ambiente aqutico, encontram-se entre esses processos: volatilizao e deposio mida, processos de soro (adsoro e dessoro), dissoluo e precipitao e, sedimentao e ressuspenso.18,21-23 Contaminantes orgnicos que apresentam alta presso de vapor e baixa solubilidade em gua, como benzeno, clorofrmio, diclorometano e tetracloreto de carbono, tendem a volatilizar.13,24 A volatilizao ocorre por um mecanismo difusivo no qual o contaminante

Figura 3. Alguns processos de transporte e transformao que ocorrem no ambiente

transferido de um compartimento ou fase onde a fugacidade alta para outra onde a fugacidade menor, at que seja atingido um equilbrio termodinmico entre ambas as fases. Processos difusivos so bidirecionais e a direo do transporte do contaminante depende da sua concentrao nas fases envolvidas.21 Contaminantes com baixa presso de vapor e baixa solubilidade em gua tendem a se adsorver nos materiais particulados e nos sedimentos.13 Os sedimentos so as camadas de partculas minerais e orgnicas finamente granuladas que esto em contato com a parte inferior dos corpos dgua naturais. Metais pesados, pesticidas e hidrocarbonetos aromticos polinucleados podem se adsorver nos sedimentos e, em seguida, podem ser transferidos para os organismos que os habitam.25 A dissoluo a principal rota pela qual vrias substncias entram nos corpos dgua. Contaminantes com alta solubilidade em gua tendem a permanecer nela. Em se tratando de contaminantes orgnicos, grupos polares como hidroxilas, aminas e carboxilas aumentam sua solubilidade em gua e fazem com que eles sejam volatilizados mais lentamente.13 Os principais processos de transformao que ocorrem no ambiente aqutico so a hidrlise, a fotlise, a complexao e a biodegradao (Figura 3).18,22,23,26 Esses processos so importantes porque determinam a persistncia dos contaminantes no ambiente.18 A hidrlise uma reao importante porque os produtos resultantes dela so tipicamente mais solveis em gua e por isso so menos biodisponveis e menos volteis do que seus precursores. A velocidade das reaes de hidrlise depende de um grande nmero de variveis ambientais como pH, temperatura, presena de catalisadores, soro sobre slidos e fora inica. So exemplos desse tipo de reao a converso de haletos de alquila a lcoois, de steres a cidos e de epxidos a diis.22,23,26 Paration, um pesticida organofosforado, altamente susceptvel hidrlise, o que diminui o seu tempo de vida no ambiente aqutico. Os produtos resultantes da hidrlise do Paration so o dietilfosforotioato e o p-nitrofenol.20 A luz, principalmente a radiao UV, capaz de provocar a quebra de ligaes qumicas e assim contribuir significativamente para degradar algumas substncias. As reaes fotoqumicas podem ser responsveis por uma variedade de transformaes, incluindo oxidao, hidroxilao, ciclizao e desalogenao. Para que elas ocorram necessrio que a luz solar penetre no ambiente aqutico. No entanto, parte da radiao solar absorvida pela matria dissolvida e particulada, o que atenua a intensidade da luz nas camadas de gua mais profundas. Assim, as reaes fotoqumicas ocorrem mais freqentemente na atmosfera e nas guas superficiais e podem provocar a degradao de compostos txicos ou, ainda, promover um aumento na toxicidade de compostos inicialmente pouco txicos.9,26 Diclofenaco, por exemplo, foi encontrado em guas superficiais na Alemanha em concentraes acima de 2 g L-1. 27 Quando exposto luz solar ele se decompe rapidamente, originando compostos como 2-cloroanilina, 2,6-dicloroanilina, 2,6-diclorofenol e outros. Cianocomplexos, como hexacianocobaltato(III), tambm so fotodissociados em gua liberando ons cianeto, os quais so extremamente txicos. Na ausncia de luz, o hexacianocobaltato(III) mostrou-se moderadamente txico aos microcrustceos Daphnia magna e Ceriodaphnia dubia e praticamente atxico ao peixe Oncorhynchus mykiss mas, na presena de radiao emitida por um simulador solar, tornou-se altamente txico para ambas as espcies de crustceos e, principalmente, para a espcie de peixe.28 A toxicidade dos metais depende da forma qumica que assumem no ambiente aqutico. H evidncias de que processos capazes de reduzir a concentrao dos ons metlicos livres como, por exemplo, reaes de complexao, podem diminuir significativamente sua toxicidade. No ambiente aqutico, metais podem se complexar com a

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matria orgnica dissolvida, principalmente com substncias hmicas. Essas representam 80% da matria orgnica dissolvida nas guas naturais e influenciam numerosos processos biogeoqumicos.29,30 Apesar de muitos contaminantes serem susceptveis aos processos de degradao abiticos, tais processos geralmente so muito lentos. Degradaes mais rpidas dos contaminantes podem ocorrer por meio da ao de microorganismos.20 Os microorganismos, tais como bactrias e fungos, so capazes de degradar as substncias orgnicas porque elas servem como fonte de carbono para seu crescimento e manuteno.22 Os fatores que influenciam a biodegradao desses contaminantes so: a disponibilidade de microorganismos apropriados, a susceptibilidade dos contaminantes degradao biolgica e as condies ambientais, tais como temperatura, pH, disponibilidade de nutrientes, nvel de oxignio, etc. Alm desses, a disponibilidade das substncias aos microorganismos pode desempenhar um papel importante. De forma geral, somente espcies dissolvidas so absorvidas pelos organismos e degradadas no interior das clulas. Transformaes extracelulares por enzimas excretadas tambm so possveis e podem afetar inclusive compostos adsorvidos nos materiais particulados e sedimentos.26 A biodegradao pode ocorrer sob condies aerbias e anaerbias. Na biodegradao aerbia, os organismos utilizam o oxignio como receptor de eltrons no metabolismo, enquanto que na biodegradao anaerbia so utilizados substratos eletroflicos, como sulfato e nitrato. Os processos aerbios so mais rpidos do que os anaerbios nas guas superficiais devido ao maior nmero de microorganismos aerbios com crescimento rpido.22 As seguintes caractersticas moleculares geralmente aumentam a biodegradabilidade aerbia das substncias: grupos susceptveis hidrlise enzimtica, tais como steres; tomos de oxignio na forma de grupos hidroxilas, aldedos, cidos carboxlicos e cetonas; cadeias alqulicas lineares no substitudas e anis fenlicos. Por outro lado, a presena de halognios na molcula; extensas ramificaes na cadeia; grupos nitro, azo, arilamino e aminas tercirias; resduos policclicos, tais como hidrocarbonetos aromticos policclicos e, resduos heterocclicos como imidazol so algumas caractersticas que aumentam a resistncia das substncias biodegradao aerbia.31 Na rea de ecotoxicologia, dcadas de pesquisa e testes com vrias substncias orgnicas tm levado a uma srie de generalizaes sobre como a toxicidade aqutica pode ser reduzida, por meio de modificaes das estruturas e das propriedades das substncias. Assim, o aumento do peso molecular de uma substncia para valores maiores do que 1000, a reduo da sua solubilidade em gua para valores menores do que 1 g L-1 e o aumento do impedimento estrico nos seus stios ativos resultam em uma diminuio da toxicidade aqutica da substncia, mas implicam na diminuio da sua biodegradabilidade. No entanto, possvel reduzir a toxicidade de uma substncia sem concomitantemente aumentar sua persistncia no ambiente, ou seja, sem diminuir sua biodegradabilidade. Por exemplo, a introduo de um grupo metil no 2-hidroxietilacrilato originando o 2-hidroxietilmetacrilato resulta em uma diminuio de toxicidade devido ao aumento do impedimento estrico, mas tem pouco efeito sobre sua biodegradabilidade.31 A ltima etapa da cadeia de causalidade (etapa 3, Figura 2) diz respeito aos efeitos txicos provocados pelas substncias qumicas, seus metablitos e produtos de converso sobre os organismos aquticos. Para isso, essas substncias devem entrar em contato com um stio alvo apropriado e reagir com ele em concentrao e intervalo de tempo suficientes. O contato e a reao entre a substncia qumica e o stio alvo do organismo recebem o nome de exposio. Os organismos aquticos podem ser expostos aos agentes qumicos presentes na gua, nos sedimentos e nos alimentos. Contaminantes solveis em gua so introduzidos nos organismos aquticos por

