BACTERIOLOGA MDICA

BACTERIOLOGIA MDICA

HEMOCULTIVO

PRESENTA: QBC. MARTN GUSTAVO ECHEVERRIA JACOBO

- QBC. Martn Echeverra Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Bacteremia Situacin en la cual se encuentran bacterias circulando en la sangre. Presencia de bacterias en el flujo sanguneo, es una situacin frecuente y normalmente no provoca sntomas.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Septicemia: Es una infeccin en el flujo sanguneo.

La infeccin del torrente sanguneo o bacteriemia, constituye un cuadro clnico grave. Actualmente no se le considera una enfermedad de notificacin obligatoria. La septicemia es una infeccin grave y potencialmente mortal que empeora en forma muy rpida y que puede surgir de infecciones en todo el cuerpo, incluyendo infecciones en los pulmones, el abdomen y las vas urinarias. Puede aparecer antes o al mismo tiempo de infecciones seas (osteomielitis), del sistema nervioso central (meningitis), corazn (endocarditis) u otros tejidos.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Los factores asociados a la presencia de bacteriemia

Presencia de calofros. Fiebre mayor a 38.3C. Enfermedades subyacentes severas . Cuadros de abdomen agudo. Antecedente de drogadiccin intravenosa. Infecciones que producen bacteriemias continuas (endocarditis infecciosa, infecciones intravasculares, etc).

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Shock sptico Cuando la sepsis desemboca en una situacin que puede ser mortal.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Vas de entrada
Es a travs de los vasos linfticos. La entrada directa ocurre en infecciones intravasculares como:

Endocarditis Flebitis supurativa Catteres intravenosos infectados Catteres arteriales permanentes

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

La sepsis puede causar infecciones en distintos puntos del cuerpo (llamada infeccin metastsica) si no se trata de inmediato. Las infecciones pueden asentarse en el:

Revestimiento del cerebro (meningitis). Saco que rodea el corazn (pericarditis). Revestimiento interno del corazn (endocarditis),. Huesos (osteomielitis). Articulaciones.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

El diagnstico
El diagnstico de sepsis es probable cuando una persona con una infeccin localizada en cualquier parte del cuerpo de pronto tiene mucha fiebre.

Si la persona tiene una sepsis, por lo general, el nmero de glbulos blancos en la sangre suele aumentar.
Los cultivos de sangre permiten aislar e identificar al microorganismo infectante.

Sin embargo, es posible que las bacterias no crezcan en un cultivo de sangre, particularmente si el enfermo est tomando antibiticos.
Tambin se toman muestras para cultivo del material expulsado de los pulmones mediante la tos (esputo), de la orina, de las heridas y de los puntos donde los catteres penetran en el cuerpo.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Muestras

Sangre

perifrica

Diagnstico bacteriolgico
Hemocultivo

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Hemocultivo

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Hemocultivo

Un hemocultivo es un examen para determinar si microorganismos como bacterias, micobacterias u hongos estn presentes en la sangre. Se coloca una muestra de sangre en una preparacin especial de laboratorio y se incuba en un ambiente controlado por 1 a 7 das.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Hemocultivo
Clasificacin

Tipo de paciente

Toma de la muestra

Tipo de microorganismo

Segn la metodologa

Peditrico

Centrales

Bacterias aerobias Bacterias anaerobias Bacterias fastidiosas

Manuales

Adulto

Perifricos

Semi-automatizados

Inmunocompetente

Automatizados

Inmunosuprimido

Micobacterias

Hongos El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

SISTEMAS DE HEMOCULTIVOS SEGN METODOLOGA

Diferentes metodologas se traducen en distinto rendimiento en cuanto a sensibilidad y rapidez en la deteccin de las bacterias en el torrente sanguneo. En general existen 3 tipos de sistemas de hemocultivos: Manuales o convencionales Semi-automatizados: Lisis-centrifugacin Automatizados

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Comparacin de los Sistemas Manuales Vs los Automatizados

Diferencias tcnicas SISTEMAS MANUALES

INOCULACIN DE LA MUESTRA (10ml)

BOTELLA CON MEDIO DE CULTIVO (aerbico anaerbico)

DETECCIN VISUAL DEL DESARROLLO MICROBIANO (1 vez al da por 7 das: turbidez, hemolisis, gas, velo, etc)

Tincin Gram Resiembra

Resiembra ciega a las 24 hrs y 7 dias

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

HEMOCULTIVOS AUTOMATIZADOS

INOCULACIN DE LA MUESTRA (10ml)

BOTELLA CON MEDIO DE CULTIVO (aerbico anaerbico micobacterias - resinas)

DETECCIN VISUAL DEL DESARROLLO MICROBIANO

(radiomtrico, espectrofotomtrico, colorimtrico, fluorimtrico)

COMPUTADOR: ndice de crecimiento Grfico de crecimiento

Descarga de botellas Tincin de Gram-Resiembra Eliminacin de botellas (sin subcultivo)

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Manuales o Convencionales

DESVENTAJA: Mayor riesgo de contaminacin por la manipulacin de las botellas o al realizar los procedimientos de tincin y traspasos.

