UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

QUMICA CLNICA

PRCTICA I

PRCTICA No. 1: EXAMEN GENERAL DE ORINA (EGO)

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. En la prctica se realiz el Examen General de Orina (EGO) a varios pacientes, primeramente como un examen de rutina y segundo con la finalidad de determinar la existencia de una posible enfermedad en los riones y el tracto urinario. Primeramente se realiz el Examen Fsico para determinar el aspecto, color, olor, etc.; en segundo trmino se realiz el Examen Qumico, para lo que se utiliz un refractmetro y/o urinmetro para leer las tiras reactivas a las que se les agreg la orina de cada paciente (Adn Cano Cano y Germn Ayala Sandoval), este proceso tambin se realiz de forma manual, comparando los cambios de color con las referencias del contenedor de tiras reactivas, asi se pudieron confirmar resultados; como tercer punto se realiz un frotis con la orina, donde se le agreg el colorante Sternheimer-Malbin, este frotis en fresco se observ en el microscopio con la finalidad de determinar alguna anormalidad en la orina o si se encuentra bien de salud, adems de que se comprueban algunos resultados positivos que se obtuvieron en una de las muestras. INTRODUCCIN. La orina es un lquido muy complejo formado por 95% de agua y 5% de slidos, constituye el producto final realizado por millones de clulas del sistema renal y urinario del metabolismo y tiene un gasto promedio de 1-1.5 litros de orina por da, que depende de la ingestin de lquidos. A travs de la orina se excreta gran variedad de productos metablicos de desecho. La orina contiene miles de sustancias disueltas, aunque las 3 principales son agua, urea y cloruro de sodio. Se excretan mas slidos a travs de la orina que por cualquier otra va, la composicin de la orina depende en gran parte de la calidad y cantidad de material excretado. Algunos componentes de la sangre, como la glucosa, tienen un umbral renal, esto es, que deben alcanzar un nivel en la sangre antes de que cada sustancia sea excretada en la orina. El examen general de orina es una prueba muy importante en los individuos que ingresan al hospital y muchas veces forman un estudio integral del paciente. Es uno de los indicadores ms tiles de salud o enfermedad. Este anlisis tiene dos propsitos: El primero es detectar anormalidades en el que el rin funciona normalmente pero excreta cantidades anormales de productos metablicos especficos para determinar enfermedad. El segundo propsito es detectar alteraciones que modifiquen el funcionamiento de los riones o del aparato urinario. Los riones enfermos no funcionan normalmente para regular el volumen y la composicin de los lquidos del organismo ni para mantener la homeostasis. El examen general de orina es muy til para diagnosticar nefrosis (degeneracin del rin sin inflamacin), nefritis (inflamacin del rin), pielonefritis (infeccin bacteriana) o glomerulonefritis (sin infeccin) y cistitis.

La realizacin cuidadosa del examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnstico diferencial de numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio obtenidos por medio de este anlisis, se logran sin dolor, dao o tensin para el paciente. Esta es la razn por la cual, la realizacin e interpretacin correcta del anlisis de orina, por parte del laboratorio permanecer siempre como una herramienta esencial ms no definitiva de la prctica clnica. El anlisis de orina se compone de dos partes: 1) Un anlisis macroscpico, en el cual se determinan las caractersticas fisicoqumicas (apariencia, gravedad especfica y la medicin de los constituyentes qumicos por medio de la tira). 2) Un examen microscpico del sedimento, en campo claro o contraste de fases, para verificar hematuria, piuria, cilindruria, cristaluria, y otros signos. Por medio de este simple examen de orina, un uromicroscopista experimentado puede detectar y monitorear muchas entidades que afectan al rin y al tracto urinario inferior. Los resultados obtenidos proporcionan informacin referente al metabolismo de carbohidratos, funcin heptica y renal, balance cido-base e infecciones del tracto urinario. En el examen general de orina es necesario tomar en cuenta lo siguiente: Extraccin a chorro de la muestra de orina: Preferentemente la mejor muestra es la de la maana, porque es la orina que tiene por toda la noche la vejiga, es una muestra fidedigna, pero si se levantan a las 5 de maana, lo ms recomendable es guardarla en la refrigeradora a 4C para que se conserve porque las caractersticas no cambian o cambian muy poco, pero si dejan la orina afuera (temperatura ambiente) por ms de 40 minutos las caractersticas de la orina cambian (he ah la importancia de llevar la muestra lo ms pronto posible al laboratorio de preferencia inmediatamente): el pH aumenta, se hace ms alcalina, el nmero de bacterias aumenta, los leucocitos se lisan, la densidad de la orina cambia y si es un buen laboratorista va a encontrar una condicin de orina que no es la del paciente. El examen de orina debe ser elaborado no ms de una hora despus de ser emitido, de preferencia inmediatamente despus de ser emitido. Coleccin de la muestra: la mujer hay que explicar que debe sentarse en una silla o bao con una mano abrirse los labios mayores y con la otra tomar el frasco con que va a tomar la muestra, previamente debe lavarse de adelante hacia atrs (las mujeres siempre deben lavarse o limpiarse de adelante hacia atrs nunca de atrs hacia delante porque las bacterias las llevara hacia la vagina o la uretra), luego dejar que escape la primera parte de la orina, adems esta es la parte que est ms concentrada y tiene ms cosas que se asientan durante la noche, y cuando sientan que van a la mitad tomen la muestra, no la contaminen con nada, cierre el frasco y la lleva al laboratorio. Se llama chorro espontneo a orinar y poner el frasco. El 99.99% de las veces se toma por este mtodo, pero es el 100% de las veces la peor forma de tomarla. La mejor forma de tomar la orina es a travs puncin suprapbica. La desventaja con la muestra a chorro espontneo es que arrastra bacterias en su camino, pasa a travs de los genitales y por las piernas, por eso es el peor mtodo de recoleccin.

OBJETIVOS. Practicar los diferentes mtodos para realizar un Examen General de Orina. Determinar y diagnosticar a tiempo la presencia de alguna enfermedad en el rin, en el tracto urinario, de hgado o algn desorden metablico. Monitorear la efectividad de un tratamiento. Dar seguimiento de una enfermedad renal no infecciosa, primaria o secundaria a enfermedad crnica. Dar seguimiento a pacientes con diabetes, estados metablicos, etc. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Recipiente transparente, de plstico o de algn material inerte a los componentes de la orina, de rosca fcil y debe sellar hermticamente. Tubo cnico. Pipetas Pasteur. Portaobjetos. Cubreobjetos. Tiras reactivas (Combur10 Test).

Mtodos. Metodologa para Refractmetro URILUXS: 1) Se sumerge la tira reactiva en la orina y se deja dentro de la muestra un lapso de 1-2 segundos. 2) Se retira la tira reactiva de la muestra de orina por el borde de la boca del tubo cnico (rosando la boca del tubo). 3) Quitar el exceso de orina de la parte posterior y las partes laterales de la tira reactiva; esto se realiza secando estas partes en una sanita. 4) Introducir la tira reactiva en el refractmetro (atorando la tira reactiva en la cejita del refractmetro). 5) Presionar botn de inicio de la prueba y esperar el tiempo que dure la prueba (por lo regular dura alrededor de 1 como mximo). 6) Una vez leda la tira reactiva se retira del refractmetro. 7) Se arranca la hoja con los resultados obtenidos. NOTA: Si se utilizara el mtodo manual es simplemente sumergir la tira reactiva y leer los cambios en la coloracin de cada celdilla de la tira y compararlos con los valores de referencia que se encuentran en el contenedor de tiras reactivas COMBUR TEST M. Metodologa para realizar frotis en fresco: 1) Tomar una pequea muestra de orina del recipiente donde se contiene la muestra del paciente a analizar.

2) 3) 4) 5)

Se centrifuga la muestra de orina a 1500 RPM por 5 minutos. Tomar 1 ml del sobrenadante y el resto decantar en el recipiente de la orina del paciente. Decantar el mililitro en el tubo de fondo cnico. Adicionar 2 gotas del colorante Sternheimer-Malbin y mezclar suavemente hasta una completa disolucin. 6) Tomar y colocar una gota en un portaobjetos. 7) Observar al microscopio. RESULTADOS E INTERPRETACIN. NOMBRE: Germn Ayala Sandoval. EXAMEN FSICO: Aspecto: Transparente. Color: Amarillo paja. Olor: Sui Generis.

EXAMEN QUMICO:

En los resultados obtenidos en el refractmetro se encontr que el urobilingeno y la bilirrubina se encontraban elevadas, ambas con 1 mg/dL: Pruebas Urobilingeno Bilirrubina Valores obtenidos 1 mg/dL 1 mg/dL Valores de Referencia 0-0.2mg/100ml 0.5-<1mg/24hrs

EXAMEN MICROSCPICO: En el frotis se encontr la presencia de: Cristales de urato amorfo:

Cristales de oxalato:

Clulas epiteliales:

NOMBRE: Adn Cano Cano. EXAMEN FSICO: Aspecto: Transparente. Color: Amarillo paja. Olor: Sui Generis.

EXAMEN QUMICO: En los resultados obtenidos en el refractmetro no se encontr la presencia de niveles elevados o disminuidos de las diferentes pruebas realizadas.

EXAMEN MICROSCPICO: En el frotis se encontr la presencia de: Cristales de cido rico:

Cristales de urato amorfo:

Cristales de oxalato de calcio:

Clulas de epitelio plano estratificado de la uretra (Clulas Intermedias):

Clulas de epitelio transicional o urotelio (Vejiga, urteres y pelvis renal):

CONCLUSIONES. Se puede concluir que ambos individuos se encuentran en perfectas condiciones de salud, ya que las pruebas realizadas se encontraron dentro de los valores normales. Solo se considera al paciente Germn Ayala Sandoval con niveles un poco elevados pero normales de bilirrubina y urobilingeno, lo que puede concluir que ambos individuos no presentan problemas de la funcin renal, ni de problemas en el tracto urinario y los riones o algn desorden metablico. APENDICE. PRINCIPIO QUMICO: pH: La prueba se basa en la combinacin de tres indicadores: el rojo de metilo, el azul de bromotimol y la fenolftalena, que reaccionan con los iones de hidrgeno, presentes en la muestra de orina. Las reacciones producen cambios cromticos, que van del naranja al verde amarillo y al azul. Densidad: La prueba, mediante reaccin con un formador de complejos y deteccin de los protones liberados, mide las concentraciones inicas en orina. Como resultado de las reacciones se producen cambios cromticos. Urobilingeno: Una sal de diazonio estable, p-metoxibenceno diazoniofluoborato presente en la tira reactiva, reacciona casi inmediatamente con el urobilingeno, dando lugar a la formacin de un colorante azoico rojo Bilirrubina: La prueba se basa en la unin de la bilirrubina con una sal de diazonio estable (2,6diclorobenceno-diazoniofluoborato) en un medio cido del papel reactivo. La ms leve coloracin rosada indica un resultado positivo.

 Nitritos: La prueba se basa en el principio del ensayo de Griess y es especfica para el nitrito. La reaccin revela la presencia de nitrito y por lo tanto, indirectamente, la existencia de bacterias formadoras del mismo en la orina, coloreando el tampn de la prueba de color rosa rojizo. Leucocitos: La tirilla tiene una zona que contiene un ster de indoxilo que es disociado por la esterasa leucocitaria. El indoxilo libre reacciona con una sal de diazonio para formar una tincin violeta, que el bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector de tirillas detectar. Sangre: La prueba detecta sangre completa (eritrocitos), sangre lisada (hemoglobina) y mioglobina. Para lograr el objetivo, la prueba se basa en la accin peroxidativa de la hemoglobina o la mioglobina que cataliza la oxidacin del indicador cromtico (TMB: tetrametil-bencidina) mediante un hidroperxido orgnico, el 2,5-dimetilhexano-2,5-dihidroperxido, para producir un color azul verdoso que sobre el papel amarillo de la tirilla. En las zonas de reaccin, de acuerdo al patrn de coloracin es posible distinguir eritrocitos intactos de hemolizados. Los eritrocitos intactos se hemolizan sobre el papel reactivo y la hemoglobina liberada inicia la reaccin de color, formando puntos verdes visibles y por el contrario, la hemoglobina disuelta en la orina (eritrocitos lisados), o la mioglobina, origina un color verde uniforme. Protenas: La prueba se basa en el denominado error de protena de los indicadores de pH. En la zona de reaccin de la tirilla hay una mezcla tampn y un indicador que cambia de color amarillo a verde en presencia de protenas en la orina, aunque el pH se mantenga constante. La reaccin es particularmente sensible a la albmina, siendo positiva a partir de concentraciones de albmina mayores de 6 mg/dL. Glucosa: La deteccin de la glucosa se basa en una reaccin especfica de la glucosa oxidasa/ peroxidasa (mtodo GOD/POD), en la cual la D-glucosa se oxida enzimticamente por el oxgeno del aire y se convierte en D-gluconolactona. El perxido de hidrgeno resultante, oxida, bajo la catlisis de la peroxidasa, al indicador (TMB: tetra-metil-bencidina) para dar una coloracin azul-verdosa sobre el papel amarillo reactivo de la tirilla Cuerpos cetnicos: La prueba se basa en el principio de la prueba de Legal. El cido acetoactico y la acetona reaccionan con nitroprusiato sdico y glicina en un medio alcalino para formar un complejo color violeta, que el bacterilogo mediante una tabla de comparacin puede leer o el lector de tirillas detectar para determinar la presencia de cetonas en la orina. La reaccin es especfica para el cido acetoactico y la acetona. DISPOSICIN DE RPBI. PASO 1 IDENTIFICACIN DE LOS RESIDUOS. Los desechos deben de ser identificados inmediatamente despus del procedimiento que los gener, en el sitio donde se originaron y por el personal que los gener, esta prctica evita la

reclasificacin de los desechos, disminuyendo los riesgos para el personal encargado de la recoleccin de los residuos. Para su correcta identificacin y posterior envasado, la separacin de los residuos se debe de realizar de acuerdo a su estado fsico (lquido o slido) y su tipo, como se indica a continuacin: Objetos punzocortantes: Residuos no anatmicos (gasas, torundas o campos saturados, empapadas o goteando lquidos corporales y secreciones de pacientes con tuberculosis o fiebres hemorrgicas). Patolgicos (Placentas, piezas anatmicas que no se encuentren en formol) gua para el manejo de los residuos peligrosos biolgico infecciosos en unidades de salud Sangre lquida y sus derivados. Utensilios desechables utilizados para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes biolgico- infecciosos y muestras biolgicas para anlisis. PASO 2 ENVASADO DE LOS RESIDUOS GENERADOS. Una vez que los residuos han sido identificados y separados de acuerdo al tipo y estado fsico, estos debern ser envasados de acuerdo a la tabla siguiente. La razn para usar diferentes recipientes para diferentes RPBI es porque distintos residuos tienen diferentes procesos en su disposicin final: TIPO DE RESIDUOS o Punzocortantes: o Agujas de jeringas desechables, navajas, lancetas, agujas de sutura, bisturs y estiletes de cateter. EXCEPTO MATERIAL DE VIDRIO ROTO DE LABORATORIO o No anatmicos: Materiales de curacin empapados en sangre o lquidos corporales ESTADO ENVASADO / COLOR FISICO o Recipientes rgidos de polipropileno / ROJO o Slidos

RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICO-INFECCIOSOS Slidos Bolsas de plstico / ROJO o Materiales desechables que contengan secreciones pulmonares de pacientes sospechosos de tuberculosis o sospecha/diagnstico fiebres hemorrgicas o enfermedades emergentes Slidos Bolsas de plstico / ROJO o Patolgicos: Placentas, partes de tejido humano, partes del cuerpo (que no se encuentren en formol) Slido Bolsas de plstico /AMARILLO o Sangre lquida, y sus derivados excluyendo sangre seca gua para el manejo de los residuos peligrosos biolgico infecciosos en unidades de salud. o Muestras para anlisis de laboratorio excluyendo orina y excremento

Lquida Recipiente hermtico / ROJO Lquido Recipiente hermtico /AMARILLO o Materiales desechables usados para el cultivo de agentes infecciosos. Slidos Bolsas de plstico / ROJO o Fluidos corporales (lquidos: sinovial, pericrdico, pleural, cefalo-raquideo y peritoneal) o Lquidos Recipiente hermtico / ROJO PASO 3 ALMACENAMIENTO TEMPORAL. Para evitar que los RPBI se mezclen con la basura comn, se debe de preestablecer un sitio para el almacenamiento temporal de los RPBI. Los RPBI debern almacenarse en contenedores con tapa y permanecer cerrados todo el tiempo. No debe de haber residuos tirados en los alrededores de los contenedores. Es importante que el rea de almacenamiento est claramente sealizada y los contenedores claramente identificados segn el tipo de residuo que contenga. La norma mdica: establece los tiempos mximos de almacenamiento, de acuerdo al tipo de unidad Hospitales con 1 a 5 camas: 30 das. Hospitales con 6 a 60 camas: 15 das. Hospitales con ms de 60 camas: 7 das.