meio da superfcie do corpo (exposio drmica) e pelos tecidos respiratrios. Contaminantes presentes nos alimentos podem ser ingeridos (exposio oral) e absorvidos pelo trato gastrointestinal, enquanto que contaminantes adsorvidos em partculas e sedimentos podem penetrar no organismo por exposio drmica ou respiratria, medida que vo sendo dessorvidos para a gua que est em contato com o organismo aqutico. As rotas de exposio podem afetar a cintica de absoro, distribuio, biotransformao e excreo dos contaminantes e, dessa forma, podem influenciar sua toxicidade.14 Assim, a concentrao ambiental de uma determinada substncia no necessariamente a concentrao qual os indivduos de uma espcie esto expostos porque a dose biologicamente ativa de um contaminante diz respeito quantidade deste contaminante que atinge as clulas, stios e membranas onde ocorre a reao responsvel pelos efeitos txicos do contaminante.18,32 Dentre os efeitos bioqumicos e fisiolgicos provocados pelos agentes txicos podemos destacar: modificaes na permeabilidade das membranas celulares; interferncia na produo de ATP; inibio reversvel ou irreversvel de enzimas; distrbios no metabolismo de lipdios, podendo resultar em alteraes hepticas; alteraes nos sistemas enzimticos microssomais, os quais so responsveis pela biotransformao de xenobiticos; alterao na estrutura ou na atividade de enzimas que participam de processos reguladores, comprometendo a sntese e liberao de hormnios, bem como reduzindo a velocidade de crescimento dos organismos; distrbios no metabolismo de carboidratos e distrbios no processo respiratrio pela inibio do transporte de eltrons e da fosforilao oxidativa.33 Contaminantes absorvidos podem ser retidos nos organismos e provocar efeitos deletrios quando nveis elevados so atingidos. Os processos de acumulao nos organismos envolvem a bioconcentrao, a bioacumulo e a biomagnificao. A bioconcentrao o processo pelo qual uma substncia qumica absorvida do ambiente aqutico pelo organismo por meio das superfcies respiratrias e drmicas, ou seja, a exposio ao contaminante por meio da dieta alimentar no includa. A bioconcentrao de um contaminante a concentrao retida no organismo resultante aps os processos de assimilao e eliminao do mesmo. A eliminao do contaminante do organismo pode ocorrer por troca respiratria, excreo fecal, biotransformao metablica do contaminante de origem e diluio resultante do crescimento. A diluio provocada pelo crescimento considerada um processo de pseudo-eliminao desde que o contaminante no realmente eliminado do organismo, mas tem sua concentrao diminuda pelo aumento do volume dos tecidos nos quais ele se encontra. A bioacumulao um termo mais abrangente que inclui todas as rotas de exposio ao contaminante, inclusive a dieta alimentar. O aumento da concentrao de contaminantes nos tecidos medida que se avana nos nveis trficos, resultante principalmente da acumulao ocasionada pela dieta alimentar, recebe o nome de biomagnificao.34,35 Os efeitos deletrios provocados pela ao dos contaminantes nos organismos se propagam pelos demais componentes dos ecossistemas. Esses efeitos podem provocar modificaes: nas caractersticas e dinmica das populaes (reproduo, migrao, restabelecimento e mortalidade), na estrutura e funo das comunidades (alterao na diversidade de espcies, modificaes na relao predador-presa) e na funo do ecossistema (alteraes nos processos de respirao e fotossntese e no fluxo de nutrientes).33 Devido complexidade do ambiente aqutico e ao grande nmero de processos aos quais est sujeito um contaminante neste ambiente, difcil extrapolar para escala ambiental as informaes provenientes dos testes de toxicidade realizados em laboratrio. Alm disso, devese considerar que, a princpio, devido s diversas condies abiticas e biticas presentes nos ecossistemas aquticos, no h nenhum

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organismo nem comunidade ecolgica que possam ser usados para avaliar todos os efeitos possveis sobre esses ecossistemas. Para que os efeitos em escala ambiental pudessem ser preditos a partir dos testes de toxicidade, as informaes toxicolgicas deveriam ser conectadas a modelos populacionais, o que uma tarefa extremamente complicada que envolve uma srie de restries, principalmente de custo e tempo. Apesar disso, os testes de toxicidade realizados sob condies controladas e padronizadas vm servindo como fonte de informaes para avaliar os efeitos ecolgicos de contaminantes txicos.2 testes de toxicidAde com oRGAnismos Aquticos A toxicidade uma propriedade que reflete o potencial de uma substncia em causar um efeito danoso a um organismo vivo. Ela depende da concentrao e das propriedades da substncia qumica qual o organismo exposto e tambm do tempo de exposio.14 Tradicionalmente, os testes de toxicidade aqutica so utilizados para medir os efeitos txicos de substncias particulares e de guas contaminadas. Os testes com substncias especficas so realizados com o propsito de obter informaes para registros qumicos, enquanto que os testes com guas contaminadas so utilizados para verificar se h concordncia dos valores obtidos com os padres permitidos. Neste ltimo caso, as guas podem ser coletadas em pontos de descarga de efluentes ou no prprio corpo dgua receptor.8 Dados de toxicidade so utilizados para comparar diferentes substncias qumicas, alm de permitir comparar a sensibilidade de diferentes organismos aquticos a uma mesma substncia.14 recomendvel que o efeito txico de uma amostra seja avaliado para mais de uma espcie representativa da biota aqutica, de preferncia pertencentes a diferentes nveis trficos da cadeia alimentar1,4,36 (Figura 4). Alm de organismos pertencentes aos trs nveis trficos apresentados na Figura 4, testes de toxicidade com organismos decompositores, como rotferos e bactrias, tambm podem ser utilizados.4 A utilizao de uma bateria de testes com pelo menos quatro organismostestes de diferentes nveis de organizao biolgica pode ser apropriada para avaliar a ecotoxicidade de uma substncia ou efluente.1,37 Isso recomendado devido s diferenas de sensibilidade apresentadas por organismos de diferentes espcies frente s substncias qumicas. Alm disso, no possvel extrapolar o efeito txico de uma substncia sobre organismos de determinada espcie para organismos de outras espcies.36 Assim, sempre que possvel, recomendvel avaliar o efeito de uma substncia ou efluente para mais de uma espcie da biota aqutica para que, por meio do resultado obtido com o organismo mais sensvel,

