CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE ENTEROBACTERIAS Y BACILOS Roco Henao 1036537, Laura Ochoa 1034016, Aixa Rubiano 1034479 -----------------------------------------------------Resumen-----------------------------------------------------En esta

prctica se realiz la caracterizacin bioqumica de enterobacterias y bacilos, las enterobacterias utilizadas fueron: Salmonella typhi, Proteus vulgaris, Klebsiella pnemonaie y E.Coli. A cada bacteria se le practicaron 8 pruebas bioqumicas, dichas pruebas y sus respectivos reactivos fueron: TSI, lisina decarboxilasa, citrato de Simons (azul de brotimol), urea de Christensen (rojo de fenol), movilidad, prueba de indol (reactivo de Kovacs), reaccin del rojo de metilo (solucin de metilo) y reaccin de Vogues Proscaver (solucin de sulfato de cobre). Para la caracterizacin de bacilos se us un cultivo de Bacilius Cereus, el cual se sembr en agar de almidn, gelatina y leche, y adems en caldo de glucosa, de arabinosa, de xilosa y nitrato. Para la lectura de los resultados se utiliz lugol para el agar de almidn, cloruro de mercurio al 15% para gelatina, reactivo de Griess para el caldo de nitrato. La prueba de TSI result positiva para todas las bacterias. La lisina decarboxilasa postiva para: Klebsiella pnemonaie, E.Coli y Salmonella typhi y negativa para: Proteus Vulgari. Urea de Christensen positiva para: Proteus vulgaris, Klebsiella pnemonaie y negativa para: Salmonella typhi y E.Coli. Movildad positiva para: Salmonella typhi, Proteus vulgaris, E.Coli y negativa para: Klebsiella pnemonaie. Citrato de Simons negativa para todas las bacterias. Prueba de indol positiva para: Salmonella typhi, E.Coli y negativa para: Proteus vulgaris, Klebsiella pnemonaie. Reaccin de metilo positiva para todas las bacterias. Reaccion de Vogues positiva para: Klebsiella pnemonaie y negativa para: Salmonella typhi, Proteus vulgaris, E.Coli. En cuanto a Bacilius Cereus los tres agares dieron positivos y los caldos nicamente el de glucosa fue positivo. INTRODUCCION. El gnero salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Siendo fiel a su nombre, esta familia se compone de bacterias que se multiplican en el intestino siendo varios los gneros de Enterobacteriaceae que incluyen especies patgenas. Al igual que todos los gneros de Enterobacteriaceae, Salmonella est formado por bacterias gran negativas flageladas y de forma bacilar. Las salmonellas son microorganismos anaerobios facultativos, presentando las dos rutas metablicas, la oxidativa y la fermentativa. Son oxidasa negativos, fermentan la glucosa generando cido y gas, crecen en citrato como nica fuente de energa, descarboxilan la lisina y la ornitina, suelen producir sulfuro de hidrogeno y no hidrolizan la urea. Una de las caractersticas de este gnero es que la mayor parte de sus integrantes no pueden fermentar la lactosa ni la sacarosa. Los serotipos de Salmonella no pueden diferenciarse bioqumicamente. Los mtodos de deteccin convencionales se basan en pruebas bioqumicas capaces de identificar las bacterias pertenecientes al gnero Salmonella. La descarboxilacin de la lisina en el LIA, la fermentacin anaerobia de la glucosa en el agar TSI, la produccin de H2S en el LIA y en el agar TSI y la utilizacin del citrato son propiedades bioqumicas relevantes para la identificacin de salmonellas. Tambin se aprovecha para su identificacin la imposibilidad de que estas bacterias (a) hidrolicen la urea, (b) produzcan indol a partir de triptofano y (c) crezcan en

