TRANSCRIO

Fluxo da informao gentica: DNA RNA RNA protena

DNA

PROTENA
Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-4a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-4b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-4c Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-5 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

O RNA pode dobrar-se em estruturas especficas

poro de um ntron do grupo I

Figure 6-6 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

TRANSCRIO Importantes diferenas entre Procarioto e Eucarioto

Principais classes de RNA

rRNA tRNA mRNA Outros pequenos RNAs - diversas funes celulares

RNA POLIMERASE

Table 6-1 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Anlise do RNA total de Pichia pastoris atravs de eletroforese em gel de agarose corado com brometo de etdeo Glicerol Glicose
rRNA maior rRNA menor

As clulas de Pichia pastoris foram crescidas em meio mnimo contendo glicose ou glicerol.

E. coli rRNA maior (23S; 3,7 kb) rRNA menor (16S; 1,6 kb) rRNA 5S; 120 nucleotdeos

Transcrio X Replicao
Aspectos Comuns: Polaridade 5 3; Necessidade de um molde; Aspectos Diferenciais: No requer primer (iniciador); Apenas um segmento de DNA Transcrito; Uma das fitas de DNA serve como molde; molde

A RNA polimerase copia uma das fitas do DNA em RNA

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

Fita senso ou codante: sequncia idntica a do mRNA (T U) Fita antisenso ou molde: sequncia complementar a do mRNA

Figure 6-7 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-13 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Direes da transcrio ao longo de um curto fragmento do cromossomo bacteriano

Figure 6-14 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

O DNA transcrito pela enzima RNA Polimerase (RNA Pol)

Figure 6-8a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Estrutura da RNA Polimerase bacteriana

Figure 6-8b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Transcrio de dois genes conforme observado por Microscopia eletrnica

Muitas molculas de RNA Pol so observadas como uma srie de pontos ao longo do DNA com os transcritos recm-sintetizados mostrados como filamentos delgados qual a direo da transcrio nesta figura: esquerda para a direita ou direita para a esquerda ???
Figure 6-9 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

O ciclo de transcrio de uma RNA Pol bacteriana

bactrias Todos os RNAs so transcritos por um nico tipo de RNA Pol

Figure 6-11 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

RNA polimerase de E. coli

Estrutura da RNA Polimerase de E. coli (holoenzima)

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

FILME RNA NASCENTE

Fases do ciclo de transcrio holoenzima e reconhecimento do promotor

Figure 6-11 (part 1 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

A RNA Pol desenovela o DNA

Figure 6-11 (part 2 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

esta fase inicial relativamente ineficiente aps a sntese de 10 nucleotdeos, a interao da RNA Pol com o promotor desfeita dissociao do fator elongao Incio da transcrio

Figure 6-11 (part 3 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

fase de elongao: alta processividade

Figure 6-11 (part 4 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-11 (part 5 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

alta processividade na fase de elongao a RNA Pol deixa o DNA e libera o RNA sintetizado apenas quando encontra um sinal de terminao

Figure 6-11 (part 6 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Em bactrias, os sinais de terminao so codificados no DNA

Figure 6-11 (part 7 of 7) Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Table 6-2 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Assim como a DNA pol, a RNA pol sintetiza a fita de RNA, adicionando NMP extremidade 3' OH livre da cadeia nascente. (NMP)n + NTP (NMP)n+1 + PPi (PPi 2 Pi)

As 3 Etapas da Transcrio (procariotos):

Iniciao: ocorre o reconhecimento da regio promotora o pela RNA polimerase e formao do complexo aberto; Elongao: ocorre a sntese propriamente dita com a o incorporao de NMPs e aparecimento da cadeia nascente; Terminao: ocorre quando a RNA polimerase encontra o uma regio de terminao. A cadeia nascente liberada e o complexo se desfaz.

TRANSCRIO PELA RNA POLIMERASE DE E. coli

Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers

A transcrio e a traduo em procariotos so processos acoplados

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

O mRNA traduzido enquanto ainda est sendo transcrito. A regulao da expresso do operon triptofano pelo mecanismo de atenuao requer o acoplamento destes dois processos.

Um promotor bacteriano tpico apresenta 2 motivos de sequncia conservados: as regies -35 e -10 a sntese do RNA ocorre a partir do ponto de iniciao

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

sequncias consensuais sequncia -10: T80A95T45A60A50T96 sequncia -35: T82T84G78A65C54A45

Figure 6-12a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Figure 6-12b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

FILME FATOR SIGMA

Diferentes fatores de E. coli reconhecem promotores com diferentes sequncias consensuais (sua massa indicada no nome do fator)

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

Promotores tpicos de E. coli reconhecidos pela holoenzima RNA Polimerase contendo 70

Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3nd edition, Worth Publishers.

As 3 Etapas da Transcrio:
Iniciao: ocorre o reconhecimento da regio promotora o pela RNA polimerase e formao do complexo aberto; Elongao: ocorre a sntese propriamente dita com a o incorporao de NMPs e aparecimento da cadeia nascente; Terminao: ocorre quando a RNA polimerase encontra o uma regio de terminao. A cadeia nascente liberada e o complexo se desfaz.

Etapas na iniciao da Transcrio pela RNA Polimerase de E. coli

recapitulando

Adaptado de Nelson, D. and Cox, M., M. (2000). Lehninger Principles of Biochemistry, 3 nd edition, Worth Publishers.

recapitulando

recapitulando

recapitulando

Elongao: Nesta etapa, ocorre a polimerizao propriamente dita. A fita nascente de RNA deixa o stio cataltico enquanto a bolha de transcrio avana por sobre o DNA.

recapitulando

recapitulando

As 3 Etapas da Transcrio:
Iniciao: ocorre o reconhecimento da regio promotora o pela RNA polimerase e formao do complexo aberto; Elongao: ocorre a sntese propriamente dita com a o incorporao de NMPs e aparecimento da cadeia nascente; Terminao: ocorre quando a RNA polimerase encontra o uma regio de terminao. A cadeia nascente liberada e o complexo se desfaz.

Terminadores intrnsecos incluem palindrmicas que formam grampos

regies

Os terminadores intrnsecos apresentam 2 caractersticas essenciais: um grampo na estrutura secundria (rico em GC) e uma sequncia de cerca de 6 U

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

Ao do fator r
A RNA polimerase transcreve o DNA R liga-se ao stio de reconhecimento no RNA

R move-se ao longo do RNA seguindo a RNA polimerase A RNA polimerase faz uma pausa no terminador e alcanada por R R desenrola o hbrido RNA-DNA na bolha de transcrio

Terminao: a RNA polimerase, R e o RNA so liberados

Adaptado de Lewin, B. (2000) Genes VII/Benjamin Lewin; trad. Henriue Ferreira ... [et al.]. - Porto Alegre: Artmed Editora, 2001.

TERMINAO
recapitulando