Figura 4. Um exemplo de cadeia alimentar do ecossistema aqutico constituda por representantes de trs nveis trficos (NT)

seja possvel estimar com mais segurana o impacto do contaminante no corpo dgua receptor.4 Apesar disso, por razes prticas e econmicas, muitas vezes os testes de toxicidade so realizados com uma nica espcie de organismo-teste.1 Em princpio, qualquer espcie aqutica pode ser utilizada em testes de toxicidade.38 Entretanto, as espcies utilizadas nesses testes devem apresentar as seguintes caractersticas:5,14,39 seletividade constante e elevada aos contaminantes, elevadas disponibilidade e abundncia, uniformidade e estabilidade gentica nas populaes, representatividade de seu nvel trfico, significado ambiental em relao rea de estudo, ampla distribuio e importncia comercial e, facilidade de cultivo e de adaptao s condies de laboratrio. Alm disso, devem ser utilizadas espcies cuja fisiologia, gentica e comportamento sejam bem conhecidos, o que pode facilitar a interpretao dos resultados. Um dos objetivos da ecotoxicologia o desenvolvimento de protocolos de testes de toxicidade que permitam definir limiares de toxicidade permissveis com nveis de incerteza aceitveis e que sirvam de guia para as entidades reguladoras para a tomada de decises.2 Diversos rgos de proteo ambiental, como Environment Canada e Environmental Protection Agency dos Estados Unidos (U.S. EPA), e de padronizao, como American Society for Testing and Materials (ASTM), Organisation for Economic Cooperation and Development (OECD), Association of Analytical Communities (AOAC) e International Organization for Standardization (ISO) tm se concentrado na elaborao e implementao de sistemas de diagnstico, os quais constituem a base para a gerao de estratgias que visam proteger os ecossistemas.2 A utilizao de testes padronizados vantajosa principalmente porque permite a seleo de um ou mais testes uniformes e teis para uma variedade de laboratrios, facilita a comparao dos dados contribuindo para aumentar a utilizao dos dados publicados e permite a reproduo dos testes. No Brasil, o rgo responsvel pelo desenvolvimento de protocolos de testes de toxicidade a Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT). A Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental do Estado de So Paulo (CETESB) tambm tem padronizado testes de toxicidade. Na Tabela 1 so apresentadas as principais normas brasileiras referentes a testes de toxicidade aqutica para organismos pertencentes a diferentes grupos taxonmicos. Os testes de toxicidade podem ser classificados em agudos e crnicos. Esses testes diferem na durao e nas respostas finais que so medidas. Os testes de toxicidade aguda so utilizados para medir os efeitos de agentes txicos sobre espcies aquticas durante um curto perodo de tempo em relao ao perodo de vida do organismoteste. Eles tm como objetivo estimar a dose ou concentrao de um agente txico que seria capaz de produzir uma resposta especfica mensurvel em um organismo-teste ou populao, em um perodo de tempo relativamente curto, geralmente de 24 a 96 h.4 Os efeitos txicos medidos em testes de toxicidade aguda incluem qualquer resposta exibida por um organismo-teste ou populao resultante de um estmulo qumico. Normalmente, o efeito medido em estudos de toxicidade aguda com organismos aquticos a letalidade ou alguma outra manifestao do organismo que a antecede como, por exemplo, o estado de imobilidade. Os testes de toxicidade aguda permitem que valores de CE50 e CL50 (Tabela 2) sejam determinados por vrios mtodos estatsticos computacionais. Geralmente os valores de concentraes efetivas e letais so expressos em relao a 50% dos organismos porque estas respostas so mais reprodutveis, podem ser estimadas com maior grau de confiabilidade e so mais significativas para serem extrapoladas para uma populao. No ambiente aqutico, efeitos agudos provocados por agentes txicos nos organismos podem resultar de aplicaes inadequadas de agrotxicos, de acidentes ambientais e de situaes em que efluentes industriais no tratados so lanados nos corpos dgua receptores.2,4,5,8,10,14,38

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tabela 1. Testes de toxidade padronizados pela ABNT e CETESB Organismo Bactria Bactria Alga Microcrustceo Microcrustceo Microcrustceo Peixe Efeito Agudo Agudo Crnico Agudo Agudo Crnico Agudo Espcie Vibrio fischeri Spirillum volutans Chlorella vulgaris, Scenedesmus subspicatus, Pseudokirchneriella subcapitata Daphnia similis, Daphnia magna Artemia salina Ceriodaphnia dbia, Ceriodaphnia silvestrii Danio rerio, Pimephales promelas Normas brasileiras CETESB, L5.22740 CETESB, L5.22841 CETESB, L5.02042 e ABNT, NBR1264843 CETESB, L5.01844 e ABNT, NBR1271345 CETESB, L5.02146 CETESB, L5.02247 e ABNT, NBR1337348 CETESB, L5.01949 e ABNT, NBR1508850

Testes de toxicidade crnica so realizados para medir os efeitos de substncias qumicas sobre espcies aquticas por um perodo que pode abranger parte ou todo o ciclo de vida do organismo-teste. O fato de uma substncia qumica no produzir efeitos txicos sobre organismos aquticos em testes de toxidade aguda no indica que ela no seja txica para eles. Testes de toxicidade crnica permitem avaliar os possveis efeitos txicos de substncias qumicas sob condies de exposies prolongadas a concentraes sub-letais, ou seja, concentraes que permitem a sobrevivncia dos organismos, mas que afetam suas funes biolgicas, tais como reproduo, desenvolvimento de ovos, crescimento e maturao, dentre outras. Os resultados obtidos em testes de toxicidade crnica so geralmente expressos como CENO ou CEO (Tabela 2), mas tambm podem ser expressos como CE50. O lanamento contnuo de efluentes aquosos tabela 2. Definio de alguns termos utilizados em testes de toxicidade Parmetro Definio Dose Letal Mdia: dose de amostra que causa mortalidade de 50% dos organismos no tempo de exposio e condies do teste. Concentrao Letal Mdia: concentrao de amostra que causa mortalidade de 50% dos organismos no tempo de exposio e nas condies do teste. Concentrao Efetiva Mdia: concentrao de amostra que causa um efeito agudo (imobilidade, por exemplo) a 50% dos organismos no tempo de exposio e nas condies do teste. Concentrao de Efeito no Observado: maior concentrao de agente txico que no causa efeito deletrio estatisticamente significativo nos organismos no tempo de exposio e nas condies do teste. Concentrao de Efeito Observado: menor concentrao de agente txico que causa efeito deletrio estatisticamente significativo nos organismos no tempo de exposio e nas condies do teste. Tempo de exposio 24 a 96 h