presencia de cianuro de potsico. Por tanto, la identificacin bioqumica de salmonella requiere el anlisis de las colonias aisladas y el de las que se han formado, presuntamente, por el crecimiento de miembros de ese gnero, en los medio LIA y agar TSI y las pruebas bioqumicas correspondientes. (Yousef, 2006) Prueba de indol: Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la degradacin del aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa. Prueba de rojo de metilo: Es una prueba cuantitativa de la produccin de cido que requiere los microorganismo positivos produzcan cidos fuertes de la glucosa a travs de la va de fermentacin acida mixta. Como muchas especies de la familia Enterobacteriaceae pueden producir suficientes cantidades de cidos fuertes que pueden detectarse mediante el indicador rojo metilo durante las fases iniciales de la incubacin, solo los microorganismos que pueden mantener este pH bajo despus de incubaciones prolongadas (48 a 72 horas), superando el sistema buffer del medio, pueden ser llamadas positivas para rojo de metilo (Koneman, 2008). Voges-Proskauer: En la prueba de VogesProskauer se determina la va de fermentacin del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metilcarbinol (o acetona) es un producto intermediario en la produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.

Citrato de Simmons: Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono y compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del medio. TSI: El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio. Tambin permite la identificacin de la produccin de SH2. Esta es una prueba especfica para la identificacin a nivel de gnero en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre: bacterias fermentadoras de la glucosa, bacterias fermentadoras de la lactosa, bacterias fermentadoras de sacarosa, bacterias aerognicas, bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgnicas que contengan azufre. Movilidad: Esta prueba bioqumica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reaccin de Indol a la descarboxilacin de la ornitina. LIA: Esta prueba permite diferenciar los microorganismos que producen descarboxilacin o desanimacin de la lisina. Se pude detectar adems la produccin de SH2 y es ms sensible que el TSI para la deteccin de SH2. Es muy utilizado para descartar Salmonella de aislamientos primaros. Prueba de ureasa: Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por accin del enzima ureasa. Esta actividad enzimtica es caracterstica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar

este gnero de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. METODOS Y MATERIALES. Para la caracterizacin bioqumica de enterobacterias a cada grupo se le proporcion un tipo de bacteria para la identificacin del gnero y especie. En el caso de este grupo, se recibi Salmonella al cual se re realizaron cierto nmero de pruebas para conocer su especia. Las pruebas realizadas fueron: TSI, lisina decarboxilasa, citrato de Simons, urea de Christensen, movilidad, prueba de indol, reaccin del rojo de etilo, reaccin de Vogues Proscaver. Para estas pruebas se usaron 5 diferentes tipos de medios que se pueden observar en la figura 1.

y un asa recta. Se sembr la enterobacteria del mismo modo que se realiz en la prueba de TSI. Se llev a la incubadora a 37C por 48 y se realizaron los respectivos anlisis. Para la prueba de citrato de Simons se utiliz un tubo de ensayo con citrato y sales de amonio, asa y azul de brotimol. Se realiz una siembra en la superficie nicamente de la enterobacteria correspondiente, se llev a la incubadora a 37C por 48 horas y posteriormente se le agreg azul de brotimol para sus respectivos anlisis. Para la prueba de urea de Christensen se us un tubo de ensayo que contena las sustancias necesarias para dicha prueba, una colonia de la entorobacteria correspondiente, un asa y rojo de fenol. Se realiz la siembra por estra en la superficie de la enterobacteria correspondiente, se llev a la incubadora a 37C por 48 horas y posteriormente se le agreg rojo de fenol para sus respectivos anlisis. Para la prueba de movilidad se utiliz un tubo de ensayo con un medio SIM, un asa y la colonia de la entorobacteria. Se realiz la siembra de dicha colonia por profundidad y en el centro del agar, posteriormente se llev a la incubadora a 37C por 48 horas, se observ y se realizaron los respectivos anlisis. Para la prueba de indol se utiliz el tubo de ensayo con la siembra realizada para la prueba de movilidad y reactivo de Kovacs. Una vez leda la prueba de movilidad, se le agrega al tubo de ensayo el reactivo de Kovacs y se hacen los respectivos anlisis. Para la prueba de reaccin del rojo de metilo, se us un tubo de ensayo con un caldo MRVP, colonia de entorobacteria, asa y

Figura 1. Medios utilizados para las pruebas bioqumicas.

