Quim. Nova, Vol. 30, No.

2, 268-273, 2007 TEORES DE CORANTES ARTIFICIAIS EM ALIMENTOS DETERMINADOS POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

Artigo

Marcelo Alexandre Prado* e Helena Teixeira Godoy Departamento de Cincia de Alimentos, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Estadual de Campinas, CP 6121, 13083-862 Campinas - SP, Brasil Recebido em 14/7/05; aceito em 25/5/06; publicado na web em 26/9/06

CONTENTS OF SYNTHETIC DYES IN FOODS DETERMINED BY HIGH PERFORMENCE LIQUID CHROMATOGRAPHY. Synthetic dyes are much used in processed foods. HPLC was applied to different types of snacks, such as colored cereals, chocolate confetti, chewing gums and candies for the determination of those additives. In the case of artificially colored breakfast cereals, 71% of the samples exceeded the allowed limits. Regarding the portions recommended for consumption by the makers of two of the samples, the amounts exceeded those allowed by the Brazilian legislation. In the case of chocolate confetti and candies none of the samples showed higher amounts than those allowed. However 37% of the chewing gum samples presented larger contents than the authorized ones, and one sample contained five times more synthetic dyes than allowed. Keywords: synthetic dyes; HPLC; foods.

INTRODUO Enquanto a maioria das empresas do setor de alimentao sofre com a crise econmica, as indstrias de balas, bombons, dropes e gomas de mascar nem chegaram a sentir os efeitos da crise. Ao contrrio, fabricar e vender guloseimas tem engordado, ano aps ano, o faturamento de mais de 100 empresas do ramo1. Com produtos baratos, como as balas avulsas que podem custar apenas alguns centavos, os fabricantes de guloseimas colocam em prtica o velho ditado popular, reunindo milhes de tosto em tosto. Tambm no varejo, trata-se de uma linha lucrativa e indispensvel para os mais de 400 mil revendedores espalhados por todo o pas. O consumo de guloseimas, praticamente, no pesa no bolso, e uma bala muitas vezes substitui a moeda do troco. A caracterstica preo, aliada farta rede de vendas, garante o sucesso do setor. Uma vez que o setor extremamente competitivo, oferecendo 220 marcas diferentes para uma linha, que no ultrapassa 40 tipos de produtos, as empresas lanam mo de diversos artifcios para conquistar o mercado, desde altos investimentos em propaganda, at tornar as guloseimas as mais atrativas possveis, o que justifica a grande utilizao de corantes artificiais para tal finalidade1. O mesmo vem ocorrendo com outros produtos, como bebidas no alcolicas e cereais matinais coloridos. Infelizmente, o consumidor por si s no capaz de controlar a prpria exposio aos corantes e, conseqentemente, no pode avaliar se o benefcio recebido justifica o risco a que est exposto2,3. A manuteno da cor natural do alimento constitui-se em um fator fundamental para o marketing do produto, em face da primeira avaliao do consumidor. Antes do paladar, os alimentos coloridos seduzem as pessoas pela viso. A lgica do consumo desses produtos inicia-se pelos olhos: alimentos coloridos, vistosos, atraentes s podem ser deliciosos. Em geral, a importncia da aparncia do produto para sua aceitabilidade a maior justificativa para o emprego de corantes4. Os estudos sobre os efeitos sade causados pelos corantes artificiais so insuficientes e bastante contraditrios. Diversos autores relatam as reaes adversas que podem causar, como reaes
*e-mail: mprado@fea.unicamp.br