PASO 4 RECOLECCIN Y TRANSPORTE EXTERNO Para disminuir riesgos, el personal encargado de la recoleccin de los residuos slidos dentro del hospital debe de estar capacitado en su manejo y conocer ampliamente los riesgos que implica su trabajo. Gua para el manejo de los residuos peligrosos biolgico infecciosos en unidades de salud. Qu debe saber el personal que recolecta los residuos? 1) Los distintos tipos de residuos que se generan en el hospital (basura municipal, RPBI, residuos qumicos peligrosos, residuos de reactivos qumicos y medicamentos caducos). 2) Conocer los diferentes envases para cada tipo de residuo. 3) El manejo para cada tipo de residuo. 4) El equipo de proteccin que debe usar. 5) El procedimiento para su recoleccin. IMPORTANTE! 1) La recoleccin deber realizarse una o dos veces al da o cuando estn al 80% de su capacidad. 2) Las bolsas de recoleccin no deben de llenarse ms de un 80%. (Envasado) 3) No se deben de comprimir las bolsas. (Envasado)

4) Cerrar las bolsas con un mecanismo de amarre seguro que evite que los residuos salgan (nudo o cinta adhesiva). 5) Verificar que los contenedores estn bien cerrados. 6) La basura comn se colocar en botes o bolsas de plstico de cualquier color excepto roja o amarilla. El transporte de los RPBI implica riesgos para el personal as como para los pacientes. Por lo tanto deber existir una ruta preestablecida para trasladar los residuos en forma segura y rpida desde las reas generadoras hasta el rea de almacenamiento temporal, evitando pasar por la sala de espera o en horarios de comida de pacientes. Si la unidad mdica cuenta con carros manuales para transportar residuos, stos no debern rebasar su capacidad de carga para evitar que los residuos se caigan de los carros y se dispersen durante su recorrido. Los carros manuales de transporte de residuos se lavarn diario con agua y jabn para garantizar sus condiciones higinicas. PASO 5 TRATAMIENTO. Las instituciones de salud, pueden realizar el tratamiento final de los residuos dentro de la misma unidad mdica. La forma ms limpia y barata es utilizando un autoclave, excepto para punzocortantes y partes de cuerpo. Para lograr la desinfeccin se colocan las bolsas rojas resistentes al calor hmedo y bien cerradas, en el autoclave a 121 centgrados con 15 libras de presin durante 30 minutos, en este caso las cajas de petri desechables y otros dispositivos de plstico utilizados en el laboratorio quedan irreconocibles 2. Una vez estriles e irreconocibles se podrn disponer como basura comn. Perdida de las caractersticas fsicas y biolgico-infecciosas del objeto para no ser reutilizado. La autoclave utilizada para el tratamiento de los RPBI no puede ser utilizada para esterilizar otros instrumentos mdicos, por lo que se recomienda ubicar un sitio especial para instalar el autoclave slo para el tratamiento de estos residuos, una sugerencia es colocarlo dentro del mismo almacn temporal exclusivo para RPBI. En caso de no contar con una autoclave, los RPBI se deben de almacenar temporalmente dentro de los lmites de tiempo mencionados anteriormente, para ser recolectados ms tarde por el servicio especializado para estos residuos. Los centros de salud de difcil acceso que no cuenten con servicio de recoleccin podrn optar por tratar estos residuos dentro de la unidad mdica como se mencion anteriormente.

PASO 6 DISPOSICIN FINAL. Los RPBI que hayan sido tratados podrn disponerse en los camiones recolectores de basura comn, mientras que los RPBI sin tratamiento debern enviarse a empresas recolectoras autorizadas. EQUIPO DE SEGURIDAD: Guantes. Cubre bocas. Bata. Lentes. BIBLIOGRAFA. 1) Medina, M; Villanueva, J; Gala, E; Larrocha M; Medina, C. Medina, M; Villanueva, J; Gala, E; Larrocha M; Medina, C. Comparacin entre las lecturas de las tiras de orina Combur10Test M y Multistix 10 SG. Asociacin mexicana de Bioqumica clnica 2) Henry Bernard J.; El laboratorio en el diagnstico clnico; ed. Marbn; 2003. 3) http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/Blog/cns!204AC1C68E772D5!1461.entry ?sa=330561201 4) http://www.infored.com.mx/noticias_1711_Examen-General-de-Orina.html 5) http://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:OF2XuBblAOsJ:www.dgepi.salud.gob.mx/pa ndemia/PS%2520materiales/Guiamanejoresiduos.pdf+disposicion+de+RPBI&hl=es&gl=mx &pid=bl&srcid=ADGEESjskDhQbQZo_WonbGDzhW3BOSjz7ZWEwVYz2_KKjWlaKeBhf5GTIgR8E3xuJndp0tZhsp3bhTR0nFHIz6_242AlCEnwaSby6hhzuPbvRhjEm8cSvr6-NvnuwnAr1uKDcEP9Q&sig=AHIEtbSQUIgKlAB3eTUPdkfNQ7GzJpI7Cw

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUMICA CLNICA

PRCTICA II

PRCTICA No. 2: GLUCOSA

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Se realiz la cuantificacin de glucosa en sangre a partir de una muestra sangunea de un paciente. La muestra se tom con el sistema vacutainer y se centrifug para la obtencin del suero. Se marcaron 5 tubos de ensaye como muestra, blanco, control normal, control patolgico y estndar, a los cuales se les agreg ciertos volmenes de los reactivos indicados y se incubaron 5 minutos a 37oC, donde posteriormente se construy la curva de calibracin con los controles normal y patolgico y finalmente se practic la cuantificacin en el espectrofotmetro Humalyzer 2000 a una longitud de onda de 505nm. INTRODUCCIN. La Glucosa es el principal carbohidrato que es utilizado por las clulas del organismo como una fuente principal para la obtencin de la energa necesaria para la realizacin del metabolismo. Esa energa es obtenida a partir de la gluclisis, que es el paso inicial en la obtencin de la energa y en donde se obtienen dos molculas de ATP, posteriormente esa glucosa es transformada en dos molculas de cido pirvico y finalmente en dos molculas de Acetil CoA, las cuales ingresan al ciclo de Krebs y a travs de la cadena respiratoria, en la mitocondria de las clulas, se obtienen de 36 a 38 molculas de ATP. Ese monosacrido tan importante e indispensable, al igual que otros como la fructosa y la galactosa, son obtenidos a partir de la dieta y llevados al hgado inmediatamente despus de su absorcin en el intestino delgado, una vez en el hgado la glucosa puede ser utilizada de dos maneras: una degradacin oxidativa por la va glucoltica para el aporte de energa en el organismo y para la produccin de esqueletos carbonados para la sntesis de componentes celulares, o un almacenamiento en forma de glucgeno llamada gluconeognesis. Existen, adems del hgado, ciertos tejidos que tienen la capacidad de almacenar la glucosa, como es el caso del msculo esqueltico. Este tejido tiene la particularidad de utilizar la energa a partir de dos vas: una va oxidativa o aerobia que es una va lenta de obtencin de energa, otra anaerobia la cual la glucosa la transforma en lactato, siendo esta va la ms rpida en la obtencin de la energa y tambin tiene un tercer sistema que es el de creatina-fosfocreatina, que es el paso inicial para el movimiento muscular. Para poder regular todo ese metabolismo descrito anteriormente, se debe de contar con una participacin de tipo hormonal la cual va aumentar o disminuir la glucosa en sangre. Esas hormonas son el Glucagn y la Insulina. Ambas hormonas son secretadas por el pncreas, especficamente por las clulas y por las clulas de los islotes de Langerhans respectivamente, en donde el Glucagn se va a liberar cuando los niveles de glucosa en sangre son bajos, ya que promueve la liberacin de la glucosa almacenada en el hgado en forma de glucgeno, activando la glucogenolisis y tambin la liplisis en el tejido adiposo; por otro lado la insulina se libera cuando los niveles de glucosa en sangre son elevados, para bajar su concentracin, por lo que promueve la gluconeognesis en el hgado y la conversin del Acetil CoA en cidos grasos y posteriormente en

triglicridos, que son almacenados en el tejido adiposo, tambin la insulina introduce la glucosa en el lquido intracelular. Existen otras hormonas que regulan los niveles de glucosa como: a) Adrenalina.- Inhibe la liberacin de insulina, potencia la glucogenolisis heptica y muscular e incrementa la liplisis en el tejido adiposo, lo que colabora en un aumento de la gluconeognesis. b) Cortisol.- Estimulacin de la gluconeognesis, colaborando tambin en la inhibicin del metabolismo de la glucosa en los tejidos perifricos. c) Somatotropina.- Acta inhibiendo la captacin de glucosa por los tejidos perifricos y la sntesis de lpidos a partir de glcidos. d) Somatostatina.- Acta preferentemente en el hipotlamo y en las clulas delta de los islotes pancreticos. Entre sus efectos est la inhibicin de la liberacin de Somatotropina por la hipfisis y la secrecin de glucagn e insulina, regulando de este modo la relacin entre ambas hormonas. As mismo, pueden generarse diferentes tipos de trastornos del metabolismo de la glucosa, que pueden ser detectados a partir de la realizacin de un examen de laboratorio de glucosa en sangre. Esas patologas pueden ser: 1. Diabetes Mellitus.- Sndrome caracterizado por una hiperglucemia que se debe a un deterioro en la secrecin o en la accin de la insulina. La hay de dos tipos: a) Tipo I.- Se debe a una destruccin selectiva autoinmunitaria de las clulas del pncreas. Esto se debe a una infiltracin en los islotes de pancreticos de linfocitos T, macrfagos y linfocitos B. se puede presentar a cualquier edad, pero es ms comn en la infancia y la adolescencia. Aqu los niveles de insulina son bajos o escasos y la concentracin de glucosa en sangre es muy elevada. Los pacientes con esta patologa se deben administrar insulina, por lo que a esta enfermedad tambin se le llama insulinodependientes. b) Tipo II.- Se caracteriza por una hiperglucemia y resistencia a la insulina, a causa de un defecto en los receptores celulares de la insulina, por lo que no puede ser introducida la glucosa en el lquido intracelular. Se presenta regularmente en personas mayores a los 30 aos de edad. 2. Diabetes relacionada a una mal nutricin.- Formacin de clculos en el conducto pancretico principal y en sus ramas, junto con una extensa fibrosis del pncreas. 3. Hiperglucemia sintomtica.- Se produce poliuria seguida de polidipsia y prdida de peso cuando los niveles elevados de glucosa plasmtica causan una glucosuria intensa y una diuresis osmtica que conduce a deshidratacin. La hiperglucemia puede causar tambin visin borrosa, fatiga y nuseas y llevar a diversas infecciones fngicas y bacterianas.

OBJETIVOS. Realizar la cuantificacin de glucosa en sangre por el mtodo GOD-POD para poder diagnosticar una anormalidad en el metabolismo de la glucosa al encontrar valores lejanos a los valores de referencia, que de ser as, y con la ayuda de otras pruebas clnicas confirmatorias, encontrar esa anomala para que el mdico pueda dar un seguimiento y un tratamiento al paciente. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Torniquete. Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro HUMALYZER 2000. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Reactivo enzimtico. Estndar a concentracin de 100mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo GOD-POD 1. Tomar una muestra de sangre venosa en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos:

TUBO MARCADO Muestra Estndar Control normal Control patolgico Blanco

Reactivo enzimtico 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Suero 10l 10l 10l 10l 10l

REACTIVOS Estndar ---------10l ----------------------------

Control normal ------------------10l -------------------

Control patolgico ---------------------------10l ----------

4. Mezclar e incubar durante 5 minutos a 37oC. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 505nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Reportar la concentracin de glucosa, ya sea directamente del equipo o bien con el empleo de la siguiente frmula: [Glucosa en sangre] = (Absorbancia de la muestra) ([Estndar]) Absorbancia del estndar NOTA: Las concentraciones de los controles deben de quedar dentro del siguiente rango: para el control normal de 92-124 mg/dl y para el control patolgico de 234 a 314mg/dl, para cumplir con la curva de calibracin como una medida de control de calidad. Para la glucosa posprandial se realiz el mismo procedimiento que el descrito anteriormente, solo que la glucosa se cuantific dos veces: una en ayunas y otra dos horas despus RESULTADOS. PACIENTE Germn Ayala Sandoval Oscar Hiram Castaeda Contreras PACIENTE Germn Ayala Sandoval Oscar Hiram Castaeda Contreras

GLUCOSA EN SANGRE (mg/dl) 84.1 71.0

VALORES DE REFERENCIA (mg/dl) 70 - 120

GLUCOSA EN AYUNAS (mg/dl) 41.0 84.1

GLUCOSA A LAS 2HRS. 72.0 71.0

VALORES DE REFERENCIA (mg/dl) < 140 > 140 y < 200: Intolerancia a la glucosa. > 200: Diabetes

CONCLUSIN. Ambos pacientes se encuentran dentro de los valores de referencia, por lo que no presentan alguna patologa en el metabolismo de los carbohidratos. En cuanto a la glucosa posprandial, el paciente Germn Ayala se encuentra dentro de los valores de referencia, indicando esto que no tiene una patologa en el metabolismo de los carbohidratos, en cambio el paciente Oscar Castaeda present una disminucin en la glucosa a las dos horas despus, por lo que debi aumentar, esto se debe a que no respet el paciente las indicaciones de la toma de muestra a las dos horas despus, por lo que su organismo ya comenzaba a entrar en una etapa de ayuno, pero aun as el paciente se encuentra dentro del rango normal. BIBLIOGRAFA. 1. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. pp. 653-668. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill.

