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Respostaimunolgicaadquiridahumoral

humoral:activaodoslinfcitosB,asuaproliferaoe diferenciaoemplasmcitos secretoresdeanticorpos,e emlinfcitosBdememria

doistiposderespostahumoral: a)independentedoslinfcitosToudotimo(TI) b)dependentedoslinfcitosToudotimo(TD)

Respostaimunolgicaadquiridahumoral

doistiposderespostasTI: a)TI1:desencadeadasporantignios capazesdeativao policlonal doslinfcitosB

b)TI2:desencadeadasporantignioscomestrutura altamenterepetitiva (ex:polissacardeosdacpsulabacteriana)

Respostaimunolgicaadquiridahumoral

respostasTD: desencadeadasporantigniosproteicos

dependentesdocontactoentrelinfcitosBe linfcitosTauxiliares(linf.TCD4+)

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
proliferaoediferenciaodelinfcitosBocorreem microambientesespecializadosdosrgolinfides,ondea

hipermutao somtica contribuiparaadiversidadedasIg dos


linfcitosB

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
Principaismecanismosresponsveispeladiversidadedas imunoglobulinas(edaespecificidadedarespostaimunolgica)

a)diversidaderecombinatria b)hipermutao somtica

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
diversidadedasimunoglobulinas

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
diversidaderecombinatria namedulassea genescodificantes (segmentos)daregio variavl:V,DeJ segmentoC:regio constante

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
hipermutao somtica nosrgoslinfides secundrios emlinfcitosBactivadospelosantignios introduzmutaespontuaisnasregiesV,nosgenes dascadeiaslevesepesadasdasIgs,jrearranjados (taxademutao1milhodevezessuperiortaxanormal)

Respostaimunolgicaadquiridahumoral
Teoriadaseleo clonal

MaturaoactivaoediferenciaodoslinfcitosB

MaturaodasclulasB ProliferaoeactivaodasclulasB Respostahumoral Locaisinvivoparaainduodarespostahumoral Centrosgerminativos:induodadiferenciaodasclulasB peloatg Regulaodarespostaimuneefectora

DesenvolvimentodasclulasB
Faseindependentedoantignio Maturao

Rearranjodosgenesparacodificao dasIgs SeleconegativadasclulasBimaturas autoreactivas


Fasedependentedoantignio ActivaoeDiferenciao

ActivaodasclulasBdependentee independentedotimo PapeldasclulasThnasrespostashumorais Switchingdeclasses GeraodeplasmcitoseclulasBmemria Regulaodarespostaimuneefectora

ActivaodoslinfcitosB
Poliespecfica
independentedoslinfcitosT

Especfica
dependentedoslinfcitosT

ACTIVAOPOLICLONAL ACTIVAO POLICLONAL

ACTIVAOESPECFICA ACTIVAO ESPECFICA

Dependedanaturezadoantignio

IndependentedoTimo(TI)
Mitognios (activadores ( activadores policlonais) Ex:compon. p.bacterianas (LPS) Ausnciadeparticipao directadelinfcitosTh

DependentedoTimo(TD)
Protenas solveis

ContactodirectocomlinfcitosTh

PapeldasclulasThnasrespostasimuneshumorais

Sinal1:

Endocitoseeprocessa/o doatg expressodemolculas MHCIIeB7


Reconheci/odopptidopela clTh: InteracoclB:Th

Formaodoconjugado:
InteracoCD40CD40L
Sinal2

Produodecitocinas pelasclulasTh

Caractersticasdarespostaimunehumoralprimriaesecundria

Respostaimuneapresenta2fases:

Faselag :Selecoclonal;Expansoclonal; Diferenciao PlasmcitosClulasBmemria

Faselogartmica: Caracterizadap/: dosnveisdeatcnosoro (atingeummximo) Plateau(tempovarivel)

Locaisinvivo ondeocorreinduodarespostahumoral Localizaodoatg:

Tecidoscomdrenagemlinftica Correntesangunea
Gnglioslinfticos

Gnglioslinfticos

Bao

Vasosaferentes:entradadoatg(livre,imunocomplexooucluladendrtica) Paracortex(reg.ricaemclulasT,macrfagoscldend.interdigitantes) :
ActivaoinicialdasclulasBeclulasTh 1 ActivaodasclulasThesuaproliferao 2 MigraodeclulasBnaivedocortexparaparacortex 3 Reconheci/o,processamentoeapresentaodoatgsclulasTh 4 FormaodoconjugadoclB:clT;activao,proliferaoediferenciao dasclulasBemplasmcitossecretoresdeIgMeIgG Maioriadosatcproduzidosnarespprimriaprovenientesdoparacortex