alrgicas5,6, enquanto outros demonstram a ao antitumoral de alguns deles7. Os aditivos so inofensivos sade, desde que se obedea aos percentuais mximos estabelecidos pela ANVISA (Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria) e/ou pelo Codex Alimentarius. Estes estabelecem para cada aditivo uma ingesto diria aceitvel (IDA). Todos os corantes artificiais permitidos pela Legislao Brasileira j possuem valor definido de IDA, embora esses valores estejam sujeitos a alteraes contnuas, dependendo dos resultados de estudos toxicolgicos. O Comit conjunto FAO/OMS de peritos em aditivos alimentares, JECFA (Joint Expert Committee on Food Additives), em nvel internacional, recomenda que cada pas verifique periodicamente o consumo total de cada aditivo, com base em estudos de dieta, para se assegurar que a ingesto total do aditivo no ultrapasse a IDA8,9. CORANTES ARTIFICIAIS PERMITIDOS NO BRASIL permitido no Brasil o uso de onze corantes artificiais, sendo eles Tartrazina (E-102), Amarelo Crepsculo (E-110), Azorrubina (E-122), Amaranto (E123), Ponceau 4R (E-124), Eritrosina (E-127), Vermelho 40 (E-129), Azul Patente V (E-131), Indigotina (E-132), Azul Brilhante (E-133) e Verde Rpido (E143)10. Neste trabalho foram utilizados oito dos onze corantes artificiais permitidos, sendo eles E-102, E-110, E123, E-124, E-127, E129, E-132, E-13310. A regulamentao dos corantes e a necessidade de controle de qualidade do governo sobre as empresas tm forado o desenvolvimento de novas tcnicas analticas capazes de responder no s demanda do nmero de anlises mas, de forma rpida e, principalmente, confivel. Com essa finalidade que, atualmente, vrios mtodos envolvendo a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) esto sendo usados para determinar qualitativa e quantitativamente esse tipo de aditivo11. O presente trabalho teve como objetivo a determinao simultnea dos corantes permitidos no Brasil em vrios tipos de alimentos, atravs de uma metodologia utilizando a CLAE2,3 . A escolha de guloseimas e cereais matinais coloridos para as anlises deve-se, principalmente, ao fato de serem produtos amplamente consumi-

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dos, especialmente pela populao infantil, e por apresentarem corantes artificiais em sua composio. PARTE EXPERIMENTAL Material Foram analisados alguns tipos de guloseimas de vrios sabores, sendo balas, gomas de mascar e confeitos de chocolate coloridos artificialmente e mais trs marcas diferentes de cereais matinais, que contm vrios sabores. Para todas as amostras foram analisados 2 lotes diferentes, identificados pela data de fabricao. As amostras foram preparadas separando-se por cores/sabores. As anlises foram sempre realizadas em duplicata. Antes da tomada da amostra analtica, os alimentos foram homogeneizados. Todos os produtos foram comprados em supermercados da regio de Campinas, SP. Reagentes Os padres de corantes artificiais foram adquiridos da Importadora Brastquio ltda. O metanol, utilizado com grau cromatogrfico ominsolv, e o acetato de amnio foram adquiridos da Merck Brasil. A gua utilizada no preparo das fases mveis e das amostras foi purificada no sistema Milli-Q (Millipore). As fases mveis foram sempre filtradas em filtros Floupore (Millipore HAWP 0013) de 0,5 m de dimetro de poro, e degaseificadas em banho ultra-snico. Equipamento Para anlise foi utilizado cromatgrafo a lquido HP srie 1050, com sistema de bombeamento isocrtico; vlvula injetora tipo Rheodyne, com ala de amostragem de 20 L e detector de arranjo de diodos (DAD) HP srie 1050, acoplado a um software HP Chemstation, que apresenta o recurso de visualizao de at cinco comprimentos de onda diferentes em uma mesma corrida. Foram utilizados os comprimentos de onda de 595 nm para os azuis, 525 nm para os vermelhos e 450 nm para os amarelos. Para separao cromatogrfica utilizou-se uma coluna Spherisorb ODS-2 de 150 mm x 4,6 mm d. i., C18 de 5 m, protegida por uma coluna de guarda Micropore 30 mm x 4,6 mm d.i. C18, de 10 m. Mtodos analticos Pesou-se entre 4 a 9 g de balas, gomas e confeitos de chocolate coloridos (em geral eram tomadas algumas unidades de cada amostra), para a extrao dos corantes. As amostras foram simplesmente dissolvidas em gua quente (40 a 50 C), e o volume ajustado para 50 mL. Em especial, os confeitos de chocolate e gomas foram lavados vrias vezes com gua, para garantir a completa extrao. Para os cereais matinais coloridos pesou-se entre 3 a 5 g de amostra, previamente homogeneizada. As anlises foram realizadas separando-se as amostras por cores/sabores e na poro recomendada para consumo pelo fabricante (30 g). Soluo amoniacal 10% em etanol mostrou-se mais eficiente que a gua para a extrao dos corantes em cereais matinais coloridos. Lavagens sucessivas foram realizadas, at a completa retirada dos corantes. As alquotas retiradas eram unidas e concentradas em roto evaporador (70 C) at um volume final de 50 mL. As amostras tiveram seus volumes ajustados com gua, obtida do sistema de filtrao Milli Q. Os volumes finais das amostras, de poro recomendada, tiveram seus volumes finais ajustados para 250 mL, por se tratar de uma quantidade inicial 10 vezes maior que a normalmente utilizada.