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUMICA CLNICA

PRCTICA III

PRCTICA No. 3: UREA Y CIDO RICO

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Para la determinacin de la urea en sangre se tomo una muestra de sangre venosa del paciente en un tubo rojo (sin anticoagulante) y se centrifug, para obtener el suero. Posteriormente se tomaron 5 tubos de ensaye y se etiquetaron como muestra, blanco, estndar, control normal y control patolgico, con la subsecuente adicin a cada uno de los volmenes y reactivos especificados y se llevaron a incubacin por 3 minutos a 37oC. Posteriormente se realiz la curva de calibracin con los controles normal y patolgico para cumplir con el control de calidad y finalmente se ley la muestra a 340nm en el espectrofotmetro Gnesis 8. INTRODUCCIN. Las protenas son biomolculas esenciales necesarias para la formacin de estructuras celulares, como funcin hormonal, funcin enzimtica, de transporte, entre otras muchas funciones que son vitales para un ptimo funcionamiento del metabolismo en nuestro organismo. Por esta razn, nuestro organismo siempre va a requerir de un aporte proteico que se va a realizar de dos maneras: la primera a travs de una biosntesis de protenas, que estas no son esenciales para el organismo porque provienen de la biosntesis, y la segunda a travs de su ingestin en la dieta las llamadas protenas esenciales, que nuestro organismo no puede sintetizar. Esas protenas son absorbidas a lo largo del intestino delgado en forma de aminocidos y son transportados al hgado para ser metabolizados de diferentes maneras como por ejemplo en la produccin de glucosa, de protenas, en la formacin de la urea, entre otras funciones. Ese metabolismo en el hgado y en los tejidos se realiza en tres pasos: 1. Transaminacin.- Reubicacin del grupo -amino (NH3+) de un aminocido en el grupo oxo de un cetocido (-cetoglutarato) para transformarlo en el L-glutamato. 2. Desaminacin oxidativa del glutamato.- El glutamato es transformado de nuevo en el cetoglutarato por la accin de la enzima glutamato deshidrogenasa, dejando libre al grupo amino (NH3+). 3. Transportadores de los grupos amino.- El amonio es transportado en plasma en forma de alanina y glutamina, hasta llegar al hgado para introducirse en el ciclo de la urea, que es la va metablica utilizada para eliminar los desechos nitrogenados del organismo que resultan del metabolismo de las protenas. La urea producida es transportada hacia el rin donde es eliminada a travs de la orina. En ocasiones, pueden existir patologas que estn involucradas en el ciclo de la urea que conllevan a una elevacin en la concentracin de la urea en sangre. Esas enfermedades que pueden presentarse son: a) Azoemia prerrenal.- Causada por una insuficiencia cardica, hemorrgia, deshidratacin, catabolismo de protenas incrementado y la terapia de corticosterorides. b) Uremia renal.- Originada por una insuficiencia renal aguda y crnica y una nefritis glomerular. c) Azoemia posrenal.- Realizada por una obstruccion del tracto urinario.

La gota, una de las enfermedades ms antiguas en los registros histricos mdicos, es un trastorno hereditario del metabolismo de las purinas (componentes de ciertas protenas, las nucleoprotenas), por el cual se acumulan concentraciones anormales de cido rico en la sangre. El cido rico es el resultado final del metabolismo de las purinas (partes de DNA y RNA). La conversin de purinas en cido rico se efecta principalmente en el hgado. Casi todo el cido rico en el plasma se encuentra en forma de urato monosdico. La mayor parte del cido rico se excreta por el rin, y algo por el sistema intestinal. Cuando aumenta la destruccin de los tejidos (como en diversos tipos de cncer) el cido rico aparece elevado en sangre, aunque la causa ms comn de su elevacin es la gota. Como consecuencia, se forman unas sales (uratos de sodio) que pueden depositarse en articulaciones pequeas y tejidos vecinos (tofos). Estos depsitos a su vez pueden daar las articulaciones y dar lugar a una artritis crnica. La enfermedad, que suele ocurrir despus de los 35 aos, se caracteriza por dolor artrtico por lo general localizado en un ataque sbito que se inicia en el dedo gordo del pie y que contina hacia arriba por la pierna. Puede presentarse de forma aislada o acompaarse, en algn momento de la evolucin, de litiasis renal rica y/o de la llamada nefropata gotosa. La gota es causada por un defecto en el metabolismo que provoca una sobreproduccin de cido rico o lleva a una reduccin de la capacidad del rin para eliminarlo. La causa exacta de este defecto metablico se desconoce. El riesgo aumenta en los hombres, mujeres posmenopusicas y personas que sufren de hipertensin. Asimismo, el consumo excesivo de alcohol, diabetes, obesidad, anemia de clulas falciformes y enfermedad renal aumentan el riesgo, como tambin la falta de medidas preventivas en aquellas personas que han experimentado episodios previos. Esta condicin tambin se puede desarrollar en personas que toman medicamentos que interfieren con la excrecin del cido rico. Las pruebas bioqumicas que exploran la funcin renal incluyen la determinacin de urea y creatinina que son indicadoras de la capacidad renal de filtracin. Evaluaciones repetidas de ambas, son tiles para comprobar la eficacia del tratamiento y la progresin de la enfermedad.

OBJETIVOS. Detectar una anormalidad en la concentracin de la urea Y cido rico en sangre por el mtodo cintico cuantitativo decreciente para diagnosticar una patologa relacionada al ciclo de la urea. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Torniquete. Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro GNESIS 8. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Buffer. 5:1 (Reactivo de trabajo) Enzimas. Estndar a concentracin de 30mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo cintico cuantitativo decreciente. 1. Tomar una muestra de sangre venosa en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos:

TUBO MARCADO Muestra Estndar Control normal Control patolgico

Reactivo de trabajo 2ml 2ml 2ml 2ml

Suero 20l ----------------------------

REACTIVOS Estndar ---------20l -------------------

Control normal ------------------20l ----------

Control patolgico ---------------------------20l

NOTA: El blanco es un tubo con agua destilada. 4. Mezclar e incubar durante 3 minutos a 37oC. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 340nm. La primera absorbancia se leer a los 30 segundos y la segunda absorbancia a los 90 segundos. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Calcular la concentracin del BUN (Nitrgeno Ureico en Sangre) con el empleo de la siguiente frmula: [BUN] = (Absorbancia 1 muestra Absorbancia 2 muestra) ([Estndar]) (Absorbancia 1 estndar Absorbancia 2 estndar) 7. Con la siguiente frmula, calcular la concentracin de urea con la siguiente frmula: [Urea en sangre] = (BUN) (2.14) NOTA: Las concentraciones de los controles deben de quedar dentro del siguiente rango: para el control normal de 37.5-50.5 mg/dl y para el control patolgico de 118 a 148mg/dl, para cumplir con la curva de calibracin como una medida de control de calidad.

Se colocaron en un tubo de ensaye 20L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 520nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica:

M STD CN CP BLANCO Suero 20L STD 20L CN/CP 20L 20L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml

cido rico Mtodo: Peroxidasa Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Buffer Reactivos de Trabajo 2.- Enzimas 3.- Estndar (STD) con una concentracin de 8mg/dl 4.- Control Negativo (CN) 5.- Control Positivo (CP) Primero se tomaron las muestras correspondientes de sangre venosa para obtener el suero y realizar el anlisis correspondiente. Se colocaron en un tubo de ensaye 20L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 520nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica:

M STD CN CP BLANCO Suero 20L STD 20L CN/CP 20L 20L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml

RESULTADOS. UREA: Paciente: Germn Ayala Sandoval. [BUN] = (1.455 1.431) (30mg/dl) = 7.6mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (7.6mg/dl) (2.14) = 16.264mg/dl Paciente: Oscar Hiram Castaeda Contreras. [BUN] = (1.450 1.434) (30mg/dl) = 5.1mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (5.1mg/dl) (2.14) = 10.914mg/dl Paciente: Germn Ayala Sandoval. [BUN] = (1.464 1.451) (30mg/dl) = 4.4mg/dl (1.084 0.990) [Urea en sangre] = (4.4mg/dl) (2.14) = 8.878mg/dl PACIENTE ABSORBANCIA 1 (MUESTRA) 1.455 ABSORBANCIA 2 (MUESTRA) 1.431 BUN (mg/dl) 7.6 UREA EN SANGRE (mg/dl) 16.264 VALORES DE REFERENCIA (mg/dl)

Germn Ayala Sandoval Oscar Hiram Castaeda Contreras Adn Cano Cano

17 49 (Urea) 1.450 1.434 5.1 10.914 8 23 (BUN) 1.464 1.451 4.4 8.878

Tabla de datos obtenidos en el equipo Humalyzer 2,000(cido rico)

Paciente Germn Ayala Sandoval Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras Concentracin (mg/dl) 5.2 4.8 5.9 Absorbancia 0.09 0.085 0.110 Intervalo de referencia Hombres: 3.4 7.0 mg/dl

CONCLUSIONES. Los valores de la urea salieron bajos porque los pacientes estn consumiendo solo las protenas necesarias para su metabolismo. En lo que respecta al cido rico la tabla de datos obtenidos se muestra de manera notoria que todos los resultados de los pacientes analizados se encuentran dentro del intervalo de referencia, en este caso para hombres, por lo cual no se hizo observacin alguna sobre estos datos, ya que no nos indican o no representan un proceso patolgico en dichas muestras analizadas. BIBLIOGRAFA. 1. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill.

APNDICE
DETERMINACIN DE CIDO RICO PRINCIPIO: El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno, el cual, en presencia de peroxidasa y un derivado del fenol oxida el cromgeno 4-aminoantipirina (4-AAP), dando una coloracin roja cuya intensidad es monitoreada a 520 nm. uricasa cido rico + 2 H2O + O2 --------------- Alantona + CO2 + H2O2 peroxidasa DHBS + 4-AAP + 2 H2O2 ------------------ Cromgeno + 4 H2O La absorbancia de la muestra es directamente proporcional a la concentracin de cido rico que contenga. DETERMINACIN DE UREA PRINCIPIO: La urea se hidroliza en presencia de ureasa en amoniaco y dixido de carbono. El amoniaco producido en esta reaccin se combina con alfa-cetoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para producir glutamato y NAD. uricasa Urea + H2O ----------------- 2 NH3 + CO2 GLDH NH3 + alfacetoglutarato + NADH + H+ -------------L-glutamato + NAD+ + H+ La oxidacin de NADH causa una disminucin en la absorbancia a 340 nm, la cual es proporcional a la concentracin de urea en la muestra.

DISPOSICIN DE RPBI

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PRCTICA IV

PRCTICA No. 4: CREATININA

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. En la prctica se realiz la medicin de creatinina tanto en orina como en suero, para determinar si un paciente (Germn Ayala Sandoval) podra tener niveles anormales de este compuesto. Primeramente se le pidi al paciente que trajera una muestra de orina de 24 hrs, adems de que se le tom una muestra de sangre; ya con ambas muestras por medio del mtodo de Jaff se midieron los niveles de creatinina, obteniendo en orina 4.1 mg/dL y en suero 1mg/dL. INTRODUCCIN. La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina (que es un nutriente til para los msculos). Es un producto de desecho del metabolismo normal de los msculos que usualmente es producida por el cuerpo en una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los msculos), y normalmente filtrada por los riones y excretada en la orina. La medicin de la creatinina es la manera ms simple de monitorizar la correcta funcin de los riones. Fisiologa Principalmente es filtrada por el rin, aunque una cantidad pequea es activamente secretada. Hay una cierta reabsorcin tubular de la creatinina, pero sta es compensada por un grado ms o menos equivalente de la secrecin tubular. Si el filtrado del rin es deficiente, los niveles en la sangre se elevan. Este efecto es usado como indicador de la funcin renal. Sin embargo, en los casos de disfuncin renal severa, la tasa de separacin de la creatinina ser sobrestimada porque la secrecin activa de la creatinina explicar una fraccin ms grande de la creatinina total despejada. Una creatinina y un BUN ms altos de lo normal tambin pueden ser indicativos de deshidratacin cuando el cociente de BUN a creatinina es anormal, con niveles de BUN elevndose ms alto que los niveles de creatinina. Los hombres tienden a tener niveles ms altos de creatinina porque tienen msculos esquelticos ms grandes que los de las mujeres. Uso en diagnstico Medir la creatinina del suero es una prueba simple y es el indicador ms comn de la funcin renal. Una subida en los niveles de creatinina de la sangre solamente es observada cuando hay un marcado dao en los nefrones(RC). Por lo tanto esta prueba no es conveniente para detectar estados tempranos de enfermedad del rin. Una mejor valoracin de la funcin del rin es dada por la prueba de aclaramiento de creatinina. La separacin de creatinina puede ser calculada con precisin usando la concentracin de la creatinina del suero y alguna o todas las variables siguientes: sexo, edad, peso, y raza segn lo sugerido por la National Diabetes Association con una recoleccin de orina de menos de 24 horas. Algunos laboratorios calcularn el ClCr si est escrito en la forma de solicitud de la patologa; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la informacin del paciente. INTERVALOS DE REFERENCIA PARA CREATININA EN PLASMA O SUERO mg/dl (mol/L) POBLACIN JAFFE ENZIMTICO Adulto Mujer 0.6-1.1 (53-97) 0.5-0.8 (44-71) Varn 0.9-1.3 (80-115) 0.6-1.1 (53-97) Nio 0.3-0.7 (27-62) 0-0.6 (0-53)

OBJETIVOS. Realizar la determinacin de los niveles de creatinina sangunea y conocer su participacin en el diagnstico de la funcin renal y enfermedades a nivel muscular. MATERIALES Y MTODOS. MATERIAL Torniquete Tubo seco o con gel para la toma de sangre Barril para venopuncin Jeringa Torundas con alcohol Centrfuga Pipetas de transferencia Tubos de ensaye Pipetas pistn de 10 y 1000 Puntillas para las pipetas REACTIVOS Reactivo de Trabajo: solucin 1:1 de cido pcrico e hidrxido de sodio. Estndar con concentracin de 2 mg/dl Control Normal Control Patolgico Muestra de suero sanguneo Orina recolectada durante 24 horas. EQUIPO

Gradilla Bao mara a 37 C Equipo Humalyzer 2000

MTODOS: MTODO DE JAFF: 1) Teniendo al paciente en ayunas, realizar la toma de muestra, por venopuncin, en tubo para obtener el suero. 2) Mediante la centrifugacin, separar el suero de los dems componentes sanguneos. 3) Etiquetar seis tubos de ensaye como: REACTIVOS TUBO Muestra Muestra Estndar Control Control Blanco MARCADO suero orina negativo positivo Suero 100 l ---------------------------------------------Orina ---------100l ------------------------------------Estndar ------------------100 l ---------------------------CN/CP ---------10l ---------100 l 100 l ---------Reactivo de 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml trabajo

4) En el primer tubo depositar 100 l del suero sanguneo. 5) En el segundo tubo depositar 100 l de la muestra de orina, con una dilucin previa 1:50. 6) En el tercer tubo colocar 100 l del estndar. 7) El cuarto tubo contendr 100 l del control normal. En el quinto tubo se adicionan 100 l del control positivo. Agregar a cada uno de los cinco tubos 1 ml del reactivo enzimtico. El sexto tubo ser un blanco con agua destilada. Transcurrido este tiempo, realizar las lecturas de sus absorbancias en el Equipo HUMALIZER 2000 con una longitud de onda de 492 nm, teniendo por secuencia el blanco, el estndar, los controles y finalmente las muestras, a los tiempos de 30 y 90. 12) Reportar los valores obtenidos para la creatinina, y obtener el valor total de la depuracin de creatinina. 8) 9) 10) 11) RESULTADOS E INTERPRETACIN. PACIENTE: EDAD: PESO: ESTATURA: SUPERFICIE CORPORAL: VOLUMEN DE ORINA DE 24 HRS:

Germn Ayala Sandoval 21 aos 83 Kg 1.80 mts 2.02 mts2 850 ml

Resultados obtenidos del Equipo HUMALIZER 2000, comparados con los valores de referencia: PACIENTE CREATININA CREATININA VALORES DE REFERENCIA (mg/dL) EN SUERO EN ORINA (mg/dL) (mg/dL) Germn 1 mg/dL 4.1 mg/dL Creatinina en Suero: 0.5-1.4 mg/dL Ayala Creatinina en Orina (Hombre): 0.8-1.8mg/dl Sandoval Depuracin de Creatinina: Dcr= [140-Edad] X peso (kg) = ml/min 72 X Cr. en suero (mg/dL) Dcr= [140-21] X 83Kg = 137.1805 ml/min 72 X 1 mg/dL Interpretacin: En la muestra en suero el valor obtenido (1 mg/dL) nos indica que los niveles sricos son normales ya que estn dentro de los valores de referencia. En la muestra de orina el valor obtenido (4.1 mg/dL9 nos dice que estn elevados los niveles de creatinina en orina, estos nivleles elevados fueron ocasionados debido a que el paciente presentaba una lesin muscular.