Papeldascitocinasnaproliferaoediferenciaodas clulasBactivadas

Anticorpos
ProduzidosporlinfcitosBactivados plasmcitos
SubstnciaA Substncia A

Reagemespecificamentecomsubstncia queinduziuasuaproduo(invitro) i d i d (i it )

Produodeanticorpos

SubstnciaAumimunognio

Classesesubclassesdasimunoglobulinas(Igs)Humanas

Estruturageralesquemticadasimunoglobulinas
RegiesHipervariveis(46aacada) (CDRs complementarydeterminingregions) Cadeiapesada ,,, ou
Regio dobradia

Cadeialeve ou

Fab

Regio varivel

Fc

Regio i constante

IgG,IgAeIgD cadeiaspesadas(H)com1domniovarivel(VH)e3constantes(CH) IgG IgA e IgD cadeias pesadas (H) com 1 domnio varivel (VH) e 3 constantes (CH) IgMeIgE cadeiaspesadas(H)com1domniovarivel(VH)e4constantes(CH)

DigestoenzimticadeImunoglobulinas

ContribuionoconhecimentodaestruradasIgs C ib i h i d d I

F(ab)2 Capacidadedeligare precipitarumatg i it t (divalente)

Fab Capacidadedeligaraumantignio

RepresentaoesquemticadeumaIg
Domniosvariveis,regieshipervariveisestiodeligaoaoantignio

Variabilidadeemresduosdeaanosdomniosvariveisdas cadeiaslevesepesadasdasIgs regieshipervariveis

Domniovariveldacadeiapesada(VH)

Domniovariveldacadeialeve(VL)

regieshipervariveis(CDRs) constitudaspor4a6aminocidos(aas) Interagempredominantementecomoseptopesoudeterminantesantignicos

Imunoglobulinas podemaparecersobaforma:

IgG

IgD

IgE

Monomricas

IgA

IgM

Dimricas

Pentamricas

Formaspolimricas SubunidadesunidasporligaesdissulfuretoecadeiaJ

SubclassesdaIgGhumanas

Cadeiaspesadas unidasporligaesdissulfureto,sendoonmerodeligaes varivelparaasdiferentessubclasses


NmerodeligaesdissulfuretoentreascadeiaspesadasdasIgsvariadeclasseparaclasse Nmero de ligaes dissulfureto entre as cadeias pesadas das Igs varia de classe para classe IgE noapresentaligaesdissulfureto

InteracesAntignio Anticorpo
Complexoatg atc
Estabilizadopor interacesnocovalentes Estabilizado por interaces no covalentes
ligaesdehidrognio ligaesinicas i t interaceshidrofbicas hid fbi interacesdeVanderwaals

Afinidade
deumanticorpo

Especificidadedasinteraces

Desenvolvimentodeumavariedadedeensaiosimunolgicos Diagnsticoe/oumonitorizao dedoenas Estudoe/oumonitorizaode respostasimunolgicas

Identificaodeantignioscominteressebiolgicoemdico

Mudanasconformacionaisinduzidaspelaligaodoantignio

Aproximaodoantignioeanticorpo podeinduziralteraesconformacionais: doantignioedoanticorpo doanticorpo do anticorpo doantignio

InteracesAntignio Anticorpo
eptope Afinidade

Foradetodasasinteracesnocovalentesentreum Fora de todas as interaces no covalentes entre um eptopeeostiodeligaoaoantigniodoanticorpo


Alta Afinidade Avidez Baixa Afinidade

Foratotaldasmltiplasinteracesentreumatcmultivalenteeumantignio Fora total das mltiplas interaces entre um atc multivalente e um antignio
Aumentacom:

onmerodeepitopesrepetitivos presentesnumantignio

avalnciadoanticorpo (IgMdecavalente;IgGbivalente) (I M d l I G bi l )

Alta Avidez

Baixa Avidez

Exemplodepossveisresultadosserolgicosparaa p p g p toxoplasmosenocasoespecficodegravidez

Reactividadecruzada
Doisantigniosdiferentesapresentamumeptopeidnticooumuitosemelhante eptopessoreconhecidospelomesmoanticorpo h id l i
AntignioA AntignioB

Ex:gruposanguneoABO. Comoqueumindivduodo gruposanguneoOapresenta O t anticorposantiAeantiBsem nuncatertidocontactocomas nunca ter tido contacto com as glicoprotenasAeB?
Antigniosmicrobianosdafloraintestinalinduzemrespostaimunolgicacomproduode anticorposqueapresentamreactividadecruzadacomasglicoprotenasAeB.

