ESPECTROSCOPIA RAMAN

Cesar Alberto Arizabaleta.

 Mtico

investigador Indu, que dio el nombre al fenmeno inelstico de dispersin de la luz que permite el estudio de rotaciones y vibraciones moleculares.

C.V. Raman descubri que la longitud de onda de una pequea fraccin de la radiacin dispersada por ciertas molculas, difiere del haz incidente y adems que los desplazamientos de la longitud de onda dependen de la estructura qumica de las molculas responsables de la dispersin.

Fenmeno Raman

Historia
En un viaje a Europa en el S.S. Narkunda en 1921, RAMAN hizo los primeros observaciones que, segn los historiadores, dieron paso a su descubrimiento histrico. Al contrario del postulado de RAYLEIGH, de que el color "... azul intenso del mar ... es simplemente el azul del cielo visto en reflexin...",

RAMAN realiz un experimento sencillo donde pudo demostrar que el color azul del agua proceda de un fenmeno propio, ms tarde explicado como la dispersin de la luz por las molculas del agua.

En 1923, mientras estudiaba la dispersin de luz en agua y alcoholes purificados, uno de sus estudiantes observ que un rayo de luz solar, filtrado y pasado por el lquido, cambiaba de color. Este efecto se describi como una "fluorescencia dbil" ,pero el hecho de no poder eliminar dicha fluorescencia mediante purificacin de los lquidos fu el indicio fundamental de que el fenmeno era una propiedad caracterstica de la sustancia.

Durante los 5 aos siguientes, se realizaron estudios meticulosos de un gran nmero de lquidos aromticos, alifticos e inorgnicos. Como consecuencia de las observaciones, RAMAN y KRISHNAN proclamaron, en su famoso artculo de Nature en 1928 , el descubrimiento experimental de "un nuevo tipo de radiacin secundaria", una radiacin que fue predicho tericamente por SMEKAL en 1923.

Casualmente, el descubrimiento fue anunciado casi simultneamente por LANDSBERG y MANDELSTAM en Rusia, pero debido a la evidencia sistemtica y altamente detallada presentada por el grupo Indio, RAMAN recibi el Premio Nbel en 1930, y su nombre qued asociado al fenmeno y a la tcnica espectroscpica que se desarroll a continuacin..

Teora de la Espectroscopia Raman

Dispersin Rayleigh

l1
Fuente de radiacin lser, monocromtica visible o infrarroja

l1+1

l1

l1

l1-1
Dispersin Raman

Las intensidades de las lneas Raman son el 1x10-3 por ciento de la intensidad de la fuente.

Nitrgeno N2
Fuente de radiacin lser, monocromtica visible o infrarroja

Dispersin Rayleigh

Dispersion Raman

Dispersin Rayleigh

El espectro vibracional
Hay dos metodos Las transiciones en el IR van desde 200 comunes para medir hasta 4000cm-1 los espectros vibracionales. La espectroscopia infrarroja es un mtodo directo el cual permite visualizar las transiciones entre niveles vibracionales en un solo estado electrnico

La espectroscopia infrarroja puede ser utilizada para la identificacin de molculas. Pero esta limitada por ciertos factores:
1. Las molculas deben presentar cambio en el momento dipolar si la absorcin se lleva a cabo. De tal manera que las molculas homonucleares diatomicas son inactivas en el infrarrojo 2. En general las transiciones entre un nivel vibracional y el siguiente nivel vibracional de mayor energa (n----n+1).

Algunos de estos problemas se reducen en Espectroscopia Raman.