DL50

CL50

24 a 96 h

CE50

24 ou 48 h

CENO

7 dias

CEO

7 dias

tratados nos corpos dguas pode provocar efeitos crnicos, uma vez que os organismos so expostos a certos contaminantes, mesmo em baixas concentraes, durante longos perodos de tempo.2,4,5,8,10,14,38 Os testes de toxicidade podem ainda ser classificados em estticos, semi-estticos e dinmicos, de acordo com o mtodo de adio das solues-teste.5,15 Os ensaios estticos so realizados sem renovao das solues-testes e so recomendados para amostras que no causam depleo de oxignio, que no so volteis e que so estveis em meio aquoso.5,50 Amostras com elevados valores de DBO e/ou DQO ou que contenham populaes bacterianas em suas composies podem apresentar concentraes de oxignio dissolvido menores do que as encontradas nas guas naturais o que pode provocar stress ou mortalidade dos organismos-teste, fazendo com que o resultado do teste de toxicidade seja superestimado. Por outro lado, substncias txicas instveis ou volteis tm suas concentraes reduzidas ao longo do teste, contribuindo para que seu resultado seja subestimado.5,8 Nesses casos so recomendados os testes semi-estticos, nos quais as solues-testes so renovadas periodicamente. Nos testes semi-estticos, o perodo de renovao das solues-testes depender da espcie de organismo-teste. Para Danio rerio, por exemplo, recomenda-se que as solues sejam renovadas a cada 24 h, enquanto que para Pimephales promelas o intervalo de tempo recomendado para a renovao das solues de 48 h.50 Testes de toxicidade crnica de longa durao so geralmente realizados em modo dinmico.15 Nos testes dinmicos as solues-testes so continuamente renovadas.8 Na Tabela 2 so definidos os parmetros mais freqentemente utilizados em testes de toxicidade. A DL50 um parmetro normalizado pelo peso do organismo, ou seja, expresso em mg de substncia qumica por massa do organismo em kg.51 O termo dose refere-se quantidade de substncia txica que entra no organismo e, portanto, pode ser inferior dose qual o organismo exposto.5 DL50 um parmetro bastante utilizado em farmacocintica e medicina.7 Os parmetros CL50, CE50, CENO e CEO, freqentemente utilizados em ecotoxicologia aqutica, so normalizados em funo do ambiente em que os organismos so expostos.51 Por esse motivo, eles so expressos em termos da concentrao ambiental da substncia qumica, a qual geralmente expressa em mg de substncia por litro de soluo preparada em gua natural ou sinttica apropriada (gua de diluio).11 Os resultados dos testes de toxicidade para substncias especficas so comumente expressos em mg L-1, enquanto que para efluentes ou guas contaminadas os resultados so expressos em %. Os valores numricos de toxicidade aguda e crnica, expressos como CL50, CE50, CENO e CEO, exprimem uma relao inversa toxicidade, ou seja, menores valores numricos indicam maiores toxicidades.4 Para facilitar a comparao e fazer com que esses parmetros exprimam uma relao direta com a toxicidade, podem ser transformados em unidades txicas aguda (UTa) ou crnica (UTc) pelas seguintes Equaes:4,52

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UTa = 100/CE50 ou UTa = 100/CL50 UTc = 100/CENO ou UTc = 100/CEO

(1) (2)

Dessa forma, quanto maior o valor numrico em unidade txica, maior ser a toxicidade da amostra. Na Tabela 3 so apresentados valores de CL50 em % e UTa para Daphnia magna em diferentes efluentes industriais.52 Os resultados indicam a seguinte seqncia crescente de toxicidade: efluente (3) < efluente (4) < efluente (5) = efluente (6) < efluente (2) < efluente (1) < efluente (7). tabela 3. Toxicidades agudas de diferentes efluentes industriais para Daphnia magna aps 48h. Adaptada da ref. 52 Efluente 1 2 3 4 5 6 7 Origem do Efluente Hospital (1) Hospital (2) Fabricante de materiais para escritrios e escolas Fabricante de peas para automveis Fabricante de produtos de higiene Companhia farmacutica Indstria txtil CL50 (%) 0,4 0,2 33,2 6,6 70,8 15,2 54,5 5,3 51,0 11,4 49,1 10,3 0,2 0,1 CL50 (UTa) 250,0 3,0 1,4 1,8 2,0 2,0 500,0

A relao entre a concentrao de uma substncia qumica qual exposto um determinado organismo e o efeito nocivo que lhe produzido, conhecida como relao dose-resposta, um dos aspectos mais importantes da ecotoxicologia aqutica. A relao dose-resposta constitui a base fundamental para a avaliao do risco gerado pelas substncias qumicas no meio ambiente porque permite quantificar a toxicidade aguda dessas substncias. Em geral, as curvas que representam a relao dose-resposta apresentam comportamento no-retilneo do tipo sigmide, como ilustrado na Figura 5.9,51,53 Dois parmetros importantes podem ser determinados a partir das curvas dose-resposta: a concentrao ou dose, que resulta em 50% do efeito medido, ou seja, os valores de CL50 ou CE50 e, o coeficiente angular da poro linear da curva que passa pelo ponto correspondente CL50 ou CE50. Os dois parmetros so necessrios para descrever precisamente a relao entre a concentrao do agente qumico e o efeito deletrio provocado nos organismos-teste. Diferentes substncias qumicas podem apresentar diferentes valores de CL50 ou CE50, mas podem apresentar os mesmos valores de coeficientes angulares. Valores similares de coeficientes angulares podem indicar que os

modos de ao das substncias qumicas analisadas so similares. Apesar de CL50 e CE50 serem comumente expressos em mg L-1, a concentrao molar fornece uma avaliao mais precisa, uma vez que a toxicidade de uma substncia especfica se relaciona ao nmero de molculas dessa substncia que interage com um stio ativo. Outro problema refletido nos valores CL50 e CE50 que expressam concentraes ambientais de substncias txicas referentes a um determinado tempo de exposio, estabelecido para cada teste. Assim, uma substncia que se move lentamente nos tecidos, por exemplo, pode apresentar uma toxicidade menor no perodo do teste, simplesmente pelo fato de sua concentrao no tecido alvo no ter atingido nveis suficientes para provocar efeito txico durante o intervalo de tempo considerado.11,51 A estatstica desempenha um papel importante no planejamento e execuo dos testes de toxicidade e na anlise e interpretao dos resultados obtidos nesses testes. Em geral, os mtodos de anlises dos resultados esto bem documentados, so aplicveis maioria dos dados obtidos nestes tipos de testes e podem ser manipulados por pessoas que no possuem conhecimentos de estatstica.53 O mtodo estatstico apropriado para analisar dados de toxicidade deve apresentar trs caractersticas: ser razoavelmente preciso e acurado; ser programvel, para que os clculos possam ser realizados por um computador e, ser suficientemente robusto, o que significa que no deve falhar quando os dados forem atpicos. Quando um grande nmero de bioensaios realizado, algumas anomalias podem ocorrer. O mtodo estatstico escolhido deve ser capaz de estimar razoavelmente CE50 e CL50 a partir de tais dados anmalos.54 Dentre os mtodos para determinar CL50 e CE50 encontram-se o mtodo Probit,5,7 o mtodo Logit5 e os mtodos Spearman-Karber5 e trimmed Spearman-Karber.5,54 Os dois primeiros so mtodos paramtricos que transformam os dados da curva dose-resposta em uma funo matemtica conhecida ou esperada antes dos valores de CL50 e CE50 serem estimados. Apresentam deficincias para contornar as anomalias apresentadas por alguns dados e no so vlidos para curvas dose-resposta assimtricas. Os mtodos Spearman-Karber e trimmed Spearman-Karber so mtodos no paramtricos que no esto sujeitos a esses problemas, tm boas propriedades estatsticas, so fceis de usar e recomendados para clculos precisos de CE50 e CL50 com intervalo de confiana de 95%. Eles so vlidos para curvas dose-resposta simtricas e assimtricas. A nica limitao desses mtodos em relao aos mtodos paramtricos que devem cobrir o intervalo de zero a 100% de mortalidade ou de efeito agudo.5,53,54 organismos utilizados em testes de toxicidade Algas O uso de algas como indicador biolgico importante porque, como produtores primrios, elas se situam na base da cadeia alimentar e qualquer alterao na dinmica de suas comunidades pode afetar os nveis trficos superiores do ecossistema. Dentre as vantagens em se utilizar algas em testes de toxicidade podemos destacar sua grande sensibilidade s alteraes ocorridas no meio ambiente e o seu ciclo de vida relativamente curto, o que possibilita a observao de efeitos txicos em vrias geraes.36 O efeito de inibio resultante sobre a populao de algas, aps um intervalo de tempo pr-estabelecido (geralmente 3 ou 4 dias), determinado comparando-se o crescimento observado na presena de agente txico com o crescimento normal observado em um sistema livre de agente txico, o qual chamado de controle. Nesses testes, a temperatura e a luminosidade devem ser rigorosamente controladas porque podem afetar significativamente o crescimento das algas. Para algas verdes de gua doce, a temperatura recomendada 24 2 C e a intensidade de luz deve estar compreendida entre 80 e 120 E s-1 m-2.

