CINTICA DE CRECIMIENTO CELULAR

Aspectos que intervienen en la interaccin entre las clulas y el medio ambiente a lo largo de su crecimiento
Poblacin celular nutrientes sustratos productos calor multicomponente heterogeneidad en cada clula individual mutiples reacciones mecanismos de control interno adaptabilidad variabilidad gentica

Condiciones ambientales (medio) multicomponente reacciones en solucin equilibrio cido-base. cambio de las propiedades reolgicas multifsico (gas, lquido) distribucin espacial no unifrome.

interacciones mecnicas

Modelos de crecimiento celular

Modelos segregados Modelos no segregados Modelos estructurados Modelos no estructurados

Sistemas de cultivo
Discontinuo (batch). Continuo Discontinuo alimentado (fed-batch).

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Bioreactores: Tanque de agitacin mecnica

45

Discontinuo alimentado (fed-batch).

F, SR

X VX VF V0 S P V
35

Cultivo Continuo

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Discontinuo (batch).
Caractersticas
Tiempos cortos de procesos lo que permite trabajar en condiciones aspticas, sobre todo cuando se trata de medios de cultivos ricos en nutrientes. Perodos muertos: lavado, esterilizado, etc. Opera a baja densidad celular. Las concentracin de los distintos componentes vara a lo largo del proceso.

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Distintas fases en el crecimiento de un organismo en un proceso en batch

Discontinuo (batch).
suponemos que las clulas crecen en condiciones homogneas en cuanto a transferencia de nutrientes (fte. de carbono, nitrgeno, minerales, vitaminas, etc.) las concentraciones de nutrientes y de biomasa del cultivo varan a travs del tiempo El crecimiento de un microorganismo puede describirse a travs de una ecuacin exponencial de acuerdo a: Xo 2 n (1) Xn = biomasa despus de n generaciones Xo = biomasa inicial n = nmero de generaciones

Xn =

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T a m b i n pue de de c irs e q ue la b iom asa s e inc re m ent ar en dX d et erminad o interva lo d e tiem p o d t de ac ue rdo a la e c uac in: dx dt = Xo m (2 )

en un

d ond e m e s la veloc id ad es pe c fic a d e c re c im ie nto d e un orga nis m o y t ie ne -1 -1 -1 -1 unida d e s d e t (m in , h o d ). la velo c id ad e s p ec fic a d e c rec im iento d ep end e: c arac t er st ic a s intr ns ec as d el o rg anism o fa c to res exte rnos (fte . d e c arb ono , O 2 , T , et c .) Integra ndo la ec uac i n 2 s e o b tiene: Xt = o b ien l nX t = ln X o + m t (4 )
14

Xo em

(3 )

otro parmetro importante a conocer en un proceso en batch es el tiempo de duplicacin de la biomasa (td), por la ecuacin 4 podemos reemplazar t = td y Xt= 2 Xo ln 2Xo = lnXo + m td (5)

m =

ln 2 td

0.693 td (6)

td =

0.693

(7)

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Influencia del s ubstra to limitante en el crecimiento microbia no la biomasa final o btenida es un proces o d e c ultivo es ta d ada por la relacin d e rend imiento: Y XS =

DX D s

(8 ) Y xs= gr. d e pes o seco de b io masa o btenida por gr. de sub strato cons umido . El primero en establec er una relaci n entre la co ncentraci n d e s ubs trato limitante y la velo cid ad d e crecimiento fue Monod y hallo que s e correspond a co n una hip rb ola rectangular similar a la des crip ta p or Michaelis -Menten para un p roceso enzimtico estableciendo la siguiente relacin:

m =

m max
KS + s

s (9 )

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Representacin grfica del modelo de Monod de sustrato limitante

Donde m max = es la mxima velocidad de crecimiento; s es la concentracin de substrato limitante y Ks= constante de saturacin de substrato y es igual a la concentracin de substrato que da una velocidad de crecimiento de m max /2. Si reemplazamos la ecuacin 9 dentro de la 2 queda: dx dt

m max s X
(KS + s) (10)

Si s>> Ks, s/(Ks+s) tiende a uno entonces el organismo crece a mmax conforme s tiende a Ks entonces s/(Ks+s) tiende a cero reduciendo el crecimiento.

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Clculo de parmetros cinticos en cultivos en batch Graficando ln X vs. tiempo el clculo de la recta de regresin en la zona de crecimiento exponencial es igual a m . Tambin es posible calcular la fase lag de acuerdo a lo que se describe en el grfico.

Figura 2: Grfica ln X vs. tiempo, calculo de m y de la fase lag

El clculo de KS y mmax es posible estimarlo reordenando la ecuacin 9 de Monod segn Lineweaver-Burk 1

KS

mmax s

mmax

(11) de tal manera que graficando 1/m vs. 1/s se obtiene una recta cuya pendiente es KS/ mmax y la interseccin en el eje x es igual a -1/KS y la interseccin en el eje y es igual a mmax . Otra modificacin fue realizada por Langmuir, s

KS

mmax

mmax

Clculo de mm y Ks
Velocidad especfica de crecimiento en funcin de la concentracin de sustrato ( recproca).

Energa de activacin para el crecimiento microbiano.

Efecto de la temperatura sobre mm de un cultivo aerbico en glucosa de A. aerogenes

Cintica de crecimiento en cultivos con plsmidos

Posibilidad de prdida del plsmido Mutacin del plsmido Diferencia de velocidad de crecimiento entre poblacin con y sin plsmidos

X+: poblacin con plsmidos X-: poblacin sin plsmidos

dX+/dt = (1 - p) m+ X+

dX-/dt = p m+ X+ + m- Xp: probabilidad de prdida de plsmidos

F = X+/X+ + X-

F: fraccin de clulas con plsmidos.

F = 1 - - p/1 - - 2n( + p - 1) p = m- / m+ n = m+ t / ln 2

Relacin de velocidad de crecimiento en poblaciones libres y que portan plsmidos.

Fraccin de la poblacin que porta plsmidos en un cultivo en batch despus de 25 generaciones

Otros modelos de crecimiento

El modelo logstico describe el crecimiento de una poblacin al momento del inicio del crecimiento de acuerdo a la siguiente ecuacin:

mmax [1-X / Xf ]
(17)

al inicio X<<Xf y [1-X / Xf ] tiende a 1 entonces el organismo crece a mmax en cambio cuando X = Xf [1-X / Xf ] tiende a 0 y dx/dt =0 entonces el crecimiento se detiene debido que la poblacin llega a su densidad mxima. si queremos evaluar entonces la velocidad de consumo de substrato reemplazamos por la ecuacin 11 y queda: _ ds = mmax [1-X / Xf ] X dt YXS (18)

Velocidad de consumo de substrato Un incremento de biomasa dx se deber a consumo ds y esa relacin esta dada por la formula de rendimiento YXS = dx ds

(13) entonces la velocidad de consumo de substrato si reemplazamos por la ecuacin 2 se transforma en: _ ds dt =

m X
YXS (14)

o bien _ ds dt = qS X (15) donde qS es la velocidad especfica de consumo de substrato qS =

m
YXS

(16) qS tiene unidades de gr. de substrato limitante consumido por gr. de biomasa por tiempo (gr. sust * gr X -1 * h-1).

Otros modelos
Inhibicin por sustrato Andrews y Noack

m = mm

1
Ks + S + S2 Kis

Inhibicin por producto Jerusalimsky y Neronova

m = mm
S Kip

Ks + S Kip + P