La depuracin de creatinina se encuentra normal, ya que si el aclaramiento de creatinina cayera por debajo de 62.5 ml/min se podra considerar que el paciente tendra una alteracin en la funcin renal.

CONCLUSIONES. Las pruebas para determinar la concentracin de creatinina en suero y su depuracin renal, son parmetros confiables de la funcin normal del rin, es decir que cuando los niveles de creatinina en suero se encuentran elevados por un descenso en el aclaramiento o depuracin renal, indican que la funcin renal se encuentra muy deteriorada. BIBLIOGRAFA. 1) Baynes W. John (et all), Bioqumica Mdica, 2da. Edicin, Editorial Elsevier Mosby, Espaa (2006) 2) http://es.wikipedia.org/wiki/Creatinina 3) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003475.htm 4) http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/druginfo/natural/patient-creatine.html 5) http://www.umm.edu/esp_ency/article/003610.htm 6) http://www.labtestsonline.es/tests/Creatinine.html?lnk=3 7) http://images.google.com.mx/imgres?imgurl=http://www.ureacycle.com/images/cell.gif& imgrefurl=http://www.ureacycle.com/about_ureacycle.asp&usg=__vLjnaFZOq6XPTglbvJP4mhKJck=&h=386&w=500&sz=62&hl=es&start=18&tbnid=7vwjO2O _Gly1JM:&tbnh=100&tbnw=130&prev=/images%3Fq%3Durea%26gbv%3D2%26hl%3Des% 26sa%3DG 8) http://es.wikipedia.org/wiki/Aminotransferasa APNDICE DETERMINACIN DE CREATININA PRINCIPIO: La creatinina reacciona con cido pcrico en condiciones alcalinas para formar un compuesto de color rojo-anaranjado. La proporcin de incremento de absorbancia a 510 nm por la formacin de color (o formacin del complejo creatinina-picrato), es directamente proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra. Medio alcalino Creatinina + picrato de sodio --------------------- complejo creatinina-picrato

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PRCTICA V

PRCTICA No. 5: PERFIL DE LPIDOS

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN En esta prctica se llev a cabo la determinacin de lpidos el cual se llev a cabo por medio de dos procedimientos, el primero de ellos por medio de la determinacin slo del Colesterol Total, Colesterol HDL y Triglicridos. El segundo fue lo que se denomina como Perfil de Lpidos Completo, en el cual se determin la concentracin srica tanto de Colesterol Total, Colesterol HDL, Triglicridos y adems Glucosa, todo esto por el mtodo automatizado. Cabe mencionar que con estos datos se determinaron tambin por medio de frmulas los valores de Colesterol LDL, Colesterol VLDL y el ndice Arterognico (IA). Por ltimo se realizaron las observaciones correspondientes de acuerdo a los valores obtenidos de las personas a las cuales se les tom la muestra sangunea. INTRODUCCIN Perfil de lpidos El perfil de lpidos consiste en la determinacin y cuantificacin de los diferentes componentes grasos que existen en la sangre. En general, las pruebas son capaces de determinar la cantidad de grasas totales, as como la cantidad de colesterol y triglicridos. Adems, se reporta la cantidad de colesterol de baja densidad (LDL) y la cantidad de colesterol de alta densidad (HDL). Finalmente, tomando en cuenta las proporciones de los diversos lpidos de la sangre, se sugiere un ndice aterognico (ndice o propensin que tiene la persona de desarrollar arterioesclerosis en base a sus niveles de lpidos): Colesterol Total HDL Colesterol (Bueno) LDL Colesterol (Malo) VLDL Colesterol Triglicridos Riesgo Cardiaco COLESTEROL El colesterol es el principal esterol del organismo humano y precursor de todos los dems esteroides corporales. Se encuentra formando parte de membranas celulares, lipoprotenas, cidos biliares y hormonas esteroideas. El colesterol es un importante constituyente de los clculos biliares, pero su principal funcin patolgica, lo constituye la produccin de aterosclerosis de arterias vitales, causando enfermedad coronaria, cerebrovascular y vascular perifrica. El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes, la externa y el que produce el propio organismo. Debido a que el organismo puede producir su propio colesterol, existe la posibilidad que personas que no consuman colesterol, tengan niveles sanguneos elevados por tener algn desorden gentico-metablico que conlleva a dicha elevacin. Estos desordenes son ms comn de lo que se cree y son la principal causa de ateroma y de enfermedades vasculares, entre ellas el infarto agudo al miocardio. Por esto la importancia de determinar en forma precoz los niveles elevados de colesterol en los pacientes. Los alimentos derivados de animales son ricos en colesterol especialmente huevos, lcteos y las carnes. La mayora de este est en forma esterificada. El organismo absorbe aproximadamente la

mitad del colesterol contenido en la dieta. Los esteroles vegetales son escasamente absorbidos por el organismo. El colesterol es sintetizado prcticamente por todas las clulas nucleadas del organismo. El hgado es el principal rgano productor (10 % del total), siendo otros rganos importantes en la produccin el intestino, corteza suprarrenal, testes y ovario. La sntesis del colesterol se halla regulada sobre todo por la ingesta de colesterol en la dieta. El colesterol por ser una grasa es poco soluble en agua, por lo que si se transportara libre por la sangre sera en forma de gotas de colesterol y se vera en nuestra sangre como gotas de grasa. Pero el caso, es que la naturaleza ha ideado una manera de hacer soluble en agua al colesterol y transportarlo por la sangre y esto es por medio de lipoprotenas. Las lipoprotenas son complejos lipoproteicos mediante los cuales el colesterol, steres de colesterol, los triglicridos y fosfolpidos son transportados a travs de la sangre. El colesterol asociado a las lipoprotenas de baja densidad se le denomina LDL-colesterol, y se le conoce como "colesterol malo", ya que es la principal lipoprotena que lleva el colesterol del hgado al resto del organismo. Al colesterol asociado a la lipoprotena HDL se le denomina HDLcolesterol, y se le conoce como "colesterol bueno" ya que su principal funcin es recoger el colesterol de los tejidos, y llevarlo al hgado. El aumento del LDL-colesterol a nivel sanguneo lleva a un conjunto de proceso que desembocan en la formacin de placas inestables en las paredes de los vasos sanguneos, conocidos como ateromas. Estas placas reducen la luz de las arterias y venas, y si una de estas placas se desprende puede producir ya sea un infarto agudo al miocardio o en el cerebro un derrame. Niveles del colesterol sanguneo y su relacin con el infarto agudo al miocardio. La medicin de solamente el colesterol srico total tiene valor limitado. Sin embargo cuando se mide en conjunto con las diferentes lipoprotenas sobre todo las LDL y las HDL ofrece un panorama ms amplio sobre la probabilidad de produccin de ateroma y por lo tanto de riesgo de coronariopatas. Los niveles normales sricos de colesterol varan con la poblacin y suelen aumentar con la edad. Dichos niveles a diferencia de los niveles normales de otros metabolitos sricos carecen de relevancia. Esto en el sentido que los valores normales indican los rangos medios en los que se encuentra una poblacin, sin decirnos si esos niveles son de riesgo o no de formacin de ateroma. Por eso, aunque en lpidos se puede hablar de niveles normales es mejor utilizar los niveles recomendables ya que estos s nos indican riesgo de formacin de ateroma. Como se mencion existen varios tipos de hiperlipidemias que son importantes de diagnosticar, sobre todo en nios y jvenes, pues sus niveles de colesterol circulantes son muy altos y por lo tanto los riesgos son elevados, sobre todo en las tipo II y III. Adems, existen muchos factores ambientales como la dieta, y el fumado que tambin inciden en aumento de los niveles de lpidos sanguneos.

Colesterol total (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas: Nivel deseable < 200 Lmite alto 200-239 Alto > 240 LDL-Colesterol (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas: En general lo deseable es menos de 130 pero depende de factores de riesgo. Ms adelante se detallan dichos factores de riesgo. Con base en los diferentes factores de riesgo que presente el paciente as como la presencia o ausencia de enfermedad coronaria, los niveles de LDL deseables van a cambiar, pues con un paciente con enfermedad coronaria declarada se va a querer tener el LDL an ms bajo. Perfil del paciente Ausencia de enfermedad coronaria y menos de 2 factores de riesgo Ausencia de enfermedad coronaria y ms de 2 factores de riesgo Presencia de enfermedad coronaria Nivel LDL-objetivo Mximo 160 mg/dl Mximo 130 mg/dl Mximo 100 mg/dl

Factores de riesgo de enfermedad coronaria 1. Edad: Hombre > 45 aos Mujer > 55 aos o menopusica sin tratamiento de reemplazo hormonal 2. Fumador 3. Diabetes mellitus 4. Historia familiar de enfermedad coronaria 5. Hipertensin > 140/90 o tratamiento con anti-hipertensivos 6. HDL-colesterol < 35 mg/dl La diabetes mellitus es un factor tan importante que algunos autores sugieren tomarlo en cuenta como un factor aislado y por lo tanto se recomienda para pacientes diabticos intentar mantener los valores de LDL de ser posible bajo de 100 mg/dl. HDL-Colesterol (mg/dl) Niveles segn riesgo de coronariopatas Alto < 35 Nivel deseable > 35 Mnimo > 60 En el caso del HDL colesterol se puede ser ms especfico con respecto al riesgo coronario asociado a los diferentes niveles como lo muestra la siguiente tabla.

Riesgo de enfermedad coronaria asociado con el HDL-Colesterol Concentracin-HDL (mg/dl) < 25 25-34 35-44 45-54 55-74 > 75 Riesgo coronario Nivel peligroso Riesgo elevado Riesgo moderado Riesgo promedio Riesgo bajo Longevidad

TRIGLICRIDOS Su funcin prioritaria es proveer de energa a las clulas. Constituyen alrededor de un 25 % del peso del tejido adiposo y son la forma principal de almacenamiento de lpidos en el hombre. Los triglicridos son transportados en el plasma, en su mayor parte en forma de quilomicrones y VLDL, pero estn tambin presentes en cantidades menores en LDL y HDL. La concentracin de triglicridos en el plasma en un determinado tiempo es un balance entre la velocidad de entrada en el plasma y su tasa de remocin. Los triglicridos del plasma derivan de dos fuentes, intestinal y heptica. Los triglicridos intestinales son sintetizados a partir de la grasa de la dieta. La entrada hacia la sangre desde el hgado depende mucho del estado nutricional. VALORES DE REFERENCIA DE LPIDOS LPIDOS TOTALES 450 1000 mg / dl TRIGLICRIDOS HOMBRES : 40 160 mg / dl MUJERES: 35 135 mg / dl COLESTEROL Edad riesgo moderado riesgo alto 20-29 mayor de 200 mayor de 200 30-39 mayor de 220 mayor de 240 40 o ms mayor de 240 mayor de 250 LIPOPROTEINAS Se identifican 4 tipos principales basndose en: Tamao, composicin qumica, caractersticas fisicoqumicas y de flotacin, movilidad electrofortica, constituyen un medio de transporte y reservorio circulante para los lpidos, la estructura general de las partculas es similar, pero difieren en tamao, con posicin de lpidos y contenido de apolipoprotenas.

MATERIALES Y EQUIPOS Micropipetas de 10 y 1,000l Pipetas de trasferencia Tubos de ensayo de vidrio Humalyzer 2,000 Incubadora Gradilla Equipo Automatizado Prestige 24i MTODOS Se tom la muestra de sangre al paciente Adn Cano Cano para posteriormente llevara a centrifugarla para separar el suero. Triglicridos: Mtodo: GPO-PAP Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Buffer Reactivos de Trabajo

2.- Enzimas 3.- Estndar (STD) con una concentracin de 200mg/dl 4.- Control Negativo (CN) 5.- Control Positivo (CP) Triglicridos: Se colocaron en un tubo de ensaye 10L de suero y 1ml de los reactivos de trabajo, el cual se etiquet con la letra M de muestra. Luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos, despus de los cuales se llev a leer la absorbancia de la muestra contra el blanco a una longitud de onda de 505nm. Cabe mencionar que la calibracin del equipo Humalyzer con los controles positivo y negativo, as como la preparacin del blanco fue realizada por otro equipo. En la siguiente tabla se muestra como quedaron los volmenes de cada uno de los tubos empleados en esta prctica: M STD CN CP BLANCO Suero 10L STD 10L CN/CP 10L 10L Reactivos de Trabajo 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml Colesterol total: Mtodo: CHOD-PAP Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Reactivo de colesterol total 2.- Estndar (STD) 3.- Control Negativo (CN) 4.- Control Positivo (CP) Colesterol total: La metodologa empleada para la determinacin del colesterol total fue la misma que la que se utiliz para los triglicridos slo, claros est, que con los reactivos pertinentes para ello. Colesterol HDL: Mtodo: Precipitacin Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Reactivo precipitante 2.- Reactivo de colesterol total

Colesterol HDL: En un tubo de ensaye se vaciaron250L de suero y 25L de reactivo precipitante. Luego se incub a temperatura ambiente durante 10 minutos, despus de los cuales se centrifug por 15 minutos a 4,000rpm. Una vez hecho esto el tubo de ensaye se mir de la siguiente forma: Quedando un sobrenadante sobre un pequeo precipitado. Este sobrenadante fue con el que se sigui trabajando ya que se verti sobre otro tubo de ensaye al cual se le adicionaron 10L de suero y 1ml del reactivo del colesterol total (que fue el mismo que se emple en la determinacin del colesterol total. Despus de Sobrenadante prosigui a mezclar e incubar el tubo por 5 minutos a 37C, y por ltimo se llev al equipo Humalyzer 2,000 para leer la absorbancia a una longitud de onda de 505nm. Perfil de lpidos automatizado: Para eta determinacin solo hizo basta utilizar el equipo Prestige 24i en el cual se vaciaron en las celdillas que este contiene una cantidad de suero (hasta la lnea indicativa) para poder determinar glucosa, colesterol total, triglicridos y HDL. Cabe mencionar que esto se llev a cabo al da siguiente de la primera determinacin con el equipo Humalyzer donde se determin colesterol HDL, colesterol total y triglicridos. RESULTADOS Clculos: Frmulas empleadas: [HDL] = Abs M X 320 = mg/dl Frmula de Friedwald: LDL = colesterol total colesterol HDL (Triglicridos/5) VLDL = Triglicridos/5 I.A. (ndice Arterognico) = colesterol total/HDL [HDL] = 0.120 X 320 = 38.4mg/dl Frmula de Friedwald: LDL = 132.7mg/dl - 38.4mg/dl (124.6mg/dl / 5) = 69.38mg/dl VLDL = 124.6mg/dl / 5 = 24.92mg/dl I.A = 132.7mg/dl / 38.4mg/dl = 3.4557mg/dl Tabla de datos obtenidos en el equipo Humalyzer 2,000 Paciente: Adn Cano Cano Concentracin (mg/dl) Absorbancia Colesterol total 132.7 0.254 Triglicridos 124.6 0.110 HDL 0.120