Figura 5. Representao de uma curva dose-resposta tpica obtida em testes de toxicidade

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Dependendo do nmero de concentraes de agente txico e do nmero de rplicas utilizadas nos testes de toxicidade com algas, CE50, CENO e CEO podem ser determinadas.23,55,56 Os resultados podem ainda ser comparados quanto rea sob a curva de crescimento obtida durante o perodo de 3 dias de teste, freqentemente chamada de biomassa, ou pela velocidade de crescimento das algas.57 O crescimento algceo pode ser determinado por contagem celular ao microscpio ptico ou com um contador eletrnico de partculas, pelo contedo de clorofila medido por espectrofotometria ou fluorimetria, ou pela turbidez medida em 750 nm.43 As algas verdes e unicelulares de gua doce Chlorella vulgaris, Scenedesmus subspicatus e Selenastrum capricornutum (o gnero desta ltima foi formalmente modificado para Pseudokirchneriella subcapitata) so freqentemente utilizadas em testes de toxicidade porque crescem rapidamente e suas culturas so facilmente preparadas em laboratrio.23,43,57 Uma vez que a luz um parmetro imprescindvel para o crescimento de algas, amostras que apresentam cor, como corantes e efluentes de indstrias txteis, podem interferir nos testes de toxicidade com algas, levando a um resultado superestimado. Nesses casos, difcil afirmar se o crescimento da populao de algas foi realmente afetado pela interao da amostra com stios alvos do organismo ou se simplesmente foi afetado porque parte da luz foi absorvida pela amostra. Alm disso, como mtodos pticos como espectrofotometria e fluorimetria so sugeridos para determinar a concentrao das algas, amostras com cor acentuada podem ser interferentes.36 Crustceos e peixes Crustceos de gua doce da ordem Cladocera e do gnero Daphnia, os quais so vulgarmente conhecidos como pulgas dgua, so bastante utilizados em testes de toxicidade porque so amplamente distribudos nos corpos dgua doce, so importantes em muitas cadeias alimentares e so fonte significativa de alimento para peixes, possuem um ciclo de vida relativamente curto, so facilmente cultivados em laboratrio, so sensveis a vrios contaminantes do ambiente aqutico e porque, devido ao seu pequeno tamanho, necessitam de menores volumes de amostras-teste e gua de diluio do que os testes realizados com algas e peixes.5,23,58 Alm disso, a reproduo assexuada desses crustceos por partenognese garante a produo de organismos geneticamente idnticos permitindo, assim, a obteno de organismos-teste com sensibilidade constante.59,60 Vrias espcies de Daphnia so utilizadas em testes de toxicidade, mas, a mais utilizada a Daphnia magna, para a qual existe um grande nmero de informao sobre as tcnicas de cultivo, os requisitos de temperatura, luz e nutrientes e sobre sua resposta a muitas substncias txicas.5,60 As espcies de Daphnia so basicamente diferenciadas pelo seu tamanho e essa caracterstica tem influncia sobre a toxicidade das substncias.61 No Brasil, Daphnia similis vem sendo bastante utilizada em testes de toxicidade.60 Apesar de no ser uma espcie nativa, facilmente cultivada em laboratrio e atende os critrios estabelecidos pelos procedimentos padres para a seleo de espcies alternativas.60,62 O crustceo de gua salgada Artemia salina tambm uma espcie bastante utilizada em testes de toxicidade.63-65 A utilizao dessa espcie interessante porque seus ovos resistem secagem e estocagem por longos perodos de tempo. Quando os ovos secos so colocados em gua do mar e incubados a aproximadamente 23 oC, eles eclodem dentro de 1 ou 2 dias e aps isso os organismos j esto prontos para serem utilizados nos testes de ecotoxicidade.23 Os ovos de Artemia salina podem ser adquiridos em qualquer loja de artigos para aqurios, uma vez que so utilizados como alimento para peixes. Nessas lojas tambm pode ser adquirido sal marinho para preparar gua marinha artificial. O uso de Artemia salina interessante quando se pretende avaliar a toxicidade de efluentes que apresentam alta sa-

linidade e, portanto, alta condutividade, uma vez que esse parmetro um fator crtico para espcies de gua doce. O efeito txico freqentemente avaliado em testes de toxicidade com microcrustceos a imobilidade porque, devido ao pequeno tamanho desses organismos, difcil avaliar se esto mortos.23 Os principais representantes dos consumidores secundrios nas cadeias alimentares so os peixes.4 Diversas espcies de peixes so utilizadas como bioindicadores. No Brasil a espcie mais utilizada o Danio rerio, o qual vulgarmente conhecido como peixe paulistinha ou peixe zebra. Pimephales promelas, o qual popularmente conhecido como Fathead minnow, tambm utilizado em testes de toxicidade.50 O parmetro avaliado nos testes de toxicidade aguda com peixes a mortalidade e os testes de toxicidade crnica com esses organismos requerem longos perodos de tempo, uma vez que seu ciclo de vida e seu perodo reprodutivo so longos quando comparados aos de outras espcies.6 Bactrias Embora tradicionalmente algas, crustceos e peixes sejam usados para medidas de toxicidade aqutica, esses testes requerem maiores tempo de exposio e volume de amostra do que testes de toxicidade que utilizam bactrias. Dentre esses, o teste que utiliza a bactria marinha bioluminescente Vibrio fischeri e recebe o nome de Microtox , sem dvida, o mais utilizado.66-70 Nesse teste medida a reduo da luminescncia emitida naturalmente pela bactria quando ela posta em contato com um agente txico, o qual inibe a atividade da enzima luciferase. O tempo de durao do teste varia entre 15 e 30 min. Microtox um teste de toxicidade rpido, sensvel, fcil de executar e de baixo custo que pode ser utilizado no controle da poluio das guas e efluentes industriais. Apesar dessas vantagens um teste criticado por empregar uma bactria marinha de pouco significado ecolgico.6 efeitos aditivos, sinrgicos e antagnicos Em relao toxicidade de misturas como, por exemplo, efluentes industriais, os efeitos resultantes das interaes de seus constituintes podem ser classificados em: aditivos, sinrgicos e antagnicos.10,71,72 O efeito aditivo quando a toxicidade da mistura igual soma das toxicidades individuais de seus componentes.71 Quando a toxicidade de uma mistura maior que a soma das toxicidades dos seus constituintes h um efeito sinrgico e quando a toxicidade da mistura menor que a soma das toxicidades de seus componentes, h um efeito antagnico.71 A ocorrncia desses efeitos depende dos modos de interao entre os constituintes da mistura e o stio alvo no organismo. Quatro tipos de interaes so possveis:10 os constituintes da mistura afetam a mesma funo fisiolgica; uma interao qumica entre os constituintes da mistura afeta a toxicidade de um dos qumicos; a absoro, o metabolismo, a distribuio ou a excreo de um constituinte sofre alterao provocada pelos demais constituintes da mistura e, h uma competio entre os constituintes da mistura pelo mesmo tecido receptor. Na Tabela 4 so exemplificados os trs tipos de interao.72 testes de toxicidade com sedimentos Testes de toxicidade aguda com sedimentos tm sido bastante utilizados em programas de avaliao e controle de sedimentos dragados para descarte em mares abertos ou guas continentais, de monitoramento de locais contaminados com descargas txicas e de triagem de reas prioritrias.73 Esses testes so de baixo custo, relativamente simples e podem ser conduzidos com vrias espcies.3 Diferentes bioensaios e organismos-teste tm sido empregados na