De la radiacin dispersada muchas de ellas se generan en la misma longitud de onda que la onda incidente: No hay intercambio de energa entre la luz y la molcula. Este es una dispersin elstica o dispersin Rayleigh

Pero alguna radiacin, pierde energa en la molcula. De todas formas, esta puede solamente perder una cantidad de energa que es igual a una de las transiciones en la molcula. La radiacin dispersada tiene menos energa (una mayor longitud de onda) que la luz incidente. Esta es considerada una dispersin inelstica o dispersin Raman

Actividad en el Raman
O C O

Para que ocurra una transicin en Raman, debe existir un cambio en la polarizabilidad

Polarizabilidad

La polarizabilidad es el valor del momento dipolar inducido dividido entre la intensidad del campo que produce esa induccin. En otras palabras, la nube electrnica de la molcula debe deformarse mas fcilmente en un extremo de la molcula, durante la vibracin, que en el otro, lo cual estrictamente constituye un efecto cuntico

Momento dipolar
El

momento dipolar es el producto de la carga del dipolo y de la distancia de separacin de las cargas

movimiento vibracional
Extendida
O C O

Equilibrio
O
C O

Compensada
O C O

c xz d b

polarizabilidad elipsoide

Teniendo

en cuenta las relaciones que caracterizan a la radiacin electromagntica,

E= h. = h. c /
c: vel de la luz, 3.108 m / s : Longitud de onda : frecuencia h: constante de Planck, 6.62 10-34 J.s

Si la Eliberada < Eabsorbida la molcula acaba en un nivel energtico superior, aumenta (log de onda) y diminuye (frecuencia),

Dispersin Raman Stokes

Dispersin elstica

Dispersin inelstica

n1 n0

Por el contrario, cuando la molcula acaba en un nivel energtico inferior , se libera ms energa que la absorbida, Eliberada > Eabsorbida
diminuye (log de onda) y aumenta ,

Dispersin Raman anti-Stokes

Dispersin elstica

Dispersin inelstica

n1 n0

ESTADO VIRTUAL

ESTADO BASAL

Las transiciones entre niveles energticos corresponden a transiciones entre estados vibracionales

Los estados vibracionales en los que se encuentran las molculas dependen de la temperatura.

Cuando colisiona el fotn, la molcula puede encontrarse en un estado ms relajado o ms excitado, esto queda determinada por la ley de distribucin de poblacin de estados de Maxwell-Boltzmann:
poblacin excitada /poblacin est. fund. = e-E/ kT

Por lo tanto las transiciones stokes son ms probables que las anti-stokes a temperaturas moderadas

La separacin entre las bandas Stokes y anti-Stokes con respecto a la dispersin Rayleigh es la misma, se corresponden al cambio entre dos niveles de energa en uno u otro sentido.

0 y d frecuencias del fotn incidente y dispersado, respectivamente Ea y Eb las energas antes y despus de la dispersin del fotn
La diferencia de energa entre dos estados:

DE= Ea - Eb = h (0 - d )
(0 - d ) cambio o corrimiento Raman

Origen del espectro Raman

Las transiciones vibracionales se pueden observar por espectroscopa IR o Raman, sin embargo estas transiciones se registran de modo diferente:

En espectroscopa IR se registra la absorcin de luz infrarroja en funcin de la frecuencia, la molcula absorbe una energa de la fuente IR en cada transicin vibracional

Origen del espectro Raman

La intensidad de la absorcin IR est dada por la ec. de Beer-Lambert: I= I0 e c d I0 e I: intensidad de la luz incidente y de la transmitida : coeficiente de absorcin molar c: concentracin de la molcula d: la longitud de camino recorrido por el haz a travs de la muestra

Origen del espectro Raman

En el espectro Raman, la muestra se irradia con un haz laser cuya longitud puede ser cualquiera entre UV, VIS, IR cercano o IR, y se estudia la luz dispersada, la cual tiene una frecuencia distinta con respecto a la lnea excitante. De modo que en la espectroscopa Raman se miden

frecuencias vibracionales como un desplazamiento entre la energa del haz incidente y el dispersado.