Em todas as amostras, aps o ajuste de volume, era coletada uma frao, e centrifugada a uma rotao de 15.000 rpm por 10 min. Aps a centrifugao, o sobrenadante (cerca de 10 mL) era filtrado em membrana tipo HAWP de 0,5 m (Millipore), e injetado no cromatgrafo. Todas as amostras foram analisadas em duplicata, exceto a poro recomendada de cereais matinais coloridos que foi realizada em quadriplicata, coletando-se a amostragem aleatoriamente do pacote. Cromatografia Para anlise em CLAE foi utilizado um cromatgrafo a lquido HP (Helwett Packard) srie 1050, com sistema de bombeamento isocrtico e vlvula injetora tipo Rheodyne e uma ala de amostragem de 20 L de capacidade. Para separao dos compostos foi utilizada uma coluna cromatogrfica Spherisorb ODS-2, com partculas de 5 m, com dimenses de 150 x 4,6 mm d.i. (SigmaAldrich, USA) protegida por uma coluna de guarda Micropore, C18, 10 m, 30 x 4,6 mm d.i. (Varian). Um detector de arranjo de diodos (DAD) da HP srie 1050, acoplado a um software HP Chemstation, permitiu registrar o cromatograma em trs diferentes comprimentos de onda, durante uma mesma corrida, o que possibilitou a anlise de todos os corantes de forma simultnea. Os corantes foram separados atravs de um sistema de eluio isocrtico. A coluna era condicionada pela passagem de uma soluo de gua/metanol 70:30 + 0,08 M de acetato de amnio por 12,5 min e, aps esse perodo, era acionada a corrida com mudana de fase mvel para gua/metanol 70:30. Em ambos os casos a vazo era de 0,5 mL/min. O tempo de corrida para a separao dos corantes era de 20 min2,3. Deteco e identificao Os picos foram detectados atravs do detector de arranjo de diodo (DAD). Os corantes foram divididos em trs grupos: os azuis foram detectados a 595 nm, os vermelhos a 525 nm e os amarelos a 450 nm. Os corantes foram identificados pelos tempos de reteno em comparao com os tempos de reteno dos padres analisados nas mesmas condies e pelos espectros de absoro obtidos pelo DAD. A adio de padres nas amostras tambm foi usada como parmetro de identificao (co-cromatografia). A quantificao foi realizada por padronizao externa. Foram construdas curvas de padronizao para cada corante artificial, com 5 nveis de concentrao, sendo cada ponto a mdia de duas injees. RESULTADOS E DISCUSSO As composies qualitativas e quantitativas dos corantes artificiais presentes nas amostras so apresentadas nas Tabelas 1 a 4. Os limites permitidos pela legislao brasileira so: Azorrubina (E-122) e Eritrosina (E-127) 5 mg/100 g; Amarelo Crepsculo (E-110), Amaranto (E123) e Ponceau 4R (E-124) 10 mg/100 g; Tartrazina (E102), Vermelho 40 (E-129), Azul Patente V (E-131), Indigotina (E132), Azul Brilhante (E-133) e Verde Rpido (E143) 30 mg/100 g. Em confeitos de chocolate e balas nenhuma das amostras apresentou ndices superiores aos permitidos. Nos confeitos de chocolate coloridos, todos os teores estavam dentro do permitido (Tabela 1), e em duas amostras cor/sabor marrom das marcas B e D, foi encontrada mistura de 4 corantes. Nos produtos de goma de mascar, 9 das 27 amostras analisadas (33% do total) foram encontrados valores maiores que os autorizados para esse tipo de produto e no sabor limo do fabricante A foi encontrado cinco vezes mais corante que o permitido (Tabela 2).

