BIOELETROGNESE

Laboratrio de Biofsica de Membranas Prof. Dr. Wamberto A. Varanda Luiz Artur P. Chaves Vander Baptista

Todas as clulas so envolvidas por uma membrana de 7 a 10 nm de espessura que separa dois meios: o intra e o extracelular. A membrana celular apresenta uma estrutura geral comum, uma bicamada lipdica com protenas inseridas. Essa bicamada lipdica constituda principalmente por fosfolipdios e atua como barreira relativamente impermevel a passagem da maioria das molculas hidrossolveis. Essa propriedade de barreira molculas

hidrossolveis funo da estrutura qumica dos lipdios: um esqueleto essencialmente hidrocarbnico conferindo um carter apolar a essa regio da molcula e uma extremidade polar, onde predominam grupamentos com carga, conferindo um carter anfiptico a esses lipdios de membrana (figura 1). Como conseqncia dessa estrutura, quando lipdios so colocados em gua, tendem a se estruturar, espontaneamente, em bicamadas de modo que suas caudas hidrofbicas ficam voltadas para o interior e sua poro hidroflica fique exposta gua, minimizando a interao das cadeias hidrocarbnicas com as molculas de gua. As protenas, que esto inseridas na bicamada lipdica (figura 2), associam-se a esta de vrios modos podendo ser classificadas em protenas perifricas e protenas integrais (transmembrana). As protenas transmembrana so responsveis pela permeabilidade da membrana plasmtica a diferentes ons (K+, Na+, Cl-, Ca++ ,etc...).

Figura 1. Fosfolipdio de membrana (Mello Aires, 1999).

Figura 2. Tipos de protena de membrana, classificados de acordo com a sua posio (Mello Aires, 1999). Esta arquitetura fundamental porque permite clula manter diferentes concentraes inicas entre os meios intra e extracelular. Isto possvel graas permeabilidade seletiva e transporte ativo atravs da membrana, fundamentais na gnese do movimento transmembrana de ons e, como veremos adiante, na produo e transmisso de sinais eltricos. Os solutos mais importantes para nossa discusso so os ons K+, Na+ e Cl-, sendo o K+ mais concentrado no meio intracelular e Na+ e Cl- mais concentrados no meio extracelular. A tabela 1 mostra a distribuio desses ons em neurnios gigantes de lula, uma preparao muito usada no estudo da bioeletrognese.

Tabela 1. Distribuio dos principais ons atravs da membrana de axnio gigante de lula. Fluido extracelular Potencial de equilbrio on Citoplasma (mM) (mV) (Mm) K+ 400 20 -75 Na+ 50 440 +55 Cl52 560 -60 A (ons orgnicos) 385 -----

As protenas integrais de membrana, que permitem a passagem de ons, so estruturas especializadas e formam os chamados canais inicos. O estudo desses canais mostrou que os mesmos apresentam algumas propriedades em comum: 1 condutncia, 2 reconhecem e selecionam ons especficos e 3 abrem e fecham em resposta a sinais especficos eltricos, qumicos e mecnicos (canais controlados ou gated). Alguns canais inicos

de membrana abrem-se e fecham-se independentemente de estmulos (canais passivos ou nongated) e so importantes para a gnese e manuteno do potencial de repouso da clula. O potencial de repouso resultado da separao de cargas (ons) atravs da membrana. O excesso de cargas negativas na superfcie interna da membrana e positivas na superfcie externa representam uma frao muito pequena do total de ons dentro e fora da clula (figura 3). Devido a essa densidade de carga diferente nos dois lados, a membrana pode ser comparada a um capacitor, isto , dois materiais condutores (meios intra e extracelular) separados por um material isolante (a bicamada lipdica). Essa separao de cargas gera uma diferena de potencial eltrico ou voltagem, chamada potencial de membrana de repouso (Vm). O termo potencial de repouso aplicase somente ao potencial atravs da membrana quando a clula est em repouso enquanto o termo potencial de membrana mais geral e refere-se a diferena de potencial eltrico em qualquer momento, no repouso ou durante o potencial de ao.

Vm = Vint Vext
Por conveno o potencial no extracelular igual a zero. Assim, como o intracelular negativo o potencial de repouso em neurnios cerca de 60 a 70 mV.

Figura 3. O potencial de membrana resultado da separao de cargas somente na superfcie da membrana (Kandel, 1991).