Resumen datos calculados y obtenidos en el Equipo Prestige 24i Paciente: Adn Cano Cano Resultado del paciente Intervalos de referencia (en el hombre) Riesgo bajo: <200mg/dl Colesterol total 132.7mg/dl Riesgo alto: >200mg/dl Riesgo alto: >200mg/dl Triglicridos 124.6mg/dl Riesgo bajo: <150mg/dl Riesgo menor = >55mg/dl HDL 38.4mg/dl Riesgo normal = 35-55mg/dl Riesgo elevado = <35md/dl VLDL 24.92mg/dl 12-20mg/dl Riesgo bajo: <130mg/dl LDL 69.38mg/dl Riesgo alto: >160mg/dl Riesgo bajo: <4mg/dl I.A. 3.4557mg/dl Riesgo alto: >7mg/dl Resumen datos obtenidos en el Equipo Automatizado (Perfil de Lpidos Completo) Paciente Oscar Hiram Castaeda Contreras Cecilia Margarita Prez Soto Germn Ayala Sandoval Tomasa Glucosa 76mg/dl Colesterol total 135mg/dl Triglicridos 61.6mg/dl Colesterol HDL 45.9mg/dl Intervalos de referencia Glucosa: 60-110mg/dl Colesterol Total: <200 Triglicridos: <150mg/dl Colesterol HDL: Riesgo Alto: <35mg/dl Riesgo bajo: >45mg/dl

73mg/dl 85mg/dl 77mg/dl

133mg/dl 161mg/dl 161mg/dl

75.8mg/dl 52.2mg/dl 135.7mg/dl

41.3mg/dl 44.2mg/dl 45.3mg/dl

INTERPRETACIN DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES Como se puede observar en las tablas que contienen los resultados de cada una de las pruebas realizadas, tanto por el mtodo automatizado como el GPO-PAP, CHOD-PAP y el de Precipitacin, la mayora de ellos se encuentran dentro de los rangos que son recomendables para tener una buena salud. Los que no estuvieron dentro de los rangos en realidad los sobrepasaron por mucho y son en pruebas que no son de alto riesgo, por as decirlo y por lo cual no se consideraron como un riesgo mayor para ser reportado como un indicio de un caso patolgico. Por ltimo cabe mencionar la importancia que tiene el perfil de lpidos dentro de los mtodos de diagnstico que nos pueden dar datos claros y fidedignos sobre una presencia de un trastorno patolgico grave, que se puede estar presentando en el paciente para con ello tratar BIBLIOGRAFA CONSULTADA Henry Bernard J.; El laboratorio en el diagnstico clnico; ed. Marbn; 2003. M.L. Bishop; Qumica clnica, principios, procedimientos y correlaciones; ed. Mac Graw Hill; 5 ed. REFERENCIAS ELECTRNICAS http://www.labexpress.com.mx/examenes/perfil-de-lipidos.html http://www.geosalud.com/Nutricion/colesterol.htm APNDICE DETERMINACIN DE COLESTEROL PRINCIPIO: Los steres de colesterol son hidrolizados por la enzima colesterol estearasa (CE), liberando colesterol y cidos grasos; por una posterior oxidacin enzimtica del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO), se obtiene colestn-3-ona con produccin simultnea de perxido de hidrgeno. ste ltimo se une con la 4-aminoantipirina (4-AAP) y con parahidroxibenzoato en presencia de peroxidasa para producir un cromgeno con absorbancia mxima a 505 nm. CE steres de colesterol -------------------- Colesterol + cidos grasos

CO Colesterol + oxgeno -------------------- Colesten-3-ona + H2O2 peroxidasa 2 H2O2 + 4-AAP + parahidroxibenzoato ------------------ Cromgeno + 4 H2O La intensidad del color producido es directamente proporcional a la concentracin de colesterol en la muestra.

DISPOSICIN DE RPBI

EQUIPO DE SEGURIDAD

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUMICA CLNICA

PRCTICA VI

PRCTICA No. 6: Na+, K+ y Cl-

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de octubre del 2010

RESUMEN En esta prctica se llev a cabo el anlisis de las cantidades de los electrolitos: sodio, potasio y cloro presentes una muestra de una persona (Oscar Hiram Castaeda Contreras) que fue puncionada en el laboratorio, para posteriormente realizar de manera clara y precisa los clculos pertinentes con los cuales pudiramos de alguna manera dar una interpretacin ptima de los resultados. INTRODUCCIN Sodio: El sodio es un mineral que el cuerpo necesita para su funcionamiento apropiado. Funciones: El cuerpo utiliza el sodio para regular la presin arterial y el volumen sanguneo. El sodio tambin es crucial para el funcionamiento de msculos y nervios. Fuentes alimenticias: La forma ms comn de sodio es el cloruro de sodio o sal de cocina. El sodio se encuentra en forma natural en la mayora de los alimentos. La leche, la remolacha y el apio tambin contienen sodio en forma natural, como el agua potable, aunque la cantidad vara dependiendo de la fuente. El sodio tambin se le aade a diversos productos alimenticios, algunas de cuyas formas son: glutamato monosdico, nitrito de sodio, sacarina de sodio, polvo para hornear (bicarbonato de sodio) y benzoato de sodio. Estos elementos son ingredientes en condimentos y alios, como la salsa Worcestershire, la salsa de soya (soja), la sal de cebolla, la sal de ajo y los cubos de caldo concentrado. Las carnes procesadas como el tocino, los embutidos y el jamn, al igual que las sopas y verduras enlatadas son todos ejemplos de alimentos que contienen sodio agregado. Por lo general, las comidas rpidas tienen un alto contenido de sodio. El promedio normal de Sodio (Na) intercambiable en los adultos sanos es de 41 meq/kg, mientras que la cantidad total de sodio corporal es de 58 meq/kg Por lo tanto, aproximadamente 17 meq/kg no estn disponibles para intercambio. Por otro lado la gran mayora de este sodio no intercambiable se encuentra en la malla cristalina de la hidroxiopatita de los huesos. La distribucin del Na+ y K+ en el cuerpo se da a continuacin y la misma es principalmente extracelular: Componente Cantidad (% del total) Na K Intracelular total 9.0 89.6 Extracelular total 91.0 10.4 Plasma 11.2 0.4 Liquido intestinal 29.0 1.0 Tejido conectivo denso y cartlagos 11.7 0.4 Huesos 36.5 7.6 Localizaciones transcelulares 2.6 1.0 Dado que el sodio es el principal catin del plasma, la presin osmtica del plasma se correlaciona con la concentracin de Na+ en el mismo (plasma). La cantidad de sodio requerida por el organismo diariamente equivale a 400 mg/da, donde el exceso del mineral se excreta por los riones en la orina o con el sudor. El exceso de sodio tiene conocidas consecuencias que van desde la hipertensin, los problemas cardiovasculares, edemas (retencin de lquidos e inflamaciones) hasta los clculos. El motivo de restringir el uso de sodio en las dietas se basa en

que el volumen del lquido extracelular depende en gran medida de su contenido sdico; y la reduccin de dicho lquido se logra disminuyendo las reservas totales de Na++ El plan de alimentacin hiposdico tiene ms de un uso. Se aplica en la dietoterapia de enfermedades hipertensivas y cardiovasculares; y para toda enfermedad que evolucione con edemas. Una dieta, se considera hiposdica cuando tiene menos de 5 gr de sal/da (algo equivalente a 2 gr de Na++). Tal como ocurre con la mayora de los minerales, todos los alimentos cuentan con sodio en su composicin qumica. Sin embargo hay alimentos que lo contienen en cantidades muy elevadas. Esos alimentos son los principales excluidos en las dietas hiposdicas. Los alimentos que mayor cantidad de sodio tienen, y por ende son los primeros en ser reemplazados al momento de aplicar una restriccin al consumo de sodio son: Fiambres, embutidos, encurtidos, salazones, conservas, enlatados, quesos duros, productos de copetn (botana), mayonesas, mostazas, salsas, cubitos de sopa, sopas en polvo, manteca, margarinas, amasados de pastelera, pan, tapas de tarta, empanadas, tacos, harinas leudantes y polvos para preparacin de biscochuelos, entre otros. La ingesta normal de alimentos cubre las necesidades diarias requeridas de sodio y en muchos casos hasta puede excederla. La sal adicional que uno utilice, normalmente hace que se excedan los requerimientos diarios del mineral. Efectos secundarios: Demasiado sodio puede llevar a hipertensin arterial en aquellas personas sensibles a este elemento. Si usted sufre de hipertensin, el mdico probablemente le recomendar que reduzca la ingesta de sodio (sal). El sodio puede llevar a una acumulacin grave de lquidos en personas con insuficiencia cardaca congestiva, cirrosis o nefropata. Dichas personas deben estar bajo una dieta con restriccin estricta de sodio de la manera como lo prescriba el mdico. Recomendaciones: El sodio en la dieta se mide en miligramos (mg). La sal de cocina contiene un 40% de sodio y una cucharada pequea de sal de cocina contiene 2,300 miligramos de sodio. Los adultos deben limitar la ingesta de sodio a 2,300 mg por da, mientras que los individuos que sufran de hipertensin arterial no deben consumir ms de 1,500 mg por da. Aquellas personas que padezcan insuficiencia cardaca congestiva, cirrosis heptica y nefropata pueden necesitar cantidades mucho ms bajas. No existen recomendaciones especficas con relacin a la ingestin de sodio en bebs, nios y adolescentes. Los hbitos de alimentacin y las actitudes acerca de los alimentos adquiridos durante la infancia muy probablemente van a influenciar los hbitos alimentarios de por vida, razn por la cual se sugiere un consumo moderado de sodio. Cloro: Efectos del Cloro sobre la salud: El cloro es un gas altamente reactivo. Es un elemento que se da de forma natural. Los mayores consumidores de cloro son las compaas que producen dicloruro de etileno y otros disolventes clorinados, resinas de cloruro de polivinilo (PVC), clorofluorocarbonos (CFCs) y xido de propileno. Las compaas papeleras utilizan cloro para blanquear el papel. Las plantas de tratamiento de agua y de aguas residuales utilizan cloro para reducir los niveles de microorganismos que pueden propagar enfermedades entre los humanos (desinfeccin). La exposicin al cloro puede ocurrir en el lugar de trabajo o en el medio ambiente a causa de escapes en el aire, el agua o el suelo. Las personas que utilizan leja en la colada y productos qumicos que contienen cloro no suelen estar expuestas a cloro en s. Generalmente el cloro se encuentra solamente en instalaciones industriales.

El cloro entra en el cuerpo al ser respirado el aire contaminado o al ser consumido con comida o agua contaminadas. No permanece en el cuerpo, debido a su reactividad. Los efectos del cloro en la salud humana dependen de la cantidad de cloro presente, y del tiempo y la frecuencia de exposicin. Los efectos tambin dependen de la salud de la persona y de las condiciones del medio cuando la exposicin tuvo lugar. La respiracin de pequeas cantidades de cloro durante cortos periodos de tiempo afecta negativamente al sistema respiratorio humano. Los efectos van desde tos y dolor pectoral hasta retencin de agua en los pulmones. El cloro irrita la piel, los ojos y el sistema respiratorio. No es probable que estos efectos tengan lugar a niveles de cloro encontrados normalmente en la naturaleza. Los efectos en la salud humana asociados con la respiracin o el consumo de pequeas cantidades de cloro durante periodos prolongados de tiempo no son conocidos. Algunos estudios muestran que los trabajadores desarrollan efectos adversos al estar expuestos a inhalaciones repetidas de cloro, pero otros no. Potasio: Es el mineral que aparece en mayor cantidad en el cuerpo humano despus del calcio, y del fsforo y que siempre aparece asociado con el sodio. Este macromineral mantiene la presin normal en el interior y el exterior de las clulas, regula el balance de agua en el organismo, disminuye los efectos negativos del exceso de sodio y participa en el mecanismo de contraccin y relajacin de los msculos (sobre todo en los pacientes cardacos). El 97% del potasio se encuentra intracelularmente y el 3% restante en forma extracelular. El potasio se encuentra presente en: granos, carnes, vegetales, frutas y legumbres. Aproximadamente el 90% del potasio ingerido es absorbido en el intestino delgado y la forma en que el cuerpo lo elimina es a travs de la orina. El consumo excesivo de caf, t, alcohol y/o azcar aumenta la prdida de este a travs de la orina. El resultado de efectuar dietas estrictas en caloras, de los vmitos, diarreas, transpiracin aumentada, prdidas excesivas por uso de diurticos y quemaduras originan la deficiencia del mineral en el organismo. Los sntomas que indican su ausencia son inmediatos, y se muestran como: debilidad muscular, nauseas, vmitos, irritabilidad y hasta irregularidad cardaca. Contrariamente, la falla renal y la no ingestin de lquidos, genera excesos de presencia de este macromineral en la sangre. El requerimiento diario de potasio se acerca a los 3,5 g/da. Potasio en la dieta: La ingesta adecuada de potasio puede ser generalmente garantizada al consumir una variedad de alimentos que contengan potasio, y la deficiencia es muy rara en individuos que consuman una dieta equilibrada. Los alimentos que son fuente alta de potasio incluyen: las hortalizas (brcoli, remolacha, berenjena y coliflor) y las frutas (los bananos, los pltanos y las de hueso, como uva, albaricoque, melocotn, cereza, ciruela, etc.), son alimentos ricos en potasio. El potasio es el tercer mineral ms abundante en nuestro cuerpo. Est implicado en la reaccin de los nervios, en el movimiento muscular y en su mantenimiento saludable. Los alimentos que poseen ms potasio son, las judas o chauchas que aporta 1300 mg de potasio c/ 100 g, el germen de trigo que nos aporta unos 842 mg de potasio c/ 100 g, el aguacate o llamado en algunos pases palta que aporta 600 mg c/ 100 g, la soja aporta 515 mg c/ 100 g, las nueces nos aportan 441 mg de potasio c/ 100 g, banana o llamados pltanos aportan 396 mg c/ 100 g. Las dietas altas en potasio pueden reducir el riesgo de hipertensin y la deficiencia de potasio combinada con una inadecuada ingesta de tiamina ha producido muertes en ratones experimentales. Los suplementos de potasio en medicina son usados en la mayora en conjunto con diurticos de asa y tiazidas, una clase de diurticos que disminuye los niveles de sodio y agua corporal cuando esto es necesario, pero a su vez causan tambin perdida de potasio en la orina.

