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Caracterizao de carboidratos: teste de Molisch

1. Objetivos
- reconhecer os carboidratos atravs da pesquisa das funes orgnicas presentes em suas molculas e das caractersticas por elas proporcionadas.

2. Princpios tericos
Como vimos na Introduo aos Carboidratos, os monossacardeos mais importantes so os formados por cinco ou seis tomos de carbono (pentoses e hexoses, respectivamente). Por serem molculas muito ricas em grupamentos hidroxila (-OH), os monossacardeos podem ser facilmente desidratados por ao de cidos fortes concentrados, como o cido sulfrico (H2SO4). O cido rompe facilmente as ligaes glicosdicas presentes em molculas de polissacardeos, quebrando-os e fornecendo seus monossacardeos. Esses, por sua vez, so desidratados e podemos ter como produto: o furfural, quando o monossacardeo desidratado for uma pentose, e o hidroximetilfurfural (HMF), quando for uma hexose. Tanto o furfural quanto o HMF so substncias incolores, impedindo que a reao seja visualizada.Para resolver esse problema, adiciona-se um composto fenlico ao meio ( alfa-naftol, conhecido como reativo de Molisch). O fenol reage como os produtos incolores, e provoca o aparecimento de um anel de colorao lils.

3. Procedimento Experimental 3.1. Material


a) Reagentes e solues
soluo soluo de de SACAROSE glicose destilada Molisch **

b)

Vidraria

gua reativo de - cido sulfrico concentrado

03 tubos de pipetas de pipeta de 1 - conta-gotas ou pipeta Pasteur

** Preparo do reativo de Molisch: 5,0g de alfa-naftol em 100 ml de cido actico (CH3COOH) concentrado (95%)

3.2. Procedimento
1. Prepare a seguinte bateria de tubos, identificando-os: (1) 2 mL de gua destilada (2) 2 mL da soluo de glicose (3) 2 mL da soluo de SACAROSE 2. a cada um dos tubos adicionar 6 gotas do de Molisch e agitar; 3. muito lentamente, adicionar 1 mL de H2SO4 concentrado a cada tubo, e agitar levemente, cuidando para que no haja mistura desse com o lquido do interior do tubo; 4. observar e descrever o resultado. reativo O surgimento de um anel de colorao lils estvel indica que houve formao de furfurais, revelando a presena de acares na amostra.

Diferenciao de aldose e cetose: reao de Seliwanoff

1. Objetivos
- reconhecer e classificar os carboidratos como aldoses e cetoses.

2. Princpios tericos

Essa prtica segue os mesmos princpios tericos que embasam a reao de Molisch, onde h formao de furfural e hidroximetilfurfural (HMF). Como vimos, esses dois produtos, isoladamente, so incolores. Assim, adiciona-se um composto fenlico ao meio para que seja desenvolvida colorao visvel (nesse caso, vermelha). A reao de Seliwanoff s diferencia-se da reao de Molisch nos reagentes utilizados: o cido que causar a desidratao do carboidrato o cido clordrico (HCl) e o fenol que reage como o furfural e HMF o resorcinol. Esse teste permite diferenciar aldoses de cetoses porque a reao com a cetose mais rpida e mais intensa. Isso porque a formao do furfural mais fcil que a formao do hidroximetilfurfural.

3. Procedimento Experimental 3.1. Material


a) Reagentes e solues
soluo soluo soluo gua - reagente de Seliwanoff * de de de frutose glicose sacarose destilada

b)

Vidraria

04 tubos conta-gotas ou - pipeta de 5 mL

de pipeta

* Preparo do reagente de Seliwanoff: dissolver 0,025 g de resorcinol em 50 mL de cido clordrico (HCl) concentrado. Completar o volume para 100 mL.

3.2. Procedimento
1. Enumere adicionando: (1) 3ml destilada (2) 3ml de (3) 3ml de (4) 3ml de sacarose quatro tubos de ensaio,

de Seliwanoff + 5 gotas de gua de Seliwanoff + 5 gotas da soluo frutose de Seliwanoff + 5 gotas da soluo glicose de Seliwanoff + 5 gotas da soluo

2. aquecer todos os tubos em banho-maria fervente por um minuto e observar a colorao desenvolvida; 3. ferver por mais 5 minutos e anotar a colorao desenvolvida; 4. compare os resultados. A reao positiva caracterizada pelo aparecimento de colorao avermelhada, que indica a formao do complexo entre furfural ou HMF com o resorcinol e, conseqentemente, indica presena de aldoses e cetoses. Como foi dito, a reao para cetoses mais rpida e mais intensa do que para aldoses.

Pesquisa de acares redutores: prova de Benedict


1. Objetivos
- conhecer e identificar o poder redutor de alguns acares.

2. Princpios tericos
Se observamos com mais ateno as molculas apresntadas no texto "Introduo aos carboidratos", veremos que alguns carboidratos possuem um grupamento -OH (hidroxila) livre no carbono 1 de suas molculas, enquanto outros no.

GLICOSE

RIBOSE

SACAROSE Observa-se que os acares que apresentam a hidroxila livre no C-1 so bons agentes redutores. Por esse motivo a extremidade que contm o -OH passa a ser chamada extremidade redutora e o acar, de ACAR REDUTOR. A capacidade que esses compostos apresentam de reduzir ons metlicos em solues alcalinas um bom mtodo de identificao desses compostos. A reao abaixo esquematiza o princpio da prova de Benedict, baseada na reduo de ons Cu2+ a Cu+, com formao de um precipitado vermelho ou amarelo:

* OBS: a reao feita em meio bsico porque, nessa condio, a porcentagem de enediis maior. Nessa reao , o aparecimento de um precipitado de colorao vermelho-tijolo indica que os ons Cu2+ do reagente de Benedict foram reduzidos a Cu+, indicando a presena de um acar redutor.

3. Procedimento Experimental 3.1. Material


a) Reagentes e solues
soluo de amido 1% * soluo de glicose 1% soluo de sacarose 1% soluo de frutose 1% soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 6N cido sulfrico (H2SO4) concentrado gua destilada reativo de Benedict **

b) Vidraria e instrumental
- 05 tubos de ensaio - conta-gotas ou pipeta Pasteur - pipetas de 1 e 2 mL

* Como o amido de difcil dissoluo, preparar a soluo da seguinte maneira: misturar 1 g de amido com 10 ml de gua. Derramar a pasta em um recipiente que contenha 100 ml de gua fervente. Cessar a ebulio e deixar esfriar e sedimentar. Separar a parte sobrenadante (sem grumos) por decantao. A soluo ganha maior estabilidade se for adicionada de 1g de cido saliclico (1%). ** Preparo do reativo de Benedict: inicialmente, devem ser preparadas duas solues, em separado, a saber: Soluo A - 173g de citrato de sdio (Na3C6H5O7.2H2O)*** - 90g de carbonato de sdio (Na2CO3) - 600 ml de gua destilada quente (~80C) *** O on Cu2+ tambm reage com o meio alcalino, segundo o esquema abaixo:

Para evitar que essa reao acontea, mascarando o teste para acares redutores, adicionado o citrato de sdio, que mantm o Cu2+ em soluo, atravs da formao de um complexo. Soluo B - soluo 17,3% de sulfato de cobre (CuSO4) em gua destilada. Dissolver por agitao. Para preparar o regente de Benedict, coloque a soluo A em um balo volumtrico de 1000ml; em seguida, adicione a soluo B sob agitao constante e complete o volume com gua destilada.