Para la prueba de TSI se utiliz un tubo de ensayo que contena glucosa 0,5-1% fenol, sacarosa, lactosa, rojo de fenol y sulfato ferroso. Adems de la colonia de bacteria suministrada (Salmonella typhi). Se realiza la siembra del cultivo con una asa recta y tanto en profundidad como en estria. Se llev a la incubadora a 37C por 48 y se realizaron los respectivos anlisis. Para la prueba de lisina decarboxilasa se hizo uso de un tubo de ensayo que contena las sustancias necesarias para dicha prueba, una colonia de la entorobacteria correspondiente

solucin de rojo de metilo. Se realiz la siembra del cultivo en el caldo y se incub por 48 horas a una temperatura de 37C, posteriormente se le adicionan 5 gotas de solucin de etilo y se realizan los anlisis respectivos. Por ultimo para la prueba de reaccin de Vogues Proscaver se utiliz un tubo de ensayo con un caldo MRVP, colonia de entorobacteria, asa y solucin de sulfato de cobre. Se realiz la siembra del cultivo en el caldo y se incub por 48 horas a una temperatura de 37C, posteriormente se le adicionan 5 gotas de solucin de sulfato de cobre, se meti nuevamente a la incubadora y pasados 20 minutos aproximadamente se sac y se realizan los anlisis respectivos. Para la caracterizacin bioqumica de bacilos se utiliz colonia aislada de Bacillius Cereus, una caja de Petri con medios agar leche, agar almidn y agar gelatina, 3 tubos de ensayo con caldo glucosa, caldo arabinosa, caldo xilosa y caldo de nitrato. Se utilizaron adems, solucin de lugol, reactivo de Griess y cloruro de mercurio al 15%. Se siembra una muestra de cultivo de Bacillius Cereus por estria en los medios de agar leche, agar almidn y agar gelatina, adems se siembra una muestra en los 4 caldos glucosa, arabinosa, xilosa y nitrato, tanto los caldos como los agares se incubaron a 37C por 48 horas. Posteriormente al agar de almidn se le adicion solucin de lugol cubriendo toda la superficie, al agar de gelatina se le agreg 5 gotas de cloruro de mercurio al 15%, se esper 5 minutos, se enjuago con agua corriente y se analiz. A los caldos de glucosa, arabinosa y xilosa se les observ cambio de color o aparicin de burbujas. Al caldo de nitrato se le agregaron

unos miligramos de reactivo de Griess y se observ el color que presentaba. RESULTADOS. RESULTADOS. En la figura 2 se observa el caldo nitrato antes de la incubacin y despus de agregar el reactivo de Griess. Su resultado dio negativo.

Figura 2. Caldo Nitrato. El caldo nitrato de observa transparente antes de la incubacin y despus de 48 horas de incubacin de observa con un color amarillo translucido. En la figura 3 muestra la bacteria B. cereus, mezclada con los medios de cultivo de arabinosa, xilosa y glucosa antes de la incubacin.

agar gelatina, despus de 48 horas de incubacin pero antes de aplicar los reactivos para la discusin de los resultados.

Figura 3 Medios de cultivo arabinosa, xilosa y glucosa Se observa de color naranja el medio cultivo arabinosa y xilosa, el medio de cultivo glucosa se observa con un color poco mas rojo. En la figura 4 se muestran estos mismos medios cultivos despues de 48 horas de incubacion. Sus resultados fueron para arabinosa negativo, xilosa negativo y glucosa positivo. Figura 5. Medios de cultivo agar leche, agar gelatina y agar almidn. Se observan los tres medios de cultivos de color blanco y de forma irregular, con bordes de dientes. Despus de la incubacin de 48 horas de B. cereus en estos medios de cultivos se aadi lugol y cloruro de mercurio al 15% sobre el agar almidn y agar gelatina respectivamente. En las figuras 6 y 7 se observan estos resultados. Sus resultados fueron agar almidn positivo, y agar gelatina positivo.

