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Imunohometerapia Prtica

Reagentes: Bormelina (Dilunet 1) - uma enzima proteoltica, que induz uma reduo na carga
electroltica da superfcie dos glbulos vermelhos, possibilitando a aglutinao. utilizada nas preparaes de suspenses de eritrcitos para determinao do grupo sanguneo e como aditivo em testes enzimticos com eritrcitos no tratados para deteco de anticorpos e provas reversas.

Como efectuar a leitura dos tubos: Teste positivo Teste negativo

Reagente de Liss (Diluent 2) Soluo de baixa fora inica que ajuda a melhorar as reaces antignio-anticorpo. Princpio do teste Este mtodo baseia-se na porosidade do gel, isto quando h formao de complexos antignio-anticorpo, ocorre a situao de formao de precipitado no topo do gel, sendo o teste positivo. Quando no ocorre formao de imuno complexos os eritrcitos formam um boto e depositam-se no fundo do poo, considerando-se a prova negativa.

Numerao no fundo do card refere-se intensidade da positividade do teste vai de 1 a 4.

Para transfuses 1 Opo sangue isogrupal - 2 Opo sangue O neg. Do pequeno saco que est colocado antes do saco de transfuso, que contm cerca de 20 ml so retirados quatro tubos piloto para as seguintes anlises: - ABO/Rh - cidos Nuclicos - Serologia - Seroteca

1 Passo na chegada ao laboratrio: - Retirar do frigorfico as clulas comercialmente disponveis e os reagentes 1 e 2.


Preparao das suspenses: Tubo 1 500 l de diluente 1 + 25 l de concentrado de eritrcitos Tubo 2 1000 l de diluente 2 + 10 l de concentrado de eritrcitos Tubo 3 soro do paciente

Quando falamos de antignio D falamos de factor Rh, sendo o fentipo do Rh descrito pelas letras DCE.

Prova celular Vamos pesquisar anticorpos pois o gel possui antignios. Determinao grupo ABO/RH Prova srica (Card reverse) Vamos pesquisar anticorpos porque as clulas que vamos pr nos microtubos so antignios conhecidos. Clulas + Bromelina Pesquisa de anticorpos, logo o tubo tem antignios. Antignio K - o antignio mais imunognico a seguir ao Rh. - Causa reaces de hemlise. - S 9% da populao K+. Cards de Liss Sempre que utilizado o reagente de liss temos que incubar o card, para haver ligao antignio anticorpo, pois os 37C simulam a temperatura corporal. 1 gota = 50 l nos frascos de reagente. Card ABO/Rh - Pretende-se determinar o grupo sanguneo ABO e Rh atravs da pesquisa de antignios respectivos no sangue. TAD ou Coombs Directa - Consiste em fazer reagir eritrcitos com o soro de antiglobulina humana. - Anticorpos fixados aos eritrcitos. PAI ou Coombs Indirecta - Consiste na pesquisa de anticorpos no soro do doente. Prova reversa (ou prova srica) + Coombs Directa 1 - Colocar nos microtubos identificados com A1, A2, B e O, 50 l (1 gota) de clulas comercialmente disponveis + 50 l do tubo 3 em cada um dos mesmos. 2 -Nos microtubos identificados com I e II colocar 50 l do tubo 2 3 - Levar a o card a encubar durante 15 minutos a 37. 4- Centrifugar durante 10 minutos 5 Ler resultados 1 -Colocar 50 l do tubo 1 em cada microtubo. 2 -Centrifugar durante 10 minutos em centrifuga prpria. 3 -Ler o resultado

Determinao do Fentipo RH 1 10 l do tubo 1 em cada micro tubo 2 - Centrifugar durante 10 minutos 3 Ler resultados

Coombs Indirecta 1 Colocar para o P1 as clulas comercialmente disponveis identificadas como 1, 2 e 3, 50 l das mesmas clulas (1 gota) + 25 l do tubo 3. 2 Repetir o mesmo processo para o paciente dois (P2 e respectivo soro) ou ento confirmar a prova do paciente 1. 3- Incubar 15 minutos a 37. 4- Centrifugar durante 10 minutos. 5 Ler resultados. Prova de Coombs directa Positiva Prova de Coombs directa utilizada em: - Preparao de transfuses ao doente que a ir receber; - Doena Homoltica do recm-nascido; - Reaces transfusionais; - Anemias hemolticas auto-imunes.

Coombs directa antiga Colocar nos microtubos I; II; III e IV, 50l (1 gota) de clulas comercialmente disponveis.

50 l do soro do doente

Incubar 15 a 37C.

Nos microtubos identificados com VP e VIP deitar 50l de clulas do doente suspensas em diluente 2.

Centrifugar 10

Ler os resultados

Complete Cross Match


Amostra: Suspenso a 0,8% de clulas com diluente 2
E soro ou plasma do recetor Recetor Card ID Complete Crossmatch 50l suspenso do daodr em diluente 2 nos tubos 1, 2, 3, 4 e 5 + 50 l suspenso do recetor em diluente 2 nos tubos 1, 2, 3 e 6 + 25 l de soro do recetor nos tubos 4, 5 e 6 + 25 l de diluente 1 nos tubos 1, 2, 3e4 Dador

Na ausncia doCard Complete Crossmatch fazer: Para doente e dador: ABO; Reversa; Rh; Fentipo Rh; C.D.; C.I. Card Liss; Card Enz. Suspenso em D2 Para as transfuses O Card tem de dar um resultado negativo

Dispensar 50 l para card Liss e para card Enz. + 25 l de soro do doente

NaCl/ Enz

AHG

AHG

- Deste modo no temos confirmao do ABO.

Auto-controlo C.D. Centrifugar Incubar 10 - 15 minutos a 37C.

Ler resultados Alm de tudo isto fazer ainda para o recetor: ABO; Rh; Fentipo Rh; C.I.; C.D.; Reversa (as amostras devem ser centrifugadas a 3500 rpm 5/10 minutos)

Mes e Filhos
Para a Me fazer: Cards: ABO/Rh e Coombs directa

Coombs indirecta positiva (PAI) Pesquisa de Anticorpos


Card Liss/Coombs

Colocar 25l do tubo 3 + 1 gota de clulas comercialmente disponveis . Incubar 15 minutos a 37C. Centrifugar e ler resultados. Para os Filhos fazer: Car Newborn 50 l (1 gota) tubo 2 + Nos microtubos 1, 2, 3, 4 e 5 25 l de diluente 1 Serve para aumentar a adeso 50 l do tubo 3 + 1 gota clulas comercialmente disponveis Incubar 15 minutos a 37C. Centrifugar e ler resultados Em seguida deve fazer-se o painel de 11 clulas em Liss/Coombs e Card Enzyme. Card Enzymes

6 Incubar 10 minutos a temperatura ambiente

Centrifugar e ler resultados Quando no h o Card Newborns para o filho fazer: Card ABO normal e Coombs directa tambm normal.