Origen del espectro Raman

Lneas de excitacin
El fenmeno Raman produce las mismas bandas cualquiera sea la lnea de excitacin. Sin embargo cambian la intensidad de la seal Raman y los problemas de fluorescencia

250 nm (UV) 514 nm (visible verde) 633 nm (visible rojo) 780 nm (IR cercano) 1064 nm (IR)
Intensidad (I) de la seal Raman es proporcional a frecuencia ()4 de la lnea de excitacin; (cm-1) = c/ (nm)

Intensidades relativas de la seal Raman

La seal raman aumenta ms de dos rdenes de magnitud al moverse desde excitacin en el IR (1064 nm) al UV (250nm)

Las lneas del efecto Raman son extremadamente dbiles ya que solo se dispersa un 0.001% de la rad. incidente y solo el 1% de la Rad. dispersada es rad. Raman. Por lo tanto se usa la luz muy intensa de un rayo lser como radiacin de excitacin

A mayor energa de la rad. Incidente mayor tiende a ser la fluorescencia. A medida que se desplaza hacia la luz roja, la fluorescencia observada disminuye, junto con la seal Raman Excitando con UV la fluorescencia es muy fuerte, sin embargo la seal Raman sale en la zona UV del registro del espectro, donde no llega la fluorescencia (visible) En muestras con fluorescencia es difcil trabajar con luz verde

Reglas de seleccin
Aunque con IR y Raman observan las transiciones entre estados vibracionales no todas las vibraciones son activas a IR y/o a Raman

Son activas en IR las vibraciones que suponen una modificacin del momento dipolar del enlace

Son activas en Raman las vibraciones que suponen una modificacin de la polarizabilidad de los enlaces

Reglas de seleccin
En general para determinados grupos funcionales se puede establecer que:

Vibraciones de tensin de enlaces covalentes (C=C, P=S, S-S, C-S) sern intensos en Raman pero dbiles absorbedores de IR. Vibraciones de tensin de enlaces inicos sern dbiles en Raman pero absorbern con intensidad en IR

Comparacin entre la espectroscopa Raman e IR

Ventajas - Puede operar con cualquier lnea de excitacin desde UV hasta IR) - La ptica en general es sencilla - El diseo de las celdas es ms simple , vidrio o cuarzo - Se puede trabajar con pequeas cantidades de muestra, gracias a los accesorios de microscopa - La presencia de agua no es problema, soluciones acuosas - La morfologa de la muestra no es crtica

Limitaciones
- Equipos caros - La cuantificacin es muy difcil, se necesita patrn interno - La fuerte energa del lser puede calentar y degradar la muestra - La fluorescencia es la mayor limitacin.

Lneas de excitacin Raman. Ventajas y limitaciones

Raman UV (250 nm) Seal Raman muy elevada y permite superar la fluorescencia, necesita celdas de cuarzo. Raman Visible (514 y 633 nm) Configuracin ms extendida, y la seal es muy buena, problemas de fluorescencia.

Raman IR-cercano (788 nm) Disminucin de la seal Raman, alejado de la emisin de fluorescencia.

FT Raman (1064 nm) La menor seal Raman, rpidos pues al excitar en IR cercano pueden utilizar la ptica FT, la presencia de H2O es una limitacin, celdas transparentes al IR

INSTRUMENTACIN
Los equipos de espectroscopa Raman estn formados por los siguientes elementos:

Fuente de excitacin Iluminacin de la muestra y recoleccin de la seal dispersada Portamuestra o celdas de tratamiento Eliminacin de la dispersin elstica Espectrmetro, rejillas o sistema FT Detectores

Fuentes de excitacin
Radiacin monocromtica de fuerte intensidad- lser Ar+ , Kr+ o de He-Ne. La potencia utilizada era entre 1-5 W, pero al incorporar los sistemas de microsccopa, concentran el haz, y compensan la baja potencia del lser, 25 mW

Recoleccin de la seal dispersada

El lser se orienta hacia la muestra y luego se debe recoger la radiacin dispersada. Existen dos configuraciones 90 o 180 entre el haz incidente y el haz que va al detector.

Eliminacin de la dispersin elstica

Se debe separar la dispersin elstica de la dispersin Raman, evitando daos en el detector.

Sistema de doble o triple monocromador, el primero elimina la dispersin Rayleigh, mejora la resolucin espectral pero disminuye la intensidad Sistema de monocromador y filtro hologrfico, el filtro se intercala en la trayectoria del haz dispersado hacia el detector, son especficos para cada log de onda, no hay disminucin de la intensidad, (+/- 120 cm -1)

Detectores
Fotomultiplicadores, son fotoctodos que emiten ecuando un fotn lo impacta.