Figura 4. Caldos despus de la incubacin. Se observa que ya los 3 caldos estn del mismo color, arabinosa y xilosa no cambiaron su color pero la glucosa si. En la figura 5 se observa el cultivo de B. cereus en medio de cultivo agar leche, agar almidn y

Figura 6. Agar almidn con lugol. Al aadirle lugol al almidn de observa un cambio de color a amarillo y blanco mas

opaco que el inicial, de forma de forma redonda e irregular y con bordes regulares y se observa un color azul.

En el agar leche no hubo cambio de color blanco, hay una zona un poco mas clara. Se observa una forma irregular con bordes Discusin En el caldo de nitrato despus de la incubacin no hubo cambio de color, Esta prueba sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos. Un cambio de color (rojo) indica prueba completa con resultado positivo. Si no cambia de color es negativa lo que indica que no hubo reduccin de nitrato por parte de B. cereus en este caldo. Esta prueba se utiliza principalmente para diferenciar determinadas bacterias. (Martinez, Perez, Rodriguez 2002) Con los caldos arabinosa glucosa y xilosa hay un cambio de color del inicial (antes de la incubacin) al final (despus de la incubacin) solo en el caldo glucosa el cual se observa cambio de color rojo a naranja; los otros dos caldos, arabinosa y xilosa, se mantuvieron en un tono naranja desde el principio hasta el final. La glucosa dio resultado positivo pues hubo un cambio de color y tiene un ligero tono rosado, el caldo arabinosa y xilosa dio un resultado negativo pues no hubo cambio de color. El fermentacin se refiere al trmino degradacin anaerbica de carbohidratos, ya que estos almacenan gran cantidad de energa, la capacidad de fermentar depende de las enzimas del microrganismos. En este experimento observamos la fermentacin de carbohidratos como: galactosa, en la cual se inocul B. cereus dando un resultado negativo en cuanto a presencia xilosa y arabinosa lo que indica que este microrganismos no posee las enzimas necesarias para fermentar este carbohidrato. La glucosa usada como otro

Figura 7. Agar gelatina con cloruro de mercurio al 15%. Con respecto al agar gelatina, al aadirle el cloruro de mercurio al 15% no se ve un gran cambio de color pero se observa que rodeando la estra hay un cambio de color es un poco mas beige, la forma es irregular y con bordes de dientes e irregulares. Con respecto al medio de cultivo agar leche no se aadi ningn reactivo. Despus de 48 horas de incubacin. En la figura 8 se observa este medio de cultivo. Su resultado dio positivo.

Figura 8. Agar leche despus de 18 horas de incubacin sin ningn reactivo.

carbohidrato, dio como resultado positivo en cuanto a fermentacin, Lo que indica b. cereus utilizador de glucosa como hidrato de carbono productos cidos. Para las pruebas de agar almidn, agar gelatina y agar leche: Agar almidn: a la bacteria Gram positiva B. Cereus despus de 48 horas de incubacin se le agreg una solucin de lugol, esta se aade con el fin de observar la reaccin del microrganismo y la capacidad que este tienen para producir una enzima que hidrolice al almidn. B. Cereus fue resistente al colorante e hidroliz almidn formndose un borde azul. Las zonas claras que se observan en la figura 6 son las reas hidrolizadas. (Martinez, Perez, Rodriguez 2002) Agar gelatina: Despus de la se incubacin de 48 horas el tubo que tenia siembra de B. cereus se le agrego cloruro de mercurio al 15%. Se observo una zona beige rodeando la estra. Esta bacteria produce una enzima llamada proteolticas que licuan la gelatina (gelatinasas) (Martinez, Perez, Rodriguez 2002). La zona beige indica que se hidroliz por eso el resultado positivo. Agar leche Despus de la incubacin de B. Cereus se observ una transparencia alrededor del o de la colonia que hidrolizan la casena. El cambio que se observ en la caja de agar leche es la clarificacin del agua alrededor de las colonias que producen caseinosa. La hidrlisis de la casena no difiere de la de cualquier protena tpica, la molcula proteica se desarrolla en etapas produciendo una sucesin de molculas de tamao decreciente llamadas proteasas, peptonas, pptidos, hasta terminar en aminocidos libres, las cuales por su tamao son ya cristaloides (Martinez, Perez, Rodriguez 2002)