Individuos nefrpatas o que sufran de enfermedad renal, pueden sufrir efectos adversos sobre la salud al consumir grandes cantidades de potasio. En la insuficiencia renal crnica, los pacientes que se encuentran bajo tratamiento recibiendo dilisis renal deben recibir una dieta estricta en el contenido de potasio aportado, dado que los riones controlan la excrecin de potasio, la acumulacin de potasio srico por falla renal, puede causar problemas fatales como una arritmia cardiaca fatal. La hipercalemia aguda puede ser reducida a travs de tratamiento con soda va oral, glucosa, hiperventilacin y perspiracin. Absorcin, filtracin y excrecin: El potasio es absorbido de forma rpida desde el intestino delgado. Entre 80 y 90% del potasio ingerido es excretado en la orina, el resto es perdido en las heces. Los riones mantienen los niveles normales de potasio en suero a travs de su habilidad de filtrar, reabsorber y excretar potasio bajo la influencia de la hormona aldosterona. Conjuntamente con el sodio, ambos regulan el balance entre fluidos y electrolitos en el organismo, ya que son los principales cationes del lquido intracelular (potasio) y extracelular (sodio) de los fluidos corporales totales del organismo. La concentracin del sodio en el plasma es cerca de 145 meq/L, mientras que la del potasio es de 3,5 a 4,5 meq/L (en plasma). El plasma es filtrado a travs de los glomrulos de los riones en cantidades enormes, cerca de 180 L/da. Diariamente el sodio y potasio ingerido en la dieta debe ser reabsorbido; el sodio debe ser reabsorbido tanto como sea necesario para mantener el volumen del plasma y la presin osmtica correctamente, mientras que el potasio debe ser reabsorbido para mantener las concentraciones sricas del catin en 4,8 meq/L (cerca de 190 miligramos). La bomba de sodio debe mantenerse siempre operativa para conservar el sodio. El potasio debe ser conservado algunas veces, pero dado que las cantidades de potasio en plasma son tan pequeas, y la concentracin de potasio a nivel celular es cerca de tres veces ms grande, la situacin no es tan crtica para el potasio. Dado que el potasio se transporta pasivamente en respuesta a un flujo contrario al sodio, la orina nunca puede disminuir las concentraciones de potasio en suero, excepto algunas veces donde se observe una excrecin activa de agua. El potasio es secretado doblemente y reabsorbido tres veces antes de que la orina alcance los tbulos colectores del rin. A este punto usualmente se alcanza la misma concentracin en plasma. Si el potasio fuese eliminado de la dieta, obligara al rin a una excrecin mnima de potasio alrededor de 200 mg/da cuando el potasio en suero decline a 3,0 meq/L en una semana aproximadamente. La bomba de sodio/potasio es un mecanismo por el cual se consiguen las concentraciones requeridas de iones K+ y Na+ dentro y fuera de la clula concentraciones de iones K+ ms altas dentro de la clula que en el exterior para posibilitar la transmisin del impulso nervioso.

MATERIALES Y EQUIPOS Micropipetas de 10 y 1,000l Pipetas de trasferencia Tubos de ensayo de vidrio Humalyzer 2,000 Gnesys 8 Incubadora Gradilla Equipo Automatizado METODOLOGA Primero se tom la muestra de sangre venosa del paciente (Oscar Hiram Castaeda Contreras) para posteriormente centrifugarla para obtener el suero y con ello realizar las pruebas correspondientes. Sodio: Mtodo: Cuantitativo colorimtrico Equipo: Gnesys 8 Reactivos: 1.- Reactivo precipitante 2.- Reactivo de color 3.- Estndar (STD) con una concentracin de 140mmol/L Se colocaron en un tubo de ensaye 0.5ml de suero y 0.5ml del reactivo precipitante gota a gota con agitacin vigorosa. Luego se incub a temperatura ambiente por 5 minutos, despus de los cuales se centrifug el tubo a 4,000rpm por igual cantidad de minutos. A continuacin se prosigui a tomar 0.5ml del sobrenadante para transferirlos a otro tubo en donde se le adicionaron 2.5ml del reactivo de color, incubando despus a temperatura ambiente por 10 minutos y se centrifug a 4,000rpm por otros 5 minutos. Y por ltimo se vaci en una celda para ir a leer al espectrofotmetro. Potasio: Mtodo: Colorimtrico Equipo: Gnesys 8 Reactivos: 1.- Reactivo de color 2.- Estndar (STD) 4mEq/L En un tubo se ensaye se vertieron 20L de suero y 2.5ml de reactivo de color. Luego se mezcl y se incub a temperatura ambiente por un tiempo de 3 minutos. Por ltimo se llev a cabo la lectura de la absorbancia en el espectrofotmetro, comparando la absorbancia de esta muestra junto con la del estndar contra la del blanco a una longitud de onda de 500nm (el blanco y el estndar fueron preparados por otro equipo en el laboratorio).

Cloro: Mtodo: Tiocianato Equipo: Humalyzer 2,000 Reactivos: 1.- Reactivo de Tiocianato 2.- Estndar (STD) 125mmol/L 3.- Control negativo (CN) 4.- Control positivo (CP) En un tubo de ensaye se depositaron 10ml de suero y 1ml del reactivo de Tiocianato, luego se mezcl y se incub a 37C por un tiempo de 5 minutos. Despus de pasados estos minutos se ley la absorbancia de la muestra en el Humalyzer 2,000 a una longitud de onda de 420nm. RESULTADOS Clculos: Frmulas empleadas: [Na+] = Abs. R. blanco Abs. muestra X conc. std. Abs. R. blanco Abs. std [K+] = Abs. muestra X conc. std. Abs. std. [Cl-] = Abs. muestra X conc. std Abs. std. [Na+] = 0.910 0.695 X 140mmol/L = 74.8756mmol/L 0.910 0.508 [K+] = 0.142 X 4mEq/L = 3.191mEq/L 0.178

Sodio Potasio Cloro

Tabla de datos calculados y obtenidos en el equipo Humalyzer 2,000 Nombre del paciente: Oscar Hiram Castaeda Contreras Concentracin Absorbancia Absorbancia Valores de Absorbancia (mmol/L) std. Bco. referencia 74.8756 0.695 0.508 0.910 135-155mmol/L 3.191 0.142 0.178 3.4-5.3mmol/L 110.7 0.486 95-115mmol/L

INTERPRETACIN DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES Los resultados arrojados por el equipo Humalyzer 2,000 durante la realizacin de esta prctica fueron satisfactorios; cabe mencioar que en trminos generales, aunque el potasio y el sodio no se encontraron dentro de la gamma de los intervalos de referencia. Hablando sobre el sodio, el cual tuvo una suma diferencia entre el valor que se obtuvo y el nivel ms bajo de referencia (60.1244), esto se discuti y se concluy que varias pueden ser las causas de este resultado bajo de sodio, una de las cuales consisti en afirmar o asegurar que en este caso la persona a quien se le realiz el anlisis (Oscar Hiram Castaeda Contreras) tiene el hbito de beber mucha agua durante el transcurso del da para hidratarse, por lo cual pues conduce a este descenso de la concentracin de sodio en el organismo. Pero a pesar de esto este resultado no se consider de gran gravedad. Con respecto al resultado del potasio, el cual result slo un poco bajo, pues en s no hubo mucha diferencia entre este y el nivel menor del intervalo de diferencia por lo cual tampoco se consider de mucha gravedad este resultado. APNDICE DETERMINACIN DE SODIO PRINCIPIO: La tcnica de sodio involucra el uso de un compuesto macrocclico selectivo de sodio conocido como criptohemisferado cromognico, que est formado por un ionforo altamente selectivo de sodio, unido covalentemente a un grupo cromofrico ionizable. El reactivo amortiguado a un pH constante, mantiene las formas protonada y no protonada del grupo cromforo en equilibrio, las cuales tienen distintos espectros de absorcin. La formacin de un complejo del in sodio con el ionforo cromognico induce a un cambio en la basicidad del grupo cromforo y de aqu un cambio en la relacin de estas dos formas espectrales. El cambio de color se observa a 500 nm, y la velocidad de cambio en la absorbancia ser proporcional a la concentracin de sodio en la muestra. DETERMINACIN DE POTASIO PRINCIPIO: El mtodo se basa en la utilizacin de un compuesto cromognico formado por un ionforo altamente selectivo de potasio que est unido covalentemente a un grupo cromforo ionizable. El reactivo amortiguado a un pH constante, mantiene las formas protonada y no protonada del grupo cromforo en equilibrio, cada una de las cuales tiene un espectro de absorcin diferente. El complejo formado por el potasio y el ionforo cromognico induce a un cambio en la basicidad del grupo cromforo y de ah un cambio en el rango de sus dos formas espectrales diferentes. Un cambio de color se observa a 500 nm y es proporcional a la concentracin de potasio en la muestra. DETERMINACIN DE CLORURO PRINCIPIO: Los iones de cloro reaccionan con tiocianato mercrico para producir cloruro de mercurio y iones tiocianato libres. Estos reaccionan con iones frricos para producir tiocianato frrico, de color caf rojizo, cuya absorbancia a 480 nm es proporcional a la concentracin de cloruro en la muestra.

DISPOSICIN DE RPBI

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PRCTICA VII

PRCTICA No. 7: FSFORO

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Se realiz una prctica sobre la cuantificacin del fsforo a partir una muestra de suero tomada de sangre venosa sin la aplicacin de un torniquete, previamente centrifugada a 3500rpm por 5 minutos. Se incubaron los controles, la muestra, el estndar y el blanco a 37oC durante 5 minutos y se leyeron a una longitud de onda de 340nm en el Humalyzer 2000. INTRODUCCIN. En nuestro organismo el fsforo se encuentra asociado como fosfato y participa en muchos de los productos bioqumicos ms importantes. Este electrolito forma parte del material gentico (DNA y RNA), en las coenzimas (en forma de esteres de cido fosfrico o pirofosfrico), como energa bioqumica (ATP, fosfato de creatina y fosfoenolpiruvato), en las fosfoprotenas, entre otros. Para llevar a cabo la regulacin de los fosfatos se realiza a travs de cuatro mecanismos. 1. Absorcin intestinal. 2. Liberado de las clulas hacia la sangre. 3. Degradacin del hueso para perder fosftos. 4. Excrecin y reabsorcin renal. Esa regulacin puede ser modificada dependiendo de la conveniencia o necesidad que tiene el organismo para un determinado fin, a travs de: a) Vitamina D.- Incrementa el fosfato en la sangre, al aumentar la absorcin intestinal y la reabsorcin en el rin. b) Hormona del crecimiento.- Ayuda a regular el desarrollo del esqueleto, afectando las concentraciones circulantes de fosfato. c) Hormona paratiroidea (PTH).- Disminuye las concentraciones en sangre al aumentar la excrecin renal. d) Otros factores como la calcitonina. El fosfato se encuentra en mayor parte como fosfato inorgnico y slo cerca de 3 a 4mg/dl como fosfato inorgnico, es un anin intracelular y su distribucin en el organismo es en los huesos (80%), tejidos blandos (20%) y en suero o plasma un 1% solamente. Si esas concentraciones varan, se pueden generar dos tipos de patologas: 1. Hipofosfatemia.- Una disminucin del fosfato en el organismo. Esta patologa se ve incrementada en pacientes con cetoacidosis diabtica, enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC), asma, alcoholismo, anorexia nerviosa, enfermedad inflamatoria intestinal, hiperparatiroidismo, absorcin in testinal reducida (deficiencia de vitamina D), entre otras. 2. Hiperfosfatemia.- Incremento en las concentraciones de fosfatos, cuyos pacientes que presentan una insuficiencia renal crnica o aguda tienen un mayor riesgo. Tambin se puede elevar por una ingestin mayor de fosfatos o una mayor liberacin en las clulas.

MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro HUMALYZER 2000. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Agente reactivo. Estndar a concentracin de 5mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo Fosfomolibdato. 1. Tomar una muestra de sangre venosa, sin la aplicacin del torniquete en el brazo del paciente, en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos:

TUBO MARCADO Muestra Estndar Control normal Control patolgico Blanco

Agente reactivo 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Suero 10l -------------------------------------

REACTIVOS Estndar ---------10l ----------------------------

Control normal ------------------10l -------------------

Control patolgico ---------------------------10l ----------

4. Mezclar e incubar a 37oC durante 5 minutos exactos. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 340nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Reportar la concentracin de fsforo, ya sea directamente del equipo o bien con el empleo de la siguiente frmula: [Pi] = (Absorbancia de la muestra) ([Estndar]) Absorbancia del estndar RESULTADOS. PACIENTE Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras

FSFORO EN SANGRE (mg/dl) 1.8 3.2

VALORES DE REFERENCIA (mg/dl) 1.5 6.3 (Hombres) 2.1 5.6 (Mujeres) 4.0 7.0 (Nios)

DISCUSIN. Los pacientes estn dentro del rango normal de fsforo, no presentando una patologa. BIBLIOGRAFA. 3. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. 4. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill.

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PRCTICA VIII

PRCTICA No. 8: CALCIO

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Se realiz una prctica sobre la cuantificacin del calcio a partir una muestra de suero tomada de sangre venosa sin la aplicacin de un torniquete, previamente centrifugada a 3500rpm por 5 minutos. Se incubaron los controles, la muestra, el estndar y el blanco a 37oC durante 2 minutos y se leyeron a una longitud de onda de 650nm en el Gnesys 8. INTRODUCCIN. Es el catin extracelular ms abundante, donde un 99% se encuentra en los huesos, un 0.6% se encuentra secuestrado dentro de las clulas y solamente un 0.1% en el lquido extracelular. El calcio intracelular cumple varias funciones: contraccin muscular, secrecin hormonal, metabolismo del glucgeno y en la divisin celular, y tambin acta como un segundo mensajero intracelular. El calcio extracelular cumple las funciones de: Suministro del calcio para la mineralizacin sea, participa en la cascada de la coagulacin y mantiene el potencial de la membrana plasmtica. 1) CALCIO OSEO. El calcio seo se encuentra de forma de hidroxiapatita, estor cristales se encuentran rodeados de una capa delgada de agua, con iones de fosfato y calcio en solucin. El hueso se encuentra en equilibrio dinmico con el calcio extracelular por medio de la resorcin medida por el osteoclasto (cerca de 10- 20 mEq/l y un intercambio de difusin con la superficie de la capa (cerca de 100-200 mEq/l). 2) CALCIO INTRACELULAR. Gran parte del calcio intracelular est compuesto y aislado por numerosos enlaces de las estructuras de la membrana. Dentro de las clulas, la concentracin libre de calcio ionizado (cerca de 20-100 nmol/L) est por arriba de las cuatro rdenes de magnitud menor que el volumen extracelular. Fuertes mecanismos de transporte activo conservan esta baja concentracin de calcio intracelular bombeando calcio fuera de la clula o hacia los organelos intracelulares, tales como el retculo endoplsmico y la mitocondria. El calcio ionizado dentro de las clulas tiene funciones importantes y regula numerosas enzimas. 3) CALCIO PLASMATICO Y EXTRACELULAR. Mientras una pequea parte del calcio total del organismo se encuentra en el lquido extracelular, la concentracin de calcio ionizado tiene una funcin crtica en la excitabilidad cardiaca y neuromuscular. En condiciones rutinarias el calcio del plasma se mide y se informa de manera habitual en miligramos por decilitro. El calcio total del organismo es de 9.0-10.0 mg/dl. Sin embargo, es slo el calcio ionizado libre, no unido, el que es fisiolgicamente activo. Es decir, el calcio libre ionizado es decir casi del 50% del calcio total del plasma, promediando de manera normal 4.5-5.0 mg/dl. Cerca del 10% del calcio del organismo, 0.9-1.0 mg/dl, est compuesto de numerosos aniones, incluyendo el bicarbonato, citrato y fosfato. El restante de 40% de calcio total, o 3.6-4.0 mg/dl, est unido a las protenas plasmticas, con mayor frecuencia a la albmina (75% de calcio unido a protenas o 30% de calcio total) y el resto a globulinas.