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tabela 4. Toxicidades agudas de misturas binrias (intervalo de confiana de 95%) determinadas por Microtox aps 15 min. Adaptada da ref. 72 Misturas binrias (A) 5 mg L-1 de Zn(II) (B) 90 mg L-1 de Co(II) (A) 0,5 mg L-1 de Cu(II) (B) 60 mg L-1 de Cr(VI) (A) 4 mg L-1 de Zn(II) (B) 2 mg L-1 de Cu(II) Efeito Aditivo UTa(A+B) = UTa(A) + UTa(B) Sinrgico UTa(A+B) > UTa(A) + UTa(B) Antagnico UTa(A+B) < UTa(A) + UTa(B) UTa(A) 3,09 (2,34-3,70) 1,85 (1,78-1,91) 2,50 (1,62-2,90) UTa(B) 2,73 (2,39-3,14) 1,64 (1,38-1,94) 7,15 (6,61-7,32) UTa(A+B) 6,23 (4,27-8,19) 4,04 (3,72-4,36) 5,61 (4,93-6,29)

avaliao da toxicidade de sedimentos. Entre os organismos-teste freqentemente utilizados incluem-se microcrustceos e macroinvertebrados bentnicos, os quais ocupam posies de consumidores nas cadeias alimentares da regio pelgica (regio que se estende desde a superfcie at aproximadamente 200 m de profundidade) e bentnica (regio situada prxima ao fundo ocenico e onde vivem organismos que rastejam, se prendem ou vivem enterrados na areia ou no lodo). Na regio pelgica os microcrustceos atuam como consumidores primrios e secundrios, enquanto que na regio bentnica as larvas de insetos e tambm os mie crocrustceos so importantes porque transformam os organismos vivos e a biomassa morta em alimento para outros consumidores. Devido s diferenas dos hbitos alimentares dos organismos das regies pelgica e bentnica, recomendado que a avaliao da toxicidade de sedimentos seja realizada com organismos de ambas as regies.3 Os organismos bentnicos so os mais indicados para os testes de toxicidade com sedimentos porque vivem em contato direto com eles e com as guas intersticiais. Assim, alguns anfpodos, como Hyalella azteca, e larvas de insetos, como Chironomus xanthus, vm sendo utilizados em vrios estudos que envolvem a determinao da toxicidade de sedimentos. Apesar disso, so encontrados problemas em relao ao cultivo dessas espcies em laboratrio e ao desenvolvimento de testes crnicos. Alm disso, mtodos padronizados com esses organismos ainda esto sendo desenvolvidos, o que faz com que o uso de testes padronizados com organismos no-bentnicos como, por exemplo, microcrustceos do gnero Daphnia, seja preferido.3,74 Os testes com sedimento podem ser realizados com o sedimento total ou com a frao lquida dos mesmos (gua intersticial ou solubilizado). Os testes com o sedimento total consistem na exposio de organismos a amostras de sedimento supostamente contaminadas com substncias qumicas. Ao final do perodo de exposio, varivel de acordo com o teste utilizado, a resposta do organismo-teste observada em relao a um determinado efeito adverso (mortalidade, crescimento, reproduo, citotoxicidade, alteraes nas taxas de desenvolvimento ou respirao) e comparada estatisticamente com os resultados do controle e/ou sedimento de referncia.73 Os testes com a frao lquida so realizados de acordo com os procedimentos descritos para amostras de gua. Podem ser realizados com a gua intersticial ou com o solubilizado. A gua intersticial formada pela interiorizao da gua durante o processo de sedimentao e a quantidade disponvel da mesma depende diretamente da porosidade e indiretamente do tamanho e do grau de compactao das partculas. Existem diferentes mtodos para extrao da gua intersticial como dilise, congelamento e centrifugao, sendo este ltimo o mais utilizado. A solubilizao obtida por meio de lixiviao do sedimento com gua destilada na proporo de uma parte de sedimento para quatro partes de gua destilada. Aps um perodo de agitao de 24 h, o sedimento decantado e o lquido sobrenadante retirado e submetido ao teste de toxicidade.3,5,73,74 Quando os testes so realizados com gua intersticial assume-se que os contaminantes presentes nela e que causam toxicidade aos organismos-teste em laboratrio so os mesmos que podem causar toxicidade nos sedimentos. Por outro lado, o solubilizado reflete di-