Salmonella Como se puede observar en la figura 8 es color del fondo del tubo de ensayo en la pueda de TSI es como naranja amarilloso y en la parte superior es de color rojo, adems presenta un ennegrecimiento en la parte baja de este, por lo que se puede afirmar que el resultado de la prueba TSI es positivo y adems que es K/A fermentador de solamente glucosa

Figura 8. TSI Salmonella. Es posible ver en la figura 9 que el color en la prueba de lisina fue un color violeta brillante y adems hay un ennegrecimiento del medio lo que permite afirmar que el resultado de Lisina descarboxilasa es positivo.

Figura9. Lisina Salmonella Como se observa en la figura 10 no hubo un cambio significativo en el color este sigue siendo verdoso solo que un poco ms brillante, por lo que se puede afirmar que la respuesta de la salmonella a la prueba de citrato de simons es negativa.

da una lectura de resultados positiva para la prueba movilidad.

Figura 11. Movilidad Salmonella En la figura 12 se puede observar la superficie del tubo de ensayo con el medio SIM luego de la incubacin y de aadirle 0,1 mL del reactivo de Kovacs, su color es transparentoso y no presenta ningn tipo de coloracin roja por lo que se puede afirmar que el resultado de la prueba de Indol para Salmonella es negativo.

En la figura ***** se puede ver claramente un cambio en el color del medio, este paso de anaranjado a amarilla lo que indica un resultado de urea de christensen negativo para salmonella.

Figura12. Indol Salmonella Como es posible ver en la figura 13 despus de agregar el reactivo de rojo de metilo el color del medio cambio notablemente a rojo lo que revela que el resultado para Salmonella de la prueba reaccin de rojo metilo es positivo.

Figura10. Urea Salmonella Como se puede ver en la figura 11 el medio se ha ennegrecido significativamente lo cual

A/A fermentan 3 azucares, glucosa, lactosa, sacarosa. Bacterias que no pueden romper sacarosa no la fermentan Resultados pruebas microorganismos bioqumicas de

Figura13. Rojo de metilo Salmonella En la figura 14 se puede observar que no hay un cambio significativo en el color del medio despus del respectivo procedimiento, por lo cual se afirma que la reaccion de Vogues Proscaver es negativa para la Salmonella.

TSI Lisina descarboxilasa Citrato de Simons Urea de Christensen Movilidad Prueba de Indol Reaccin de rojo metilo Reaccin de Vogues Proscaver

Klebsiella + + + + + +

TSI positiva

Figura14. Vogues Salmonella E.coli + + + + + -

TSI Lisina descarboxilasa Citrato de Simons Urea de Christensen Movilidad Prueba de Indol Reaccin de rojo metilo Reaccin de Vogues Proscaver

Figura 15. TSI Klebsiella

Presenta un color amarillo concentrado y se ven las colonias distribuidas a lo largo de tubo.

Lisina descarboxilasa positiva

Urea de Christensen negativo

Figura 16. Lisina Klebsiella

Se presenta un color violeta Citrato de Simons positivo

Figura 18. Urea Klebsiella Para esta prueba se presenta una reaccin de ureasa positiva y se detecta como un cambio de color rosa a rojo en la posicin inclinada del agar.

Movilidad negativo

Frigura 17. Citrato Klebsiella

Presenta un color verde-azul y la colonia se observa en la misma direccin donde ocurri la picadura no hay bacterias dispersas.