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Tabela 1. Teores de corantes artificiais encontrados em confeitos de chocolate coloridos* MARCA A COR/ SABOR azul amarelo vermelho verde rosa laranja marrom azul laranja vermelho amarelo marrom azul amarelo verde rosa vermelho laranja roxo marrom verde azul marrom amarelo vermelho rosa verde amarelo laranja marrom azul E-102 E-110 CORANTES E-123 E-124 (mg/100g) E-127 E-129 E-132 E-133 0,870,00 1,840,02 7,00,3 2,950,04 1,640,01 5,20,1 5,50,2 6,10,2 5,90,2 4,50,1 7,50,3 2,800,04 1,680,01 traos 0,540,00 traos 1,250,05 4,60,1 traos 2,250,03 3,540,06 3,650,07 7,20,3 2,840,04 6,10,2 6,00,2 1,580,01 2,480,03 2,150,02 12,30,8 traos traos 2,960,05 1,640,01 traos 0,450,00 1,250,01 0,870,00 2,020,02 0,570,00 traos 1,800,02 0,300,00 0,300,00 1,820,01 1,820,02 traos traos 6,07 5,97 4,54 4,12 0,45 1,100,00 2,810,03 3,05 4,59 1,55 3,42 4,64 4,63 9,64 7,19 15,67 1,260,01 0,720,00 0,770,00 1,290,01 3,370,06 Traos 1,570,01 0,580,00 0,640,00 4,030,08 2,240,03 0,750,00 TOTAL 0,87 1,84 13,27 3,70 1,64 5,24 7,64 0,64 6,11 9,23 4,52 10,21 1,29 2,80 2,22

*mdia e estimativas do desvio padro (n=4) Tais dados s confirmam o observado quando comparados visualmente colorao de produtos similares nacionais e importados, principalmente da Argentina e Estados Unidos. Em geral, os produtos importados (marcas E e G) apresentam uma colorao mais intensa. Esta, talvez, fosse a justificativa de quatro corantes em todos da marca G. Embora as marcas E e G sejam produtos importados, para sua comercializao no pas, deveriam seguir as normas vigentes no pas. As gomas da marca F so produtos nacionais e tambm esto fora das especificaes. Ainda em relao s gomas de mascar, em duas amostras da marca D a extrao no foi completa, mesmo aps vrias tentativas com outros solventes e combinaes de solventes para a extrao, talvez pelo tipo de goma utilizada que mantm o corante retido em sua estrutura, no entanto, consideramos que o mesmo ocorre durante o consumo. O corante amaranto foi o nico no encontrado nas amostras de cereais matinais coloridos (Tabela 3). As trs marcas analisadas esto fora do permitido, sendo que na poro mdia recomendada pelos fabricantes o teor de corantes chegou a duas vezes mais que o permitido. A amostra C, alm de apresentar altas concentraes de corantes artificiais, declarava na sua embalagem a presena de corantes artificiais, no entanto, as anlises indicam no s a presena destes, mas tambm altas concentraes, superiores s permitidas pela legislao brasileira. Nas amostras de balas apenas uma marca (H) apresentou ndices prximos ao mximo permitido, todas as demais marcas se apresentaram dentro da legislao (Tabela 4). No geral, a tartrazina e o amarelo crepsculo foram os corantes, quantitativamente, mais utilizados pelas indstrias nas amostras aqui analisadas. Os cromatogramas referentes s amostras esto mostrados nas Figuras 1 e 2.

Figura 1. Perfis cromatogrficos nos trs comprimentos de onda de leitura para: (a) bala cor/sabor vermelha; (b) cereal matinal colorido cor/sabor roxa. Condies cromatogrficas descritas no texto

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Tabela 2. Teores de corantes artificiais encontrados em gomas de mascar* MARCA A COR/SABOR laranja limo ma melancia verde laranja amarelo vermelho rosa tutti frutti hortel uva morango uva cereja tutti frutti canela pink verde amarelo laranja rosa roxo bordo azul/amarelo laranja/amarelo vermelho/laranja E-102 1557 0,260,01 4,90,3 6,50,3 12,80,6 7,60,4 241 7,30,4 0,970,05 0,380,02 0,530,03 2,40,1 2,50,1 503 0,450,02 392 332 0,410,02 E-110 271 CORANTES (mg/100g) E-123 E-127 E-129 0,220,01 131 0,410,02 0,170,01 E-132 E-133 TOTAL 27,32 154,77 12,99 5,34 8,70 12,82 7,56 23,45 7,26 3,57 5,05 3,27 2,41 2,83 50,25 2,40 72,95 44,07 50,12 21,37 69,01 27,78 32,80 36,16 25,59 22,84 48,49

2,040,06

2,60,1 3,60,2 2,000,1

1,040,05 0,740,04 0,370,02

1,950,09 7,50,4 362 211 553 1,190,06 342 3,70,2

E F

14,20,7

291 102 10,10,9 6,960,01 1,090,00 8,90,4 9,430,00

13,90,7 261 3,10,2

0,480,02 1,280,06 362 0,520,06 3,440,01 31,60,2

142 0,430,03 0,490,00

*mdia e estimativas do desvio padro (n=4)