Reactividadecruzada
Componentesdarespostahumoral(atc)contraalgunsvrusebactrias reagemcomcomponentesdohospedeiro(reactividadecruzada)
AtgMdaparedecelulardoStreptococcuspyogenes Atg M da parede celular do Streptococcus pyogenes Produodeatcquereagemcomprotenasdomsculoesquelticoemiocrdio q g p q doHomem Lesesnocoraoerins Leses no corao e rins

VacinadeJennerbaseadanareactividadecruzada VrusVaccinia(causadordavarolabovina)expressaeptopessemelhantes V V i i ( d d l b i ) t lh t aovrusdavarolaHumana

Anticorpos(atc)policlonaisversus monoclonais

Respostaimunitriacomproduodeatcpoliclonais:
Promovefagocitoseeeliminaodoatgmediadapelocomplementoinvivo imunoproteco Heterogeneidadedeatcreduzaeficciaemdiversasutilizaesinvitro g

Atcmonoclonais
(provenientesdeumnicoclonedeclulas;especficoparaumdadoeptope)

Grandeaplicabilidadeeminvestigao,diagnsticoeterapia

Produodeanticorpos(atc)policlonais
Utilizaodemamferosdegrandeoumdioporte (cavalo,coelho,porco)

ImunizaodoanimalcomsubstnciaA (23vezesemintervalosde15dias)
(2a3semanas)

Imunizaopodeserrealizada

Sangramentodoanimal S t d i l

comasubst.Aconjuntamente comumadjuvantequeinduza aproduodedeterminado istipodeimunoglobulinas. i i d i l b li

SorocontmttulodeanticorposantiAelevado
(misturadeanticorposdirigidosparadiferentes eptopespresentesnoantignioA) eptopes presentes no antignio A)

Aplicaoemensaioslaboratoriais: Aplicao em ensaios laboratoriais:

Aumentasensibilidadedomtodo Aumenta sensibilidade do mtodo Possibilidadedereacescruzadas

Produodeanticorposmonoclonais(mAb)
(KhlereMilstein,1975)

Formaoeselecodeclulashbridas(hibridomas)

Purificaodeanticorposmonoclonaisapartirdeascites
Ascite Remoodoslpidos(isopropanol+teretlico) Filtrao(filtrode5m) Purificaoporcromatografiadeafinidade(protenaG) P ifi t fi d fi id d ( t G) Dilise(tampofosfatopH7,4) Dilise (tampo fosfato pH 7 4) Quantificao(mtododeLowry) y Filtrao(filtrode5m;estril) Armazenamentoa70Cemalquotas

Produodeanticorposmonoclonaishumanos
Dificuldadestcnicas I Obtenodeclulasdemielomahumano crescimentoimortal crescimentoemmeioHAT i i produodeatc sobrevivnciainvitro napresenadosatcsecretados

II ObtenodeclulasBhumanasactivadasespecficamente I I Obteno de clulas B humanas activadas especficamente Infecoinvitro dasclulasBcomEpsteinBarr(EBV)napresenadoatg Capacidadeimortal,produodeatcmuitobaixa TransplantedeclulasdoSIhumanasemratinhosSCID T l t d l l d SI h ti h SCID RatinhosSCIDHumanizados

RatinhosSCIDHumanizados RatinhoSCID Nodesenvolve d l clulasBeclulasTmaturas Imunologica/comprometido Norejeitatecidohumanotransplantado j p Linfcitosimaturosmigramparaotecido implantadoondematuramemclsTeB implantado onde maturam em cls T e B Exposiodeatgderatinhodurante a a u ao dos amaturaodoslinfcitoshumanos c os u a os Linfcitosreconhecematgderatinho comopp como pp
Contmlinfcitos humanosimaturos

Modeloanimalptimop/aestudarlinfcitoshumanoseaSIDA

UtilidadedosatcmonoclonaisnaClnica
Laboratorial
mAbssimplesouacopladosaenzimas,biotina, mAbs simples ou acoplados a enzimas, biotina, fluorocromos,estreptavidina,elem/osradioactivos
Diagnstico Detecodeagentespatognicos Deteco de agentes patognicos Gravidez Teordedrogasehormonasnosangue Detecodeantigniostumorais

Imagem g

mAbsacopladosaelementosradioactivos b l l
Detecodeatgtumorais detecodotumores 131I localizaodemetastasesdetumoresmamrios l li d d i

Terapia

mAbssimplesouacopladosatoxinasouelementosradioactivos mAbs simples ou acoplados a toxinas ou elementos radioactivos


Doenasautoimunes,cancro(mama,linfoma..)