Figura 19. Movilidad Klebsiella Es un medio semislido de un color amarillo traslucido, se ve como las bacterias permanecen en la misma lnea de la picadura en que se sembraron.

Reaccin de rojo metilo positivo

Figura22. Rojo de metilo Proteus Como se puede observar en la figura 23 hay un ennegrecimiento significativo del medio, lo que indica que la prueba de movilidad es positiva.

Figura 20. Vogues Klebsiella Reaccin de Vogues Proscaver positivo

Muestra Proteus
En la figura21 se puede observar un cambio pequeo en la coloracin del medio, sin embargo este no es de color rojo por lo cual se afirma que la prueba de Vogues es negativa para Proteus.

Figura23. Movilidad Proteus En la figura 24 se ve la superficie del tubo de ensayo con el medio SIM luego de la incubacin y del reactivo, es posible notar que su color es transparentoso y no rojo por lo que se afirma que el resultado de la prueba de Indol es negativo

Figura 21. Vogues Proteus

En la figura 22 se ve una coloracin rojiza en el medio lo que indica que la prueba de rojo de metilo es positivo para la bacteria Proteus.

Figura23. Indol Proteus Como se puede observar en la figura 24 el color del medio es rojo y no presenta ennegrecimiento por lo cual se infiere que el resultado de la prueba de Lisina-hierro es negativo.

Figura 25. Citrato Proteus En la figura 26 se observa un claro ennegrecimiento del medio adems de un color rojizo en la parte superior de este por lo cual se afirma que el resultado de la prueba de TSI es positivo para Proteus y que adems es una enterobacteria del tipo K/A es decir que solo fermenta glucosa.

Figura24. Lisina Proteus En la figura 25 se ve claramente un color azul brillante con crecimiento bacteriano, de lo cual se puede afirmar que la prueba de citrato es positiva para Proteus. Figura26. TSI Proteus Como es posible observar en la figura27 el color del medio es fucsia lo que permite afirmar que la prueba de urea es positiva.

una reaccin de ureasa positiva se detecta primero como un cambio de color rosa a rojo en la posicin inclinada del agar. No se puede utilizar medios como el caldo lisina de Falkow para detectar actividad de lisina descarboxilasa en ciertos miembros del grupo Klebsiella, los cuales producen acetilmetilcarbinol, que interfiere en el cambio alcalino final del pH y conduce a interpretaciones falsas negativas. Tambin se describen mtodos rpidos para detectar actividad de lisina en miembros de las enterobacterias. (Koneman, 2008) La confirmacin que demuestra que una colonia pertenece a la especie E.coli, que consiste en someter las cepas a diferentes pruebas bioqumicas como la de indol, nos dice que si la colonia aislada es negativa a esta prueba, no se le considera E. coli y, por tanto, se descarta. Las colonias formadas por esta bacteria en el agar Rainbow sern grises o negruzcas por lo que las colonias que adquieren esta tonalidad se consideran presuntivas de ser E. coli O157:H7. Estas colonias tambin se sometieron a la prueba de indol; E. coli es indol positivo, E. coli descompone el triptfano en el medio de crecimiento y genera indol. La peptona es una de las fuentes de ese aminocido en los medios de cultivo. Cuando un cultivo lquido de E. coli se pone en contacto con el reactivo de Kovacs se apreciara una capa superficial roja, que indica el carcter positivo al indol del cultivo. (Yousef, 2006) Los resultados obtenidos en la prueba de TSI tanto para la Salmonella y Proteus indican que en la parte amarilla (fondo) es un medio cido y en la parte roja (parte superior) es

