UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS ESCUELA DE MEDICINA CTEDRA DE INMUNOLOGA PRCTICA DE LABORATORIO No.4 33 T H.

PILORY Helicobacter pylori es un bacilo gram negativo en forma espiral cuyo rol en la gastritis antral, enfermedad lcero-pptica y carcinoma gstrico ha sido demostrado en numerosos estudios. La deteccin de este patgeno se puede realizar por varios mtodos; entre ellos el cultivo y frotis para los cuales es necesario realizar endoscopia digestiva alta y tomar biopsias de la mucosa. Este es un proceso invasivo, pero se considera el gold standard, es decir es la prueba de referencia. Se han desarrollado tcnicas inmunolgicas para detectar la presencia de anticuerpos sricos anti- H.pylori. La inmunoglobulina IgM anti-H.pylori elevada indica infeccin activa mientras que titulaciones elevadas de IgG e IgA indican infeccin de tipo crnico. Estas pruebas inmunolgicas son de tamizaje o screening y no sustituyen a la identificacin histopatolgica. Se considera que ms del 50% de la poblacin mundial est infectada por H. pylori y el Ecuador no es la excepcin. Es de importancia considerar adems la alta prevalencia de cncer gstrico en nuestro pas y su directa relacin con la infeccin persistente de la mucosa gstrica por H.pylori. En nuestros estudios hemos encontrado que > 90 % de adultos con dispepsia presenta H. pylori en la mucosa gstrica con clulas mononucleares indicativas de gastritis crnica en todos los casos. Un importante porcentaje de los adultos investigados por nosotros presenta tambin polimorfonucleares, indicativos de gastritis crnica activa. Esta gastritis crnica activa representa un alto riesgo de dao de clulas gstricas que conduce a la apoptosis o a mutaciones asociadas a cncer gstrico. Las especies reactivas del Oxgeno (ROS) y del Nitrgeno (NOS) son las que causan esos daos del DNA (Semprtegui F, 2007). Tambin hemos investigado infeccin por H. pylori en nios menores de 3 aos que viven en barrios pobres peri-urbanos de Quito. En ese estudio antgenos de la bacteria fueron buscados en muestras fecales mediante una tcnica inmunolgica denominada ELISA (Enzime linked immunosorbent assay). Para nuestra sorpresa, ms del 60% de los nios estaban infectados. Adems, los nios infectados sufran retraso del crecimiento longitudinal, es decir talla corta para la edad. Este estudio muestra que la infeccin por H
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pylori afecta la biodisponibilidad de nutrientes crticos para el crecimiento (Egorov y Semprtegui, 2011). PRINCIPIO de la PRCTICA Se trata de un procedimiento inmuno-cromatogrfico que se basa en reaccin antgenoanticuerpo que desarrolla color. La cinta del kit ha sido revestida con antgenos de H. pylori. Adems, el margen izquierdo de la cinta (banda control) contiene anticuerpos antihelicobacter obtenidos de cabras inmunizadas con antgenos de H. pylori. Cuando la cinta es tratada con suero o plasma se desarrolla color prpura en dos o tres minutos. Conforme el tiempo transcurre debe observarse un color prpura intenso en la banda control (C). Si el suero o plasma que se estudia contiene anticuerpos anti-helicobacter aparecer otra banda de color prpura intenso hacia la derecha de la banda control (banda T). Esta banda indica que la prueba ha sido positiva. Es preciso que la banda C aparezca claramente, de lo contrario se concluir que la prueba tuvo algn defecto tcnico o que el kit ha perdido su validez. La presencia solamente de la banda T no permite concluir que la prueba ha sido positiva. Para concluir que una prueba es positiva deben estar claramente visibles de color prpura las dos bandas (C y T). La prueba mide presencia de anticuerpos IgM e IgG. Es una prueba cualitativa, es decir, no cuantifica la concentracin de anticuerpos, solo permite establecer la presencia o ausencia de anticuerpos. PROCEDIMIENTO 1. Trabajar con guantes todo el tiempo. 2. Los reactivos deben estar a temperatura ambiente. 3. Extraer 2 ml de sangre mediante puncin venosa idnea, es decir, con las medidas de asepsia indispensables. 4. Colocar delicadamente la sangre en un tubo tratado con anticoagulante (EDTA). 5. Centrifugar la sangre durante 10 minutos a 3.000 r.pm. 6. Cuidadosamente, con micropipeta, dispensar 10 microlitros de plasma en el pocillo S de la placa individual y accionar el cronmetro. 7. Observar el cambio de coloracin de la cinta 8. Cuando se han cumplido los 10 minutos observar si la banda C est de color prpura. Eso indica que el procedimiento tcnico fue correctamente realizado.
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9. Observar si hay coloracin prpura en la zona T de la cinta. Eso indica que la prueba es positiva para la presencia de anticuerpos anti-helicobacter. Pero la banda C tambin debe estar coloreada. 10. Si ninguna de las bandas (C, T) est coloreada la tcnica ha fallado. 11. Si solo la banda T est coloreada la tcnica ha fallado.

BIBLIOGRAFA Semprtegui F., Daz, M., Meja,R. Rodrguez-Mora, o., et al., Low Concentrations of Zinc in Gastric Mucosa are Associated with Increased severity of Helicobacter pylori-induced inflammation, Helicobacter12: 43-48, 2007. Egorov, A, Semprtegui F, Estrella B, Egas J., Naumova EN, Griffiths JK. The effect of Helicobacter pylori infection on growth velocity in young children from poor urban communities in Ecuador. Int J Infect Dis. 2010;14:e788-91. Epub 2010 Jul 17.

ELABORACIN: Dr. Fernando Semprtegui Colaboracin: Ayudantes de ctedra. Junio, 2012.