Las patologas generadas para este electrolito son: a) Hipocalcemia.- Disminucin de los niveles de calcio y es causada por un hipoparatiroidismo primario (Ausencia de la PTH), en donde el hueso tiende a depender de su reserva y el rin incrementa la excrecin de calcio, ya que tambin se requiere de la PTH para el metabolismo normal de la vitamina D causada por una aplasia de la glndula paratiroides. b) Hipercalcemia.- Aumento en los niveles de calcio y es causada por un hiperparatiroidismo primario generalmente, ya que hay un aumento en la excrecin de la PTH. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro Gnesys 8. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Reactivo de arsenazo. Estndar a concentracin de 10mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo Arsenazo. 1. Tomar una muestra de sangre venosa, sin la aplicacin del torniquete en el brazo del paciente, en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente.

2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos: REACTIVOS TUBO Reactivo de Suero Estndar Control Control MARCADO arsenazo normal patolgico Muestra 2ml 20l ---------------------------Estndar 2ml ---------20l ------------------Control 2ml ------------------20l ---------normal Control 2ml ---------------------------20l patolgico Blanco 2ml ------------------------------------4. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 2 minutos. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 650nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Reportar la concentracin de fsforo, ya sea directamente del equipo o bien con el empleo de la siguiente frmula: [Ca+2] = (Absorbancia de la muestra) ([Estndar]) Absorbancia del estndar RESULTADOS. Paciente: Adn Cano Cano. [Ca+2] = (2.72) (10mg/dl) = 127.1mg/dl (0.214) Paciente: Oscar H. Castaeda Contreras. [Ca+2] = (0.039) (10mg/dl) = 1.82mg/dl (0.214) PACIENTE ABSORBANCIA (MUESTRA) 2.72 0.039 0.214 ABSORBANCIA (ESTNDAR) CALCIO EN SANGRE (mg/dl) 127.1 1.82 VALORES DE REFERENCIA (mg/dl) 8.5 10.5

Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras

DISCUSIN. Los pacientes estn fuera del rango normal para calcio porque probablemente las celdas empleadas en el espectrofotmetro no estaban bien limpias, ya que algunos de mis compaeros tambin obtuvieron valores un tanto irreales. BIBLIOGRAFA. 5. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. 6. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill. APNDICE DETERMINACIN DE CALCIO PRINCIPIO: El calcio reacciona con la cresolftalena a pH alcalino, dando un complejo de color violeta que se mide fotomtricamente a 570 nm. La intensidad del color es directamente proporcional a la cantidad de calcio presente en la muestra. DISPOSICIN DE RPBI

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PRCTICA IX

PRCTICA No. 9: MAGNESIO

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Se realiz una prctica sobre la cuantificacin del magnesio a partir una muestra de suero tomada de sangre venosa sin la aplicacin de un torniquete, previamente centrifugada a 3500rpm por 5 minutos. Se incubaron los controles, la muestra, el estndar y el blanco a temperatura ambiente durante 5 minutos y se leyeron a una longitud de onda de 505nm en el Gnesys 8. INTRODUCCIN. El magnesio es el cuarto catin ms abundante en el lquido extracelular y el segundo en el intracelular, est concentrado en el organismo en los huesos, cartlagos y dentro de las clulas mismas y su funcin es permitir utilizar el trifosfato de adenisona (ATP) como fuente energtica. Por lo tanto, es necesario para la accin de numerosos sistemas enzimticos, como el metabolismo de los carbohidratos, la sntesis de protenas, la sntesis de cido nuclecos y la contraccin del tejido muscular. Junto con los iones de sodio, potasio y calcio, el magnesio tambin regula la irritabilidad neuromuscular y el mecanismo de la coagulacin. El magnesio est ligado ntimamente al calcio en sus funciones orgnicas y la deficiencia de alguno de ellos tiene un efecto profundo sobre el metabolismo del otro. Esto se debe ala importancia del magnesio para la absorcin de calcio a partir de los intestinos y para el metabolismo del calcio. La cantidad de magnesio en el organismo de un adulto promedio es de casi 21 a 25 g, cerca de dos tercios del magnesio se encuentran en huesos y gran parte del tercio restante est dentro de las clulas. Solo cerca de 1 a 2% del magnesio total del organismo se encuentra en el espacio extracelular. 1) MAGNESIO INTRACELULAR. La mayor parte del magnesio dentro de las clulas est unido a las membranas u organelos de diversas protenas y metaloenzimas, compuestos de fosfato tales como ATP, cidos nucleicos y lpidos. La concentracin de magnesio no unido, ionizado es relativamente bajo 0.6-8 mg/dl (0.5-7 mE/ql), dependiendo del tipo de clula y sirve como un importante cofactor y activador de numerosas enzimas. 2) MAGENSIO PLASMATICO. Cerca del 60% del magnesio del plasma se encuentra libre, en vista que cerca del 15% se encuentra unido a los aniones (en especial al bicarbonato) y el 25% est unido a protena (principalmente albmina). El promedio de la concentracin plasmtica normal de magnesio es de 1.7-2.7 mg/dl (1.42.3 mEq/l). En E.U.A, la ingestin promedio de magnesio es de aproximadamente de 320 mg/dl en varones adultos y de 200 mg/dl en mujeres adultas. La ingestin de magnesio no cambia de manera sustancial en funcin de edad. 3) ABSORCION INTESTINAL DE MAGNESIO. Casi del 30 al 40% ingerido se absorbe, principalmente en la porcin distal del intestino delgado (yeyuno e leon). La absorcin fraccional es relativamente constante como una funcin de la ingestin, pero puede aumentar de un 70 a 80% en condiciones de severa restriccin diettica de magnesio.

Tambin se puede presentar un componente secretor muy pequeo del flujo de magnesio. Es probable, aunque todava existe controversia, de que al 1,25 (OH)2- vitamina D3 controle la resorcin de magnesio en el intestino, as como al del calcio y el fsforo. 4) DISTRIBUCION DEL MAGNESIO. Gran parte del magnesio se almacena en las clulas, sin embargo, la distribucin intracelular no parece estar bajo control hormonal. El magnesio se filtra libremente, con un ndice de filtracin glomerular y una concentracin plasmtica de magnesio normal, se filtra cerca de 3500 mg/dl de magnesio. El promedio de excrecin urinaria de magnesio es de 100 mg/d, lo que implica que se reabsorbe 97% del magnesio filtrado, la mayor fraccin (por lo menos la mitad se est resorcin) ocurre en el segmento grueso del asa ascendente de Henle. 5) PATOLOGAS. 1. Hipomagnesemia.- Disminucin en la concentracin del magnesio por varias causas como por ejemplo: Ingestin reducida, absorcin reducida, excrecin renal incrementada, excrecin endcrina incrementada, excrecin incrementada por la ingestin de ciertos frmacos, la lactancia o el embarazo. 2. Hipermagnesemia.- Aumento en los niveles de magnesio a causa de una excrecin reducida (hipotiroidismo, hipoaldosteronismo), ingestin reducida, deshidratacin, carcinoma seo. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro Gnesys 8. Incubadora a bao mara. Centrifugadora. Reactivos. Agente reactivo.

 Estndar a concentracin de 2.41mg/dl. Control Normal. Control Patolgico. Metodologa. Mtodo Azul de xilidil. 1. Tomar una muestra de sangre venosa, sin la aplicacin del torniquete en el brazo del paciente, en un tubo con tapn de color rojo, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo. Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos: REACTIVOS TUBO Agente Suero Estndar Control Control MARCADO reactivo normal patolgico Muestra 2ml 20l ---------------------------Estndar 2ml ---------20l ------------------Control 2ml ------------------20l ---------normal Control 2ml ---------------------------20l patolgico Blanco 2ml ------------------------------------4. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 505nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Reportar la concentracin de fsforo, ya sea directamente del equipo o bien con el empleo de la siguiente frmula: [Mg+2] = (Absorbancia de la muestra) ([Estndar]) Absorbancia del estndar RESULTADOS. PACIENTE Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras

ABSORBANCIA (MUESTRA) 0.090 0.066

MAGNESIO EN SANGRE (mg/dl) 1.129 0.828

VALORES DE REFERENCIA (mg/dl) 1.7 2.7

DISCUSIN. Los pacientes estn fuera del rango normal para magnesio porque probablemente las celdas empleadas en el espectrofotmetro no estaban bien limpias, ya que algunos de mis compaeros tambin obtuvieron valores un tanto irreales. BIBLIOGRAFA. 1. Fuentes X., Castieiras M. y Queralt J. Bioqumica clnica y patologa molecular. Volumen II, Segunda edicin. Barcelona, Espaa. 1998. Editorial Revert. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill. Apndice DETERMINACIN DE MAGNESIO PRINCIPIO: El magnesio forma un complejo de color prpura al reaccionar con la Calmagita en medio alcalino. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de magnesio. DISPOSICIN DE RPBI

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PRCTICA X

PRCTICA No. 10: PROTENAS TOTALES: ALBUMINA Y GLOBULINAS

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.
EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.

Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. Se realiz una prctica sobre la determinacin de las protenas totales tanto en suero como en plasma a partir de una muestra de sangre venosa. Se prepararon los controles, el blanco, el estndar y la muestra de plasma y suero y se incubaron durante 15 minutos a 37 oC en bao mara, posteriormente se leyeron a una longitud de onda de 540nm en el Humalyzer 2000. Para la albmina, de las muestras anteriores, se prepararon los controles, el blanco, el estndar y la muestra, incubndose 5 minutos a 37oC y leyndose a una longitud de onda de 578nm. INTRODUCCIN. Las protenas son un conjunto de aminocidos formadas por enlaces peptdicos cuyas funciones son varias, entre ellas estn: enzimtica, hormonal, estructural, transporte, ayudan al mantenimiento de la presin onctica en el plasma, en el sistema inmune para la formacin de las inmunoglobulinas, entre otras funciones. En el plasma las protenas totales se encuentran organizadas en dos tipos de protenas: albmina y las globulinas. La albmina sirve como un medio de transporte para otras molculas como electrolitos, bilirrubinas, etc. En el laboratorio su cuantificacin es de mucha utilidad para el diagnstico de diversas patologas como la insuficiencia heptica, la malnutricin y una infeccin coronaria, que se reflejan con una disminucin de las protenas totales; y cuando esas protenas se encuentran elevadas en el plasma, es a causa de una enfermedad autoinmune por la elevada concentracin de los anticuerpos. MATERIALES Y MTODOS. Materiales. Tubo para muestra sangunea de tapn rojo (sin anticoagulante) y de tapn morado (con anticoagulante). Torundas (impregnadas con alcohol etlico). Barril con aguja (Para tomar la muestra de sangre venosa). Micropipetas. Puntas para micropipetas. Gradilla. Tubos de ensaye. Guantes de ltex. Cubre bocas. Lentes de seguridad. Recipiente RPBI. Equipo. Espectrofotmetro Humalyzer 2000. Incubadora a bao mara. Centrifugadora.

Reactivos. a) Para protenas totales. Reactivo Biuret. Estndar de protenas de 8gr/dl. Control Normal. Control Patolgico. b) Para albmina. Reactivo verde de Bromocresol (VBC). Estndar de 4gr/dl. Control Normal. Control Patolgico.

Metodologa. Mtodo Biuret para Protenas Totales. 1. Tomar una muestra de sangre venosa en un tubo con tapn de color rojo y otro con tapn de color morado, homogeneizar lentamente en posicin invertida y dejar reposar la muestra hasta la formacin del coagulo (en el caso del tubo rojo). Se deber etiquetar el tubo con los datos del paciente. 2. Centrifugar la muestra a 3600 rpm durante 5 minutos. 3. En 6 tubos de ensaye marcados como muestra suero, muestra plasma, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos: REACTIVOS TUBO Reactivo de Suero Plasma Estndar Control Control MARCADO Biuret normal patolgico Muestra 1ml 10l ------------------------------------Suero Muestra 1ml ---------10l ---------------------------Plasma Estndar 1ml ------------------10l ------------------Control 1ml ---------------------------10l ---------normal Control 1ml ------------------------------------10l patolgico Blanco 1ml ---------------------------------------------4. Mezclar e incubar durante 15 minutos a 37oC. 5. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y las muestras, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 540nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 6. Reportar la concentracin de protenas totales.

Mtodo Verde de Bromocresol para Albmina. 1. En 5 tubos de ensaye marcados como muestra, estndar, control normal, control patolgico y blanco, los siguientes reactivos: REACTIVOS TUBO Reactivo VBC Suero Estndar Control Control MARCADO normal patolgico Muestra 1ml 10l ---------------------------Estndar 1ml ---------10l ------------------Control 1ml ------------------10l ---------normal Control 1ml ---------------------------10l patolgico Blanco 1ml ------------------------------------NOTA: El suero es tomado a partir de la muestra tomada para protenas totales. 2. Mezclar e incubar 5 minutos a 37oC. 3. Leer la absorbancia del estndar, control normal, control patolgico y la muestra, ajustando a cero el espectrofotmetro con el blanco, a una longitud de onda de 578nm. Primero se deber leer el blanco, luego el estndar, posteriormente los controles y finalmente la muestra. 4. Reportar la concentracin de albmina directamente del equipo o bien con la siguiente frmula: [Albmina] = (Absorbancia de la muestra) ([Estndar]) Absorbancia del estndar NOTA: Para calcular la concentracin de globulinas, se deber calcular a partir de la siguiente frmula: Globulinas = Protenas Totales Albmina RESULTADOS. Adn Cano Cano: Globulinas (suero)= 88.9gr/dl 65.6gr/dl = 23.3gr/dl Globulinas (plasma)= 87.5gr/dl 80.7gr/dl = 6.8gr/dl Oscar Hiram Castaeda Contreras: Globulinas (suero)= 87.3gr/dl 66.7gr/dl = 20.6gr/dl Globulinas (plasma)= 92.3gr/dl 71.9gr/dl = 20.4gr/dl

Germn Ayala Sandoval: Globulinas (suero)= 78.9gr/dl 53.3gr/dl = 25.6gr/dl Globulinas (plasma)= 82.7gr/dl 42.7gr/dl = 40gr/dl

PACIENTE Adn Cano Cano Oscar Hiram Castaeda Contreras Germn Ayala Sandoval

PROTENAS TOTALES (gr/dl) 88.9 (Suero) 87.5 (Plasma) 87.3 (Suero) 92.3 (plasma) 78.9 (Suero) 82.7 (Plasma)

ALBMINA (gr/dl) 65.6 (Suero) 80.7 (Plasma) 66.7 (Suero) 71.9 (Plasma) 53.3 (Suero) 42.7 (Plasma)

GLOBULINAS (gr/dl) 23.3 (Suero) 6.8 (Plasma) 20.6 (Suero) 20.4 (Plasma) 25.6 (Suero) 40 (Plasma)

VALORES DE REFERENCIA (gr/dl) Protenas Totales 6.6 8.7 Albmina 3.8 5.1 Globulinas 2.8 3.6

CONCLUSION. Los pacientes presentas elevaciones estratosfricas en las protenas totales, albmina y globulinas, pero esto no nos indica una patologa, puesto que los pacientes no estn enfermos, lo que pudo haber ocurrido es que al momento de tomar las muestras no se pipeteo bien, puesto que la variacin en cuanto a los valores de referencia es demasiado grande. BIBLIOGRAFA. 1. Wallach J. Interpretacin clnica de las pruebas de laboratorio, cuarta edicin. Barcelona, Espaa. 2003. Editorial MASSON, S. A. pp. 97 101. 2. Bishop M. Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edicin. Editorial MacGraw-Hill. APNDICE DETERMINACIN DE ALBMINA PRINCIPIO: La albmina reaccina con el verde de bromocresol a un determinado pH formando un complejo coloreado que absorbe a 630 nm. La cantidad del complejo formado es directamente proporcional a la cantidad de albmina presente. DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES PRINCIPIO: A un pH alcalino, las protenas reaccionan con el cobre del reactivo de Biuret, causando un incremento en la absorbancia. Protenas + Cu++ ---------- complejo azul-violeta El incremento de la absorbancia a 540 nm debido a la formacin del complejo coloreado es directamente proporcional a la concentracin de protenas en la muestra.