Figura27. Urea Proteus ANLISIS. Klebsiella Entre las enterobacterias, la movilidad nos permite diferenciar el gnero Klebsiella (-) de las restantes que suelen ser movilidad (+). En estas condiciones, las bacterias mviles producirn un enturbiamiento homogneo del medio debido a la distribucin aleatoria de los microorganismos. Por el contrario, las bacterias inmviles permanecern en la misma lnea de la picadura en que se sembraron. Hay una caracterstica dentro de las pruebas bioqumicas que nos permiten diferenciar la especie (oxytoca de pneumoniae). El indol, al igual que Proteus vulgaris y mirabilis, el indol tambin me permite poder diferenciar, obviamente teniendo una bioqumica para Klebsiella, es decir, inmvil, (-), TSI (A/A), pero principalmente inmvil. Las especies de Klebsiella se pueden diferenciar de forma manual con el test de Rojo Metil, que para ozaenae es positivo. Los microorganismos que producen menos ureasa, como ciertas especies de Klebsiella, pueden ser evaluados con agar urea Christensen. Para muchas de estas especies,

una medio alcalino, lo que indica que son enterobacterias que fermentan nicamente la glucosa. Ademas, ambas bacterias presentaron un ennegrecimiento en el medio lo cual indica que son bacterias que producen cido sulfhdrico. En el caso de la prueba de lisina para el Proteus dio negativa y como es una bacteria que es fermenta los azucares pasara de un medio alcalino a uno acido. Para la Salmonella se observa una precipitacin de color negra que indica una produccin de H2S. En la prueba de citrato de simons para el Proteus dio positivo lo que significa que es una bacteria que extrae nitrgeno y produce amonio alcalinizando el medio de cultivo mientras que la Salmonella dio negativa lo que significa que no lo hace. Para la prueba de urea, el Proteus salio positivo mientras que la Salmonella no, lo que significa que el Proteus hidroliza la urea del medio liberando amonio y CO2 mientras que la Salmonella no. Para la prueba de movilidad tanto el Proteus y la Salmonella dieron positivos, como se observa en las figuras, ambos presentan turbidez negras que se deben a los flagelos presentes en ellas y que son los responsables de la movilidad de ambas enterobacterias. En la prueba de indol tanto para la bacteria Salmonella como para Proteus dio negativa puesto que en ninguna se present un color rojo y esto significa que estas bacterias no poseen la enzima triptofanasa por lo cual no son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano.

En la prueba de reaccin de rojo de etilo tanto para la Salmonella como para el Proteus dio positiva, lo que significa que utilizan la glucosa con gran formacin de cido de forma que el pH desciende a menos de 4.4 lo que genera el color rojo. En la reaccin de Vogues tanto para Salmonella como para el Proteus dio negativo lo que significa que estos microorganismos no forman acetona-acetilcarbinol-2,3. CONCLUSIONES. La prueba de ornitina descarboxilasa es ms til para diferenciar algunas especies de klebsiella (la mayora de las especies son negativas) de las especies de Entobacter (la mayora de las cepas son positivas) A diferencia de la mayora Enterobacterias, no son mviles. de las

La espuma que se producen en el agua contaminada son causas por microorganismos coliformes, los cuales al reaccionar con diferentes antibiticos o productos qumicos (condiciones desfavorables), desarrollan formas filamentosas largas, gracias a la rica presencia de cpsulas grandes de polisacridos. La confirmacin que demuestra que una colonia pertenece a la especie E.coli, que consiste en someter las cepas a diferentes pruebas bioqumicas como la de indol, nos dice que si la colonia aislada es negativa a esta prueba, no se le considera E. coli y, por tanto, se descarta.

BIBLIOGRAFIA. Ahmed E. Yousef, Carolyn Carlstrom. Microbiologa de los alimentos-manual de laboratorio. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza, 2006. Martnez NE, Prez J, Rodrguez M. Bacillus cereus. Torres Vitela, Guadalajara, Jalisco: Universidad de Guadalajara; 2002 Winn H., Allen, janda, Koneman, Procop, Schreckberger, Wodds. Diagnostico Microbiologico - Texto y Atlas de color. Editorial Medica Panamericana. 6ta edicin. Espaa. 2008.