A permeabilidade para K+ e Na+, no repouso, determinada pela proporo dos canais passivos abertos para cada um desses ons presentes na membrana. Vamos imaginar uma clula hipottica cuja membrana seja permevel somente ao on K+. Como o K+ est mais concentrado dentro da clula, esse on tende a sair por difuso seguindo seu gradiente de concentrao (gradiente qumico), resultando na sada de ctions do interior da clula. O gradiente qumico do K+ gera um gradiente eltrico (separao de cargas) atravs da membrana e quanto maior o efluxo de K+, maior ser esse gradiente eltrico. Em conseqncia disso, aumenta tambm a fora que tende a restringir a sada de K+. Essa fora de origem eltrica e surge da atrao que as cargas negativas do lado interno da membrana exercem sobre as cargas positivas. Esse on sai da clula at que a fora difusional que o empurra para fora se iguala fora eltrica que o atrai. Podemos dizer que a difuso ou o processo de sada de K+ auto-limitante pois cria uma outra fora (atrao eletrosttica) que o limita e tambm que esse processo gera uma diferena de potencial eltrico (figura 4).

Figura 4. O fluxo de K+ atravs da membrana determinado pelo gradiente de concentrao e potencial eltrico atravs da membrana (Kandel, 1991). A Em uma clula permevel somente ao K+ o potencial de repouso resulta do efluxo de K+ seguindo seu gradiente concentrao. B O efluxo de K+ cria um excesso de cargas positivas fora da clula e deixa o interior negativo. Este gradiente eltrico tende a diminuir o efluxo de K+ e o equilbrio atingido quando as foras qumicas e eltricas so iguais e opostas.

O potencial de membrana no qual o on K+ est em equilbrio eletroqumico pode ser calculado atravs da equao de Nernst:
EK = RT [K + ]ext ln zF [K + ]int

onde EK o potencial de equilbrio para o on K+, R a constante dos gases, T a temperatura em graus Kelvin, z a valncia do on, F a constante de Faraday e [K+]ext e [K+]int so as concentraes de K+ fora e dentro da clula
zF

respectivamente. Para o on K+, z igual a 1 e a 25oC RT

igual a 26 mV. A

constante para converter logaritmo natural para decimal 2,3. Assim:

E K = 26 2,3 log 10 [K + ] ext [K ] int
+

Essa equao pode ser usada para calcular o potencial de equilbrio de qualquer on presente nos dois lados da membrana, desde que conheamos suas concentraes. Tomando-se os dados da tabela I tem-se que o potencial de equilbrio do K+ 75 mV, Na+ +55mV e do Cl- 60mV. Geralmente, o potencial de membrana prximo do potencial de Nernst para o on ou ons que so mais permeantes pela membrana, lembrando que a permeabilidade para um dado on proporcional ao nmero de canais abertos ao mesmo. Se inserirmos um microeletrodo na clula imaginada acima, com membrana permevel somente ao on K+, este medir um potencial de membrana igual ao potencial de equilbrio do on K+. Um exemplo real desse modelo ocorre em clulas da glia, onde a membrana permevel quase que exclusivamente ao K+. Vamos considerar o que ir acontecer se adicionarmos, na clula hipottica do exemplo acima, alguns poucos canais para Na+, dessa maneira, conferindo membrana uma pequena permeabilidade a esse on. Os ons Na+ esto mais concentrados no fludo extracelular que no citoplasma e o interior da clula est negativo. Assim, tanto o gradiente qumico como o gradiente eltrico favorece o influxo de Na+. Embora a permeabilidade ao Na+ seja muito baixa ela permite que esse on entre na clula, seguindo seu gradiente eletroqumico. Esse pequeno influxo de Na+ diminui a densidade de cargas negativas no lado interno da membrana, tirando o K+ de seu potencial de equilbrio (EK). Quanto mais o Vm diverge do EK (pela maior entrada de Na+),

maior a fora eletroqumica que dirige o K+ para fora da clula e conseqentemente maior o efluxo de K+. A partir de um ponto, o Vm alcana seu valor de repouso no qual o efluxo de K+ contrabalanado pelo influxo de Na+. Em uma clula real, como no neurnio gigante de lula, o potencial de equilbrio para o on Na+ de +55 mV (tabela 1). Se inserirmos um microeletrodo nessa clula, este medir um potencial de membrana (Vm) de cerca de 60 mV. O potencial de membrana estabelecido atravs do balano entre as permeabilidades aos on Na+ e K+. Nesse exemplo a relao PNa/PK muito baixa, ou seja, a membrana muito mais permevel ao on K+ e dessa maneira o potencial de membrana (-60 mV) estar mais prximo do potencial de equilbrio do on K+ (-75 mV); caso a relao PNa/PK aumente, o potencial de repouso se deslocar em direo ao potencial de equilbrio do on Na+ (+55 mV). Para membrana permeveis a dois ou mais ons usa-se a equao de Goldman, Hodgkin e Katz (GHK) para calcular o potencial de membrana:

Vm = 58 log

PK [K + ]e + PNa [Na+ ]e + PCl [Cl ]i PK [K + ]i + PNa [Na+ ]i + PCl [Cl ]e

onde, PK a permeabilidade ao on K+, PNa a permeabilidade ao on Na+, PCl a permeabilidade ao on Cl- e suas respectivas concentraes nos meios intra e extracelular. O fluxo passivo de K+ (para fora) e Na+ (para dentro) atravs dos canais passivos e conseqente gerao do Vm constante. Apesar disso no ocorre dissipao do gradiente qumico devido a atividade da Na+-K+ ATPase que transloca ons Na+ do intracelular para fora enquanto transporta K+ do extracelular para dentro da clula. Como a bomba move Na+ e K+ contra seus gradientes eletroqumicos, energia necessria para que esse transporte ocorra e ela proveniente da hidrlise do ATP. Outra caracterstica da bomba Na+-K+ ATPase que ela transporta 3 ons Na+ para o extracelular e 2 ons K+ para o intracelular. A resultante um efluxo de cargas positivas que tende a hiperpolarizar levemente o potencial de membrana, ou seja, tornar o Vm um pouco mais negativo do que seria esperado apenas da distribuio passiva de ons. Em relao ao cloreto, sua concentrao maior fora da clula e esse gradiente de concentrao balanceado pelo potencial de membrana, ou seja,

a negatividade interna ope-se ao influxo dos ons Cl

(nion). Assim, o

potencial de membrana em repouso determinado principalmente pela razo de concentrao de K+ e Na+, porque, a concentrao interna de Cl-, sendo baixa, pode mudar para se acomodar a mudanas no potencial de repouso, j que o mesmo encontra-se equilibrado. Podemos dizer que os ons Cl - esto passivamente distribudos atravs da membrana e no havendo bomba de Cl na clula ECl ser igual ao Vm. Como vimos os ons no atravessam a bicamada lipdica, pois esta um pobre condutor de corrente inica, mas cada canal inico atua como um condutor de corrente inica. Quando o on atravessa esse canal ele interage com as paredes do mesmo e a resistncia passagem desse on atravs do canal maior se comparado a um volume equivalente de fluido extracelular. Assim, cada canal atua como um condutor de resistncia R. A condutncia de cada canal, que uma medida de quo eficientemente o canal pode conduzir ons, inversamente proporcional resistncia desse canal e representada por g. g= 1 R
-

Ao ser permeado por ons cada canal inico contribui para a gerao de uma diferena de potencial atravs da membrana. Por exemplo, o on K+ ao se difundir por um canal seletivamente permevel a ele, leva a uma separao de cargas atravs da membrana (cargas positivas acumulam-se fora e negativas dentro) criando ento uma diferena de potencial eltrico. Assim cada canal inico atua como um condutor e como uma bateria (figura 5). Visto que cada canal pode ser representado por uma condutncia (g), ento a corrente (I) que passa atravs dos mesmos pode ser calculada usando a Lei de Ohm:

Figura 5. Cada canal seletivo ao K+ d origem a uma diferena de potencial igual ao potencial de Nernst do K+, podendo ser representado por uma bateria em srie com um condutor (Kandel, 1991).

I = g V
Todos os canais para K+ passivos da membrana podem ser combinados, num condutor nico equivalente (que representa toda a populao desses canais de uma clula) em srie com uma nica bateria equivalente. Devemos considerar que: a condutncia total da membrana dessa clula em repouso ao K+ (gK) proporcional ao nmero da canais para K+ passivos abertos (NK) multiplicado pela condutncia da cada canal (gK).
g K = NK g 'K

Visto que a bicamada lipdica de uma clula pode ser comparada a um capacitor e que os canais inicos podem ser representados por baterias e resistncias, as propriedades funcionais de uma membrana podem ser entendidas atravs do circuito eltrico equivalente mostrado na figura 6.

Figura 6. Circuito eltrico equivalente a um neurnio em repouso (Kandel, 1991).

Quando o neurnio encontra-se no estado de repouso, as correntes de K+ e Na+ (IK e INa) resultantes da difuso passiva dos ons atravs dos canais da membrana so balanceadas pelo transporte ativo pela Na+-K+ ATPase. Desse modo, nesse circuito eltrico a bomba seria o gerador de corrente, ou seja, manteria as baterias inicas carregadas. Cm a capacitncia da clula, pois como vimos, essa possui a habilidade de separar cargas de sinais opostos na sua superfcie. ENa, ECl e EK so os respectivos potenciais de equilbrio para Na+, Cl- e K+ e gNa, gCl e gK suas respectivas condutncias. importante lembrar que o potencial de membrana determinado pelo on (ou ons) com maior condutncia ou permeabilidade.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS: Ver no final do prximo tpico (Potencial de Ao).