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EQUIPO DE SEGURIDAD

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUMICA CLNICA

PRCTICA XI

PRCTICA No. 11: HIERRO

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.

EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. A partir de una muestra sangunea obtenida de un paciente (Germn Ayala Sandoval), con centrifugacin para obtencin de suero, se realiz la determinacin de hierro en sangre, por el mtodo de FERROZINE en el equipo HUMALYZER 2000; en el cual se obtuvo un resultado de 81.5 mg/dL. INTRODUCCIN. El hierro es un componente esencial de la hemoglobina, que transporta el oxgeno de la sangre a todas las partes del cuerpo. Tambin juega un papel vital en muchas reacciones metablicas. La deficiencia de hierro puede causar anemia como resultado de niveles bajos de hemoglobina en la sangre. La deficiencia de hierro es la deficiencia nutricional ms comn mundialmente. El hierro es esencial para la formacin de la hemoglobina, el pigmento rojo de la sangre. El hierro de la hemoglobina se combina con el oxgeno y lo transporta a travs de la sangre a los rganos del cuerpo. El cuerpo humano contiene entre 3,5 y 4,5 gramos de hierro, dos tercios del cual estn presentes en la hemoglobina. El resto se almacena en el hgado, el bazo y la mdula de los huesos. Una cantidad pequea est presente en forma de mioglobina, que acta como depsito de oxgeno en los msculos. La deficiencia de hierro puede conducir a anemia. Los depsitos de hierro del cuerpo llegan a estar agotados y la sntesis de hemoglobina se inhibe. Entre los sntomas de la anemia estn el cansancio, falta de energa, falta de aliento, dolores de cabeza, insomnio, prdida del apetito y palidez. Todos estos sntomas se asocian con un aporte disminuido de oxgeno a los tejidos y a los rganos. El hierro tambin juega un papel importante en el sistema inmunitario, teniendo las personas con niveles bajos de hierro una resistencia menor ante las infecciones. Los estudios tambin han demostrado que una deficiencia de hierro se asocia con el funcionamiento cerebral disminuido, y la deficiencia de hierro en los nios puede resultar en problemas con la capacidad de aprendizaje y el comportamiento. La deficiencia de hierro es el problema nutricional ms frecuente en Gran Bretaa y en el mundo. Se ha dicho que dos tercios de los nios y de las mujeres en edad de tener hijos son anmicos en los pases en vas de desarrollo, y un tercio sufre de deficiencias severas y anemia. En los pases desarrollados, entre el 10 y el 20% de las mujeres, en edad de tener hijos, son anmicas. OBJETIVOS. Realizar la determinacin de los niveles de fierro en sangre, y conocer su importancia mdica. MATERIALES Y MTODOS. MATERIAL Torniquete Tubo seco o con gel para la toma de sangre Barril para venopuncin Jeringa Torundas con alcohol Centrfuga Pipetas de transferencia Tubos de ensaye

Pipetas pistn de 10 y 1000 Puntillas para las pipetas REACTIVOS Reactivo de Trabajo: solucin de buffer de pH 4.9 y agente reductor. Reactivo de color, FerroZine. Control Normal Control Patolgico Muestra de suero sanguneo EQUIPO Gradilla Bao mara a 37 C Equipo Humalyzer 2000

MTODO: Mtodo de FERROZINE: 1) Realizar la toma de muestra, por venopuncin, en tubo para obtener el suero. 2) Mediante la centrifugacin, separar el suero de los dems componentes sanguneos. 3) Etiquetar cuatro tubos de ensaye como: REACTIVOS TUBO Blanco RT Estndar Blanco Muestra MARCADO muestra RT 10l 10l 10l 10l (3) 1 gota 1 gota ---------1 gota H2O dest. 200l ---------------------------Estndar ---------200l ------------------Suero ------------------200l 200l 4) Colocar en incubacin en el bao mara durante 5 minutos a una Temperatura de 37C. 5) Transcurrido exactamente este tiempo, realizar las lecturas de sus absorbancias con una longitud de onda de 562 nm, teniendo por secuencia el blanco, el estndar, los controles y finalmente las muestras. 6) Reportar los valores obtenidos en la determinacin de hierro. RESULTADOS E INTERPRETACIN. PACIENTE MUESTRA (mg/dL) Germn Ayala Sandoval 81.5

BLANCO MUESTRA (mg/dL) 30.8 L

VALORES DE REFERENCIA (mg/dL) 65-175 mg/dL

El resultado obtenido en la muestra analizada (81.5 mg/dL) se encuentra dentro de los valores de referencia, lo que indica que el paciente se encuentra en perfectas condiciones de salud.

CONCLUSIONES. Se puede concluir que este mtodo para la determinacin de hierro es eficiente para la deteccin de anemias, las cuales se dan en los eritrocitos, la hemoglobina de los mismos, y el mismo fierro que conforma el grupo hemo. Estos padecimientos son muy comunes en muchos individuos, principalmente en mujeres. La determinacin de fierro en sangre sirve para evaluar, si la causa de la anemia es por un dficit de fierro, su causa puede ser por una ingesta pobre del mismo, o una mala absorcin intestinal debido al transportador o a falta de vitaminas que complementen ste trasporte. BIBLIOGRAFA. 1) Henry Bernard J.; El laboratorio en el diagnstico clnico; ed. Marbn; 2003. 2) M.L. Bishop; Qumica clnica, principios, procedimientos y correlaciones; ed. Mac Graw Hill; 5 ed. 3) Doug Duea, "El hierro", Unin Vegetariana Internacional (IVU), Espaa, http://www.ivu.org/spanish/trans/vsuk-iron.html Consultada: 18-Octubre-2008 APNDICE DETERMINACIN DE HIERRO PRINCIPIO: El hierro (+3) reacciona con el cromazurol B (CAB) y cetiltrimetilbromuro de amonio (CTMA) para formar un complejo ternario coloreado con una mxima absorbancia a 623 nm. La intensidad del color producido es directamente proporcional a la concentracin de hierro en la muestra.

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PRCTICA XII

PRCTICA No. 12: DETERMINACIN DE BILIRRUBINAS

MAESTRO: Pilar del Carmen Hernndez Rodrguez.
EQUIPO: Adn Cano Cano 215637 Oscar Hiram Castaeda Contreras 215600 Germn Ayala Sandoval 215559 Grupo: 7 A.
Fecha de entrega: viernes 22 de Octubre del 2010

RESUMEN. En esta prctica se llev a cabo la determinacin de bilirrubinas por el mtodo de cido Sulfanlico en el equipo HUMALYZER 2000, de una muestra de suero obtenida del paciente Oscar

Hiram Castaeda Contreras, encontrando niveles de bilirrubinas totales, directas e indirectas. INTRODUCCIN. La bilirrubina es un producto del catabolismo de la hemoglobina. Los 2 pigmentos biliares son la bilirrubina y la biliverdina, se originan en el sistema retculo-endotelial, incluyendo las clulas de kupfer del hgado y otras clulas retculo-endoteliales que retiran de la circulacin a los eritrocitos. Est claro que un aumento de la destruccin de hemates, lesin hepatocelular y obstruccin de las vas biliares, puede causar aumento de los pigmentos biliares. Cuando hay un exceso de pigmentos biliares en la sangre, stos pasan a los tejidos, los cuales toman una coloracin amarillenta. A esto se le denomina ICTERICIA O ICTERUS. Esto sucede cuando la concentracin de bilirrubina directa en sangre es mayor de 2.5mg/dl. La bilirrubinuria antecede a la ictericia porque el umbral de eliminacin renal de la bilirrubina es menor de 2 mg/dl. En individuos normales, las pruebas para demostrar bilirrubinas en orina son negativas. El mdico se interesa por la concentracin de bilirrubina de aquellos pacientes que presenten algn factor de riesgo, para tener alteraciones sobre todo de la funcin heptica, y de la produccin de las clulas rojas de la sangre. Debido al metabolismo particular de la bilirrubina, resulta de suma importancia conocer la concentracin srica de este componente, pues as se evala indirectamente el funcionamiento heptico. Adems, ayuda a identificar enfermedades intra y extra hepticas de todas las clulas, enzimas y productos intermediarios en el metabolismo de la bilirrubina. La patologa probable depender del tipo de bilirrubina que se encuentre elevado. A continuacin listamos las distintas enfermedades donde las distintas bilirrubinas se elevan: a) La bilirrubina indirecta o sin conjugar, que se calcula restando la bilirrubina total menos la bilirrubina directa o conjugada, produce la llamada Ictericia Hemoltica, causada por cualquier tipo de anemia hemoltica (reaccin a la transfusin, enfermedad de clulas falciformes, etc.) Se eleva tambin en la enfermedad de Gilbert, en la ictericia fisiolgica (normal) del recin nacido, y en el sndrome de Crigler-Najjar. b) La bilirrubina directa o conjugada, que es cuando la bilirrubina total result mayor de 1.2 mg/dl, se eleva en obstrucciones biliares o colestasis (por un clculo o piedra de la vescula, tumores, o estrechamientos de los conductos biliares), en colestasis inducidas por medicamentos, o en los sndromes de Dubin-Johnson y de Rotor. c) La bilirrubina total (directa e indirecta juntas), se eleva en cualquier tipo de dao heptico (en cirrosis, hepatitis o ingesta de txicos, en obstrucciones biliares (por piedras o tumores en las vas biliares), hemlisis y por ayuno prolongado. Algunos puntos importantes en la determinacin de bilirrubinas son los siguientes: La presencia de hemlisis disminuye falsamente el resultado de bilirrubinas en la mayora de los ensayos debido a un aumento en la absorbancia del blanco; por ende las muestras no deben exhibir hemlisis. La bilirrubina es sensible a la luz y al calor, por los cuales es destruida; por lo tanto, el anlisis debe llevarse a cabo rpidamente y proteger la muestra de la luz.

OBJETIVOS. Realizar la determinacin de los niveles sanguneos de bilirrubinas y conocer su importancia en el diagnostico de enfermedades hepticas, biliares y hemolticas. MATERIALES Y MTODOS. MATERIAL Torniquete Tubo seco o con gel para la toma de sangre Barril para venopuncin Jeringa Torundas con alcohol Centrfuga Pipetas de transferencia Tubos de ensaye Pipetas pistn de 10 y 1000 Puntillas para las pipetas REACTIVOS cido sulfanlico Nitrito sdico Cafena Tartrato Cloruro de sodio (NaCl) con concentracin de 0.9% Muestra de suero sanguneo EQUIPO

Gradilla Equipo Humalyzer 2000

MTODO: Mtodo con CIDO SULFANLICO: a) Bilirrubinas totales: 1) Teniendo al paciente en ayunas, realizar la toma de muestra, por venopuncin, en tubo para obtener el suero. 2) Mediante la centrifugacin, separar el suero de los dems componentes sanguneos. 3) Etiquetar cuatro tubos de ensaye como: REACTIVOS TUBO R Blanco Estndar Muestra Muestra bco. MARCADO (1) 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml (2) 1 gota 1 gota 1 gota ---------H2O 0.05 ml ---------------------------Estndar ---------0.05 ml ------------------Suero ------------------0.05 ml 0.05 ml

4) Incubar 3 minutos a Temperatura ambiente. 5) Leer las absorbancias en el equipo HUMALYZER 2000 a 540 nm. b) Bilirrubinas directas: TUBO MARCADO (1) (2) H2O Estndar Suero R Blanco 1 ml 1 gota 0.1 ml ------------------REACTIVOS Estndar Muestra 1 ml 1 gota ---------0.1 ml ---------1 ml 1 gota ------------------0.1 ml Muestra bco. 1 ml ---------------------------0.1 ml

1) Mezclar, incubas durante 3 minutos a temperatura ambiente. 2) Leer Absorbancias a 540 nm. c) Bilirrubinas Indirectas: 1) Realizar los clculos correspondientes para la obtencin de los valores de bilirrubina directa y total. 2) Mediante una diferencia del valor de bilirrubina total menos el valor de bilirrubina directa, obtener el valor de bilirrubina indirecta. RESULTADOS E INTERPRETACIN. BT: M=-0.020 Mbco=-0.040 BT = Abs M Abs Mbco X Conc. Std. Abs Std. BT = (-0.020) (-0.040) X 10 mg/dL = 0.4830 mg/dL 0.414 BT = (-0.020) (-0.040) X 10 mg/dL = 1.5503 mg/dL 0.129 BD = Abs M Abs Mbco X Conc. Std. Abs Std. BD = (-0.173) (-0.218) X 10 mg/dL = 0.4830 mg/dL 0.576 BI = BT BD = 0.4830 1.5503 = 0.29825 mg/dL PACIENTE BT (mg/dL) a BT (mg/dL) BD (mg/dL) Abs 0.414 a Abs 0.129 Oscar Hiram 0.4830 1.5503 0.4830

BD: M=-0.173 Mbco=-0.218

BI (mg/dL)

0.29825

VALORES DE REFERENCIA (mg/dL) BT: Hasta 1.2

Castaeda Contreras

mg/dL BD: Hasta 0.4 mg/dL BI: Hasta 0.8 mg/dL

Los resultados obtenidos para bilirrubinas totales nos dicen que estn normales en la que fue medida con una absorbancia estndar de 0.414 ya que se encuentran por debajo del lmite del valor de referencia; mientras que en la que fue medida con una absorbancia de 0.129 nos dio un resultado que sobrepasa el lmite permitido de bilirrubina. Para Bilirrubinas directas los resultados salieron un poco elevados pero se encuentran en rangos normales. Para bilirrubinas indirectas los resultados salieron por debajo del lmite permitido en los valores de referencia

CONCLUSIONES. Se puede concluir que el paciente se encuentra en perfectas condiciones de salud. Adems de que esta medicin de bilirrubinas en suero, es un estudio sencillo, que permite monitorear, la funcin heptica y posiblemente con una buena interpretacin la homeostasis hematolgica, ya que la bilirrubina indirecta es un producto directo de la degradacin del anillo tetrapirrlico de la hemoglobina, y en una hemlisis ya sea por compuestos oxidantes, por leucemia o lupus, la concentracin se elevara. BIBLIOGRAFA. 1) Henry Bernard J.; El laboratorio en el diagnstico clnico; ed. Marbn; 2003. 2) M.L. Bishop; Qumica clnica, principios, procedimientos y correlaciones; ed. Mac Graw Hill; 5 ed. 3) Universidad de colima. Laboratorio de anlisis clnicos II. Manual de Prcticas. Prctica No. 7 Determinacin de bilirrubinas APNDICE DETERMINACIN DE BILIRRUBINA (DIRECTA Y TOTAL) PRINCIPIO: La bilirrubina, tanto directa como indirecta reacciona con el cido sulfanlico diazotado (formado por la combinacin de nitrito de sodio con cido sulfanlico a bajo pH), para formar un complejo coloreado que es ledo a 540 nm. Bilirrubina conjugada + c. Sulfanlico -------------- azobilirrubina diazotado La absorbancia del reactivo es directamente proporcional a la concentracin de bilirrubina total.

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