CCD, charge coupled device, deteccin de

acoplamiento de carga, son detectores pticos basados en semiconductores silicio-metal. Ventajas: bajo ruido, elevada eficiencia cuntica y elevada sensibilidad en un amplio rango de trabajo (120 a 1000 nm, desde UV hasta IR) Interferencia con los rayos csmicos Detectores para FT-Raman, de arseniuro de In y Ga son sensibles, pero no puede detectar desplazamientos Raman superior a 3000 cm -1. Los de germanio alcanzan a 3500 cm -1

Calibracin
Para garantizar las medidas de frecuencia e intensidad es necesario la calibracin del instrumento.

Calibracin de la frecuencia: se puede

calibrar el equipo antes de la medicin, con lminas de silicio 520 cm -1

Tratamiento de la muestra
A diferencia del IR, las muestras a estudiar por Raman pueden alojarse en recipientes de vidrio, la nica limitacin es UV-Raman que necesita de cuarzo. Para FT-Raman al igual que el IR necesita de materiales transparentes al IR. El agua de las soluciones no interfiere en Raman porque la dispersin es muy baja, sin embargo para IR absorbe fuertemente.

Tratamiento de la muestra
Gases: Se colocan en un tubo de vidrio de 1-2 cm de largo, con paredes de 1mm Lquidos: Las muestras que colocan en tubos o bulbos, incluso en capilares Slidos: Empaquetar en tubos capilares o compactar en pastilla, no es necesario usar KBr, pero esto ayuda a disminuir los efectos de calentamiento y la cantidad de muestra necesaria.

Lquidos:

Gases:

Slidos:

Celdas de tratamiento in situ

Existen muchos tipos de celdas provistas por el fabricante y en su mayora de fabricacin casera, adaptada a las necesidades Celdas de baja T (desde -196C hasta 25C) Celdas termostatizadas, para los estudios en biologa Celdas de T elevada, especialmente usadas en materiales slidos (cermicos, vidrios y catalizadores)

Eliminacion de la dispersion elastica

Porta muestra

Lente

Espejo de enfoque

Hay dos tipos de detectores empleados en Raman:

a) Los detectores monocanales, los tubos fotomultiplicadores (PMT), que poseen un nico elemento de deteccin.

b) Los detectores multicanales, que constan de un conjunto de elementos de deteccin, y son detectores de estado slido.

Los PMT son detectores fotoemisores. Constan fundamentalmente de dos partes: un ctodo fotoemisivo y un multiplicador de electrones. El rango de respuesta del PMT va desde 180 nm hasta 1100 nm (en los muy modernos llega hasta los 1500 nm). Los detectores multicanales son detectores de estado slido, basados en la tecnologa del chip de silicio. Los hay de dos tipos: lineales (PDA) y bidimensionales (CCD).

Eleccin del tipo de detector.

La eleccin del detector va a depender de la finalidad del estudio a realizar: a) Los PMT se usan ampliamente en sistemas Raman dispersivos, en los que interesa estudiar la regin de bajas frecuencias, con una buena resolucin y prximas a la lnea Rayleigh. Es el caso de la fsica de estado slido, de estudios de rotovibracin de gases y otros. Los PMT son particularmente eficientes en el VIS.

b) Los detectores de estado slido, tales como el Ge o InGaAs, son los preferidos cuando la lnea lser de excitacin corresponde al NIR (lser de Nd:YAG, l = 1064 nm). Es el caso de los espectrmetros FT-RAMAN.

c) Las CCD convencionales con iluminacin frontal

son ms baratas y funcionan perfectamente bien con excitacin visible, siendo ptima para 633 nm (lser de He-Ne). El enfriamiento de la CCD puede hacerse por efecto Peltier (al aire o con agua) o por nitrgeno lquido. Solo cuando el tipo de aplicacin as lo demande (p.e., tiempos de integracin de una hora o ms) ser aconsejable el uso del nitrgeno lquido.