retamente a interface sedimento/gua uma vez que os contaminantes dos sedimentos no se restringem apenas aos organismos bentnicos, mas tambm podem afetar os organismos pelgicos por meio da ressuspenso dos sedimentos e liberao dos contaminantes neles adsorvidos. Assim, o solubilizado a fase lquida que melhor representa esta ltima situao. Devido s diferenas apresentadas entre a gua intersticial e o solubilizado, os resultados obtidos com testes de toxicidade em ambos os meios nem sempre so concordantes. Avaliao e identificao da toxicidade Amostras constitudas por substncias de diferentes classes como, por exemplo, efluentes industriais podem apresentar componentes txicos e no txicos. Com o objetivo de isolar e identificar as substncias txicas responsveis pela toxicidade de efluentes, corpos dgua, guas intersticiais e sedimentos, mtodos conhecidos como TIE (Toxicity Identification Evaluation) tm sido desenvolvidos como parte integrante dos protocolos de reduo de toxicidade. Mtodos TIE combinam a quantificao da toxicidade com a identificao e confirmao de uma ou mais substncias e/ou classe de substncias responsveis pela toxicidade total de uma amostra.8,58,75 Mtodos TIE compreendem trs fases distintas.58,76 A fase I tem como objetivo caracterizar a natureza fsico-qumica dos constituintes da amostra responsveis pela sua toxicidade, por meio de manipulaes ou tratamentos qumicos e de testes de toxicidade aqutica. Fraes dessa amostra podem ser submetidas aos seguintes tratamentos fsico-qumicos: ajustes de pH, o qual pode afetar a especiao de substncias, como S2-, CN- e NH4+; adio de agente quelante, o qual se complexa a ons metlicos, como Cu2+, Cd2+ e Zn2+; extrao em fase slida com coluna C18, a qual remove compostos orgnicos apolares, como pesticidas e COVs (Compostos Orgnicos Volteis); adio de tiossulfato de sdio, o qual reduz espcies oxidantes, tais como Cl2 e Cr(VI); filtrao, a qual remove partculas suspensas e substncias cuja solubilidade afetada pelo pH do meio; e outros. Testes de toxicidade aqutica so realizados antes e aps cada manipulao, o que permite avaliar a eficcia de cada tratamento e obter informao sobre a natureza das substncias txicas. Aps a fase I, fica claramente definida a classe ou classes de substncias responsveis pela toxicidade total da amostra. Na fase II, os estudos so conduzidos com o objetivo de identificar uma ou mais substncias especficas responsveis pela toxicidade da amostra. Assim, por exemplo, quando a classe de substncias orgnicas indicada na fase I como a principal responsvel pela toxicidade de uma amostra, na fase II, essas substncias sero isoladas e identificadas por tcnicas analticas especficas, como cromatografia lquida de alta eficincia, cromatografia gasosa, espectrometria de massas e outras tcnicas. Na fase III, as substncias txicas caracterizadas na fase I e identificadas na fase II so confirmadas por meio de testes qumicos e toxicolgicos adicionais. A identificao de substncias txicas um passo fundamental para compreender as causas da toxicidade de amostras complexas, bem como para remov-las ou reduzir suas concentraes para nveis aceitveis, principalmente quando se trata de efluentes industriais que sero lanados nos corpos dgua.

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consideRAes FinAis Nesta reviso foram apresentados os principais processos fsicos, qumicos e biolgicos nos quais um contaminante qumico pode se envolver no ambiente aqutico e que podem afetar a sua biodisponibilidade e toxicidade. Tambm foram discutidos os principais aspectos relacionados aos testes de toxicidade aguda e crnica, os parmetros utilizados para expressar a toxicidade e os mtodos estatsticos utilizados nos seus clculos, as principais espcies utilizadas nos testes padronizados, o aditivismo, sinergismo e antagonismo das toxicidades dos contaminantes em misturas, os testes com sedimentos e os mtodos TIE. Os testes de toxicidade so importantes para avaliar o potencial de risco ambiental dos contaminantes, uma vez que somente as anlises qumicas no possibilitam esse tipo de avaliao. Alm disso, anlises de toxicidade j vm sendo exigidas por leis ambientais no Brasil. No captulo IV da Resoluo no. 357 do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA), referente s condies e padres de lanamento de efluentes, estabelecido nos 1 e 2 do artigo 34 que o efluente no dever causar ou possuir potencial para causar efeitos txicos aos organismos aquticos no corpo receptor e que os critrios de toxicidade devem se basear em resultados de ensaios ecotoxicolgicos padronizados utilizando organismos aquticos. Nesse contexto, essa reviso procurou esclarecer alguns aspectos relevantes sobre os testes de toxicidade, mostrando que apesar de ser difcil extrapolar para o ambiente as informaes obtidas com esses testes, j que no ambiente aqutico os contaminantes esto sujeitos a diversos processos biticos e abiticos que no so reproduzidos no laboratrio, eles so imprescindveis para predizer possveis efeitos txicos dos contaminantes no ambiente. AGRAdecimentos C. R. Costa agradece FAPESP pelo financiamento de sua bolsa de doutorado. ReFeRnciAs
1. Ribo, J. M.; Environ. Toxicol. Water Qual. 1997, 12, 283. 2. Ronco, A.; Bez, M. C. D.; Granados, Y. P. Em Ensayos Toxicolgicos y Mtodos de Evaluacin de Calidad de Aguas - Estandarizacin, Intercalibracin, Resultados y Aplicaciones; Morales, G. C., ed.; Centro Internacional de Investigaciones para el Desarrollo: Ottawa, 2004, cap. 1. 3. Dornfeld, C. B.; Dissertao de Mestrado, Universidade de So Paulo, Brasil, 2002. 4. Gherardi-Goldstein, E.; Bertoletti, E.; Zagatto, P. A.; Arajo, R. P. A.; Ramos, M. L. L. C.; Procedimentos para Utilizao de Testes de Toxicidade no Controle de Efluentes Lquidos, Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB): So Paulo, 1990. 5. American Public Health Association, American ater orks Association, ater Environment Federation; Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th ed., American Public Health Association: ashington, 1998. 6. Harmel, V. C.; Dissertao de Mestrado, Universidade Regional de Blumenau, Brasil, 2004. 7. Zakrzewski, S. F.; Principles of Environmental Toxicology, American Chemical Society: ashington, 1994. 8. Kendall, R. J.; Anderson, T. A.; Baker, R. J.; Bens, C. M.; Carr, J. A.; Chiodo, L. A.; Cob III, G. P.; Dickerson, R. L.; Dixon, K. R.; Frame, L. T.; Hooper, M. J.; Martin, C. F.; McMurry, S. T.; Patino, R.; Smith, E. E.; Theodorakis, . Em Casarett and Doulls Toxicology The Basic Science of Poisons; Klaassen, C. D., ed.; 6th ed., MacGraw-Hill: New York, 2001, cap. 29.