Tabela 3. Teores dos corantes artificiais encontrados em cereais matinais* MARCA COR/SABOR verde laranja vermelha amarela roxa poro ** verde laranja vermelha amarela roxa poro ** verde laranja vermelho amarelo poro** E-102 E-110 0,37 0,07 46 1 5,2 0,4 2,7 0,8 CORANTES E-124 E-127 (mg/100g) E-129 0,23 0,05 1,6 0,5 8,8 0,5 0,55 0,03 14,4 0,1 0,09 0,09 3,8 0,6 traos 136 15 2,5 0,3 2,29 0,05 E-132 E-133 2,59 0,9 TOTAL 3,2 47,7 14,0 3,25 16,89 15,96 31,97 139,5 55,89 80,57 37,4 74,9 56,40 124,34 37,46 74,06 62,17

2,49 0,06 0,57 0,09 0,93 0,2 0,43 0,06 9,8 0,2

31 2 1,1 0,2 0,6 0,2 78 1 1,1 0,2 26 3 45 2 1,2 0,4 69,60,3 232

12 2 traos 136 15 2,5 0,3 2,29 0,05

0,2 0,2

29, 8 3,79 0,1 123 4 7,60,2 4,40,2 337

29, 8 0,950,00 301 6,80,4

1,4 0,2

5,80,6

0,50,1

* mdia e estimativa dos desvios padres (n=4); ** poro recomendada pelo fabricante (30 g), (n=8)

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Tabela 4. Teores de corantes artificiais encontrados em balas* MARCA COR/ SABOR E-102 E-110 CORANTES E-123 E-124 0,670,00 1,640,01 2,790,04 2,080,02 traos 141 9,10,4 0,290,00 141 151 traos 5,60,2 5,70,2 8,70,4 6,70,2 4,90,1 4,60,1 traos 8,80,4 1,200,01 6,90,2 9,000,4 161 3,170,05 12,40,8 3,670,07 1,890,02 7,10,3 0,350,00 0,170,00 0,180,00 0,520,00 11,00,6 2,300,03 0,450,03 0,430,00 8,60,4 0,230,00 0,740,00 4,80,1 6,90,2 0,600,00 traos 1,960,02 1,650,01 0,490,00 0,900,01 E-127 (mg/100g) E-129 E-132 E-133 TOTAL 0,67 1,64 2,79 2,08 12,84 13,86 11,05 1,94 16,62 15,80 8,62 5,82 6,43 4,79 15,56 7,25 17,27 8,31 4,19 15,92 9,27 7,39 25,17 15,87 3,69 11,03

morango laranja hortel morango tutti-frutti abacaxi vermelho laranja rosa laranja verde branco vermelho amarelo verde/amarelo vermelho/branco vermelho/laranja verde/amarelo laranja/amarelo rosa/amarelo azul/rosa rosa/amarelo laranja/verde verde/amarelo laranja amarelo verde vermelho

12,80,8

7,30,3 161

*mdia e estimativas do desvio padro (n=4)

CONCLUSO A metodologia empregada mostrou-se bastante eficaz para a quantificao de oito corantes artificiais permitidos no Brasil, nas amostras analisadas. Os resultados apontam a no existncia de um bom controle no uso de corantes artificiais pelas empresas alimentcias nacionais, j que muitos dos produtos analisados apresentavam teores acima dos permitidos pela legislao brasileira, que variam de 5 a 30 mg/100 g. Os produtos importados deveriam atender s especificaes da nossa legislao para serem comercializados no pas. Isto um ponto preocupante, uma vez que esses produtos se destinam, principalmente, ao pblico infantil e o risco sade aumenta bastante neste tipo de consumidor. necessria maior fiscalizao por parte das autoridades para a liberao desses produtos, no que diz respeito aos teores de corantes artificiais utilizados pelas indstrias. Embora no se tenha encontrado corantes no permitidos, as quantidades e misturas, muitas vezes, ultrapassaram os limites determinados.

Figura 2. Perfis cromatogrficos nos trs comprimentos de onda de leitura para: (a) confeito de chocolate cor/sabor azul; (b) goma de mascar cor/ sabor verde. Condies cromatogrficas descritas no texto

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