Barragn Montes Selene Snchez Suarez Nanci Guzmn Morales Rogelio

GRUPO 1802

Las gammaglobulinas son glicoprotenas formadas por cadenas cuya principal funcin es defender a nuestro organismo por la presencia de sustancias extraas (antgenos).

Las protenas plasmticas, se clasifican en: Albmina: Intervienen en el control del nivel de agua en el plasma sanguneo, y en el transporte de lpidos por la sangre. Globulinas: Relacionadas fundamentalmente con mecanismos de defensa del organismo. Fibringeno: Protena esencial para que se realice la coagulacin sangunea

Especficos
Tcnicas inmunolgicas

Inespecficos
Precipitacin

Dilisis

Cromatografa

Electroforesis

Transferencia Western
Inmunoabsorcin Inmunoprecipitacin

Mtodo

Fundamento
La sal extrae agua de solvatacin de la protena.

Ventajas
Alto rendimiento Concentrar diluciones diluidas. Purificar protenas a gran escala. Alta selectividad

Desventajas
Baja selectividad. Necesario recurrir a la centrifugacin.

PRECIPITACIN
-SALINA

-ALCOHOLICA

Baja la cte dielctrica, entonces baja la capacidad de solvatacin del solvente. Las protenas con carga se repelen si se trabaja cerca del PI.

Control de muchas variables (T, pH, ).

-ISOELCTRICA

MTODO

Fundament o Separar molculas por sus diferencias en sus ndices de difusin.

Ventajas Eliminacin de sales Concentraci n de muestras

Desventajas No selectiva

DILISIS

Eliminacin de solutos de pequeo tamao

Mtodo
CROMATOGRAFA
- De intercambio inico

Fundamento

Ventajas

Desventajas

-Exclusin molecular

Adsorcin reversible que existe entre una molcula con carga determinada. Separacin en funcin del tamao y forma Capacidad de unin a un determinando ligando. Acelerar el movimiento de las molculas con

Alta capacidad Alta resolucin

La corrida puede afectar la actividad de la protena Dilucin de la muestra

Se pueden cambiar los buffers Mayor separacin de molculas biolgicas

- De afinidad

Depende de la presin y de la temperatura

- HPLC y FPLC

Limitan el ensanchamiento por difusin de las bandas de protenas

Muy costoso

ELECTROFORESIS DEL SUERO HUMANO

Tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y nodo), este movimiento es denominado electroforesis

Electroforesis del suero humano PROTEINAS

Caractersticas: *Los polipptidos tienen tanto cargas + como ; un grupo amino (+) y un grupo carboxilo (-). *Son anfteros. *Puntos isoelctricos en los cuales suelen ser menos solubles y presentan mayor tendencia a agregarse.

Electroforesis del suero humano

Papel Sobre soporte Acetato de celulosa Gel
Almidn Poliacrilamida Agar

Tipos de electroforesis

Isoelectroenfoque

Capilaridad
Bidimensional

Electroforesis del suero humano APLICACIN DE LA ELECTROFORESIS

Fraccionamiento de las hemoglobinas Diferenciacin de la hemoglobina fetal Diagnstico de talasemias, anemias falciformes, etc

Protenas sricas Protenas urinarias Lipoprotenas cidos nucleicos Enzimas Inmunoelectroforesi s Etc.

FENMENO DE SALTING OUT

La precipitacin de la globulina gamma por este mtodo se debe al fenmeno de "salting out", el cul consiste en que las molculas de agua que solvatan a la molcula de anticuerpo son desplazadas por los iones sulfato y amonio, que adems neutralizan los grupos cargados de la protena, la cual llega a su punto isoelctrico y precipita.

Fraccionacin mediante Salting Out

Solucin Original

(Homogneo)

Separo el sobrenadante en un tubo nuevo y llevo a cabo el anlisis que deseo.

Se precipita de forma selectiva a la protena roja y se transfiere el sobrenadante a un nuevo tubo en el cual aumento lo [Sal] para dejar en el sobrenadante la protena deseada.

pH Variables a controlar Temperatura

solubilidad en agua, fuerzas inicas muy elevadas Solubilizacin salina a fuerza inica, es menor que CaCl2, KCl, NaCl Pp. mayor que con cloruros. Solubilizacin en un amplio rango de [inicas], proporciona lmites mayores para pp. Comparando con las otras

Ventajas

Desventajas

Iones amonio interfieren en el anlisis directo del nitrgeno , dilizar No buen amortiguador, difcil de controlar pH por debajo de 8.0 Concentracin depende mucho de la temperatura. Pureza, evitar contaminantes de metales, iones pueden unirse a protenas y catalizar reacciones de oxidacin

realizar una pp. al 45% de saturacin con (NH4)2SO4

10min. 2500rpm

5min. 5000rpm
realizar una segunda pp. al 33% con (NH4)2SO4

10 minutos
Corroborar haciendo pruebas con BaCl2. No debe V. mnimo
aparecer pp. algn

3.5m L

UTILIDAD DE LAS PREPARACIONES DE GAMMAGLOBULINA

Para estandarizar el mtodo de Folin-Ciocalteau utilizado en la titulacin cuantitativa de anticuerpos.

Las preparaciones de la gammaglobulina se usan mucho para preparar antisueros que se usa para la prueba de Coombs y para la determinacin inmunoqumica de gammaglobulina.
En pruebas de protenas raras, en suero de pacientes con artritis reumatoide. Tambin tiene amplia aplicacin teraputica (antitoxinas: tetnica y diftrica o simplemente gammaglobulina).

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