9. Hodgson, E. Em A Textbook of Modern Toxicology; Hodgson, E., ed.; 3rd ed., John iley & Sons: New Jersey, 2004, cap. 1. 10. James, R. C.; Roberts, S. M.; illiams, P. L. Em Principles of Toxicology: Environmental and Industrial Applications; illiams, P. L.; James, R. C.; Roberts, S. M., eds.; 2nd ed., John iley & Sons: New York, 2000, cap. 1. 11. Yu, M.-H.; Environmental Toxicology: Biological and Health Effects of Pollutants, 2nd ed., CRC Press: Boca Raton, 2005. 12. Stenersen, J.; Chemical Pesticides - Mode of Action and Toxicology, CRC Press: Boca Raton, 2004. 13. de Kruijf, H. A. M. Em Manual on Aquatic Ecotoxicology; de Kruijf, H. A. M.; de Zwart, D., eds.; Kluwer Academica Publishers: Dordrecht, 1988, cap. 4. 14. Rand, G. M.; ells, P. G.; McCarty, L. S. Em Fundamentals of Aquatic Toxicology: Effects, Environmental Fate, and Risk Assessment; Rand, G. M., ed.; 2nd ed., Taylor & Francis: ashington, 1995, cap. 1. 15. Adams, . J.; Rowland, C. D. Em Handbook of Ecotoxicology; Hoffman, D. J.; Rattner B. A.; Burton Jr., G. A.; Cairns Jr., J., eds.; 2nd ed., Lewis Publishers: Boca Raton, 2003, cap. 2. 16. Slooff, . Em ref. 13, cap. 17. 17. Ravera, O.; Ann. Chim. (Rome, Italy) 2004, 94, 495. 18. Holt, M. S.; Food Chem. Toxicol. 2000, 38, S21. 19. Shea, D. Em ref. 9, cap. 27. 20. Leblanc, G. A. Em ref. 9, cap. 26. 21. Meent, D.-v. Em ref. 13, cap. 9. 22. Lyman, . J. Em ref. 14, cap. 15. 23. Shaw, I. C.; Chadwick, J.; Principles of Environmental Toxicology, Taylor & Francis: Philadelphia, 1998. 24. Alberici, R. M.; Tese de Doutorado, Universidade de Campinas, Brasil, 1996. 25 Baird, C.; Qumica Ambiental, traduo: Recio, M. A. L.; Carrera, L. C. M.; 2a ed., Bookman: Porto Alegre, 2002. 26. Bruggeman, . A. Em ref. 13, cap. 9. 27. Bartels, P.; Tmpling Jr., . V.; Sci. Total Environ. 2007, 374, 143. 28. Little, E. E.; Calffe, R. D.; Theodorakos, P.; Brown, Z. A.; Johnson, C. A.; Environ. Sci. Pollut. Res. 2007, 14, 333. 29. Corami, F.; Capodaglio, G.; Turetta, C.; Bragadin, M.; Calace, N.; Petrnio, B. M.; Ann. Chim. (Rome, Italy) 2007, 97, 25. 30. Lamelas, C.; Slaveykova, V. I.; Environ. Sci. Technol. 2007, 41, 4172. 31. Boethling, R. S.; Sommer, E.; DiFiore, D.; Chem. Rev. 2007, 107, 2207. 32. Hermens, J. L. M.; Heringa, M. B.; Laak, T. L.; J. Toxicol. Environ. Health, Part A 2007, 70, 727. 33. Connell, D. .; Miller, G. J.; Chemistry and Ecotoxicology of Pollution, John iley & Sons: New York, 1984. 34. Arnot, J. A.; Gobas, F. A. P. C.; Environ. Rev. 2006, 14, 257. 35. Spacie, A.; McCarty, L. S.; Rand, G. M. Em ref. 14, cap. 16. 36. Reginatto, V.; Tese de Doutorado, Universidade de Campinas, Brasil, 1998. 37. Castillo, G. C.; Vila, I. C.; Neild, E.; Environ. Toxicol. 2000, 15, 370. 38. van Leeuwen, C. J. Em ref. 13, 1988, cap. 18. 39. Ronco, A.; Bez, M. C. D.; Granados, Y. P. Em ref. 2, cap. 3. 40. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.227, Teste de toxicidade com a bactria luminescente Vibrio fischeri: mtodo de ensaio, So Paulo, 2003. 41. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.228, Teste de toxicidade aguda utilizando Spirillum volutans: mtodo de ensaio, So Paulo, 1988. 42. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.020, gua - teste de toxicidade com Chlorella vulgaris: mtodo de ensaio, So Paulo, 1991. 43. Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT); Norma Tcnica NBR12648, Ecotoxicologia aqutica - Toxicidade crnica - Mtodo de

1830

Costa et al.

Quim. Nova

ensaio com algas (Chlorophyceae), 2. ed., Rio de Janeiro, 2005. 44. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.018, gua teste de toxicidade aguda com Daphnia similis Claus, (Cladocera, Crustacea): mtodo de ensaio, So Paulo, 1994. 45. Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT); Norma Tcnica NBR12713, Ecotoxicologia aqutica - Toxicidade aguda - Mtodo de ensaio com Daphnia spp (Crustacea, Cladocera), Rio de Janeiro, 2004. 46. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.021, gua do mar teste de toxicidade aguda com Artemia: mtodo de ensaio, So Paulo, 1991. 47. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.022, gua avaliao de toxicidade crnica, utilizando Ceriodaphnia dubia Richard, 1894 (Cladocera, crustacea): mtodo de ensaio, So Paulo, 1994. 48. Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT); Norma Tcnica NBR13373, Ecotoxicologia aqutica - Toxicidade crnica - Mtodo de ensaio com Ceriodaphnia spp (Crustacea, Cladocera), 2. ed., Rio de Janeiro, 2005. 49. Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB); Norma tcnica L5.019, gua teste de toxicidade aguda em peixes; mtodo de ensaio, So Paulo, 1990. 50. Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT); Norma Tcnica NBR15088, Ecotoxicologia aqutica - Toxicidade aguda - Mtodo de ensaio com peixes, 2. ed., Rio de Janeiro, 2004. 51. Leblanc, G. A. Em ref. 9, cap. 11. 52. Villegas-Navarro, A.; Santiago, M. R.; Prez, F. R.; Rodrguez, R.; Environ. Int. 1997, 23, 535. 53. Bez, M. C. D.; Rossini, G. D. B.; Granados, Y. P. Em ref. 2, cap. 5. 54. Hamilton, M. A.; Russo, R. C., Thurston, R.V.; Environ. Sci. Technol. 1977, 11, 714. 55. Granados, Y. P.; Ronco, A.; Bez, M. C. D. Em ref. 2, cap. 4.5. 56. Lewis, M. A. Em ref. 14, cap. 4.

57. Cleuvers, M.; eyers, A.; Water Res. 2003, 37, 2718. 58. Cooney, J. D. Em ref. 14, cap. 2. 59. Tatarazako, N.; Oda, S.; atanabe, H.; Morita, M.; Igushi, T.; Chemosphere 2003, 53, 827. 60. Buratini, S. V.; Bertoletti, E.; Zagatto, P. A.; Bull. Environ. Contam. Toxicol. 2004, 73, 878. 61. Vesela, S.; Vijverberg, J.; Aquat. Ecol. 2007, 41, 67. 62. Beatrici, A. C.; Trabalho de Concluso de Curso, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Brasil, 2001. 63. Mathews, R. S.; Free Radical Biol. Med. 1995, 18, 919. 64. Nguyen, H.; Ogwuru, N.; Duong Q.; Eng, G.; Appl. Organomet. Chem. 2000, 14, 349. 65. Nunes, B. S.; Carvalho, F. D.; Guilhermino, L. M.; Stappen, G. V.; Environ. Pollut. 2006, 144, 453. 66. Zwart, D. D.; Slooff, .; Aquat. Toxicol. 1983, 4, 129. 67. Coleman, R. N.; Qureshi, A. A.; Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1985, 35, 443. 68. Boluda, R.; Quintanilla, J. F.; Bonilla, J. A.; Sez, E.; Gamn, M.; Chemosphere 2002, 46, 355. 69. Parvez, S.; Venkataraman, C.; Mukherji, S.; Environ. Int. 2006, 32, 265. 70. adhia, K.; Thompson, K. C.; Trends Anal. Chem. 2007, 26, 300. 71. Panouillres, M.; Boillot, C.; Perrodin, Y.; Ecotoxicology 2007, 16, 327. 72. Ince, N. H.; Dirilgen, N.; Apikyan, L. G.; Tezcanli, G.; stn, B.; Arch. Environ. Contam. Toxicol. 1999, 36, 365. 73. Abessa, D. M. S.; Sousa, E. C. P. M.; Tommasi, L. R.; Revista de Geologia 2006, 19, 253. 74. Ingersoll, C. G. Em ref. 14, cap. 8. 75. Filho, R. ; de Arajo, J. C.; Vieira, E. M.; Quim. Nova 2006, 29, 817. 76. http://www.environmental-expert.com/articles/article1210/article1210. htm, acessada em Setembro 2007.