El medio de cultivo debe contener 0,025 a 0,05% de polianetol sulfonato de sodio (SPS) como anticoagulante. SPS: inhibe la actividad bactericida del suero contra muchas bacterias y la fagocitosis, inactiva el complemento, neutraliza lisozimas y algunos antibiticos del grupo de aminoglicsidos. Peptostreptococcus, Gardnerella y algunas cepas de Neisseria spp son inhibidas por el SPS, este efecto puede ser neutralizado suplementando el medio con gelatina 1,2%. En los sistemas manuales la eleccin del medio de cultivo, la temperatura y atmsfera de incubacin es decisin del microbilogo basado en el diagnstico clnico

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Sistemas Semi Automatizados: Lisis-Centrifugacin Consiste en un tubo de lisis. Contenido: Polianetol sulfonato de sodio como anticoagulante, Saponina como agente ltico de eritrocitos, leucocitos y macrfagos, Polipropilenglicol como antiespumante y un fluoroqumico inerte de alta densidad. La muestra se centrifuga a alta velocidad permitiendo la concentracin de microorganismos en el sedimento que se siembra en medios de cultivo especficos.
Este mtodo permite mejorar en un 25 a 50% la deteccin de hongos levaduriformes y filamentosos, se considera el mtodo de eleccin en bacteriemias por Micobacterias

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Sistemas Automatizados

Poseen modernos sistemas de deteccin microbiana. Consisten bsicamente en botellas con diversos medios de cultivo (aerbicos, anaerbicos, hongos, micobacterias y con resinas que captan antibiticos). Se incuban y agitan constantemente las muestras. Se basan en la deteccin de productos del metabolismo bacteriano mediante tcnicas:

Radiomtricas Espectrofotomtricas Fluoromtricas Colorimtricas

ndices y/o grficas de crecimiento microbiano

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

TOMA DE LA MUESTRA

El mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak febril. Se recomienda en forma arbitraria obtener dos hemocultivos en 24 horas separados por 30 a 90 minutos. O bien: Obtener los dos hemocultivos al mismo tiempo, de diferentes sitios de puncin, si se trata de un paciente que va a requerir inicio inmediato de antimicrobianos. Mtodo de Obtencin de la Muestra

La muestra debe obtenerse por puncin perifrica (venosa o arterial), siempre por una nueva puncin. Debe ser la primera muestra en caso de indicacin de otros exmenes.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

Preparacin de la piel

*Este aspecto es esencial para evitar la contaminacin de los

hemocultivos*.

Despus de la palpacin de la vena, la piel debe ser lavada con povidona yodada, lavador quirrgico, con gluconato de clorhexidina al 2-4% o con agua y jabn. La desinfeccin se realiza con povidona yodada, tintura de yodo o con clorhexidina alcohlica, aplicado en forma excntrica desde el sitio de puncin elegido. Se debe esperar que el antisptico se seque para que ejerza su accin.
Siempre la puncin debe ser efectuada con guantes, que deben ser estriles cuando se requiere nuevamente la palpacin de la vena.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

Volumen de la muestra

Dado que la mayora de las bacteriemias son de baja magnitud (< 1 a 10 ufc/ml) a mayor volumen de muestra obtenido, mayor es la sensibilidad del hemocultivo. *Se sabe que por cada ml adicional de muestra que se inocule en la botella aumenta la positividad entre un 2 a 5%.*

RECOMENDACIONES : obtener el mximo de volumen que la botella sea capaz de tolerar manteniendo la relacin 1:5 a 1:10 entre la muestra y el volumen de medio de cultivo. Esta dilucin permite neutralizar las propiedades bactericidas de la sangre y de los agentes antibacterianos que puedan estar presentes en la muestra. EL VOLUMEN VARIA SEGN LA EDAD: 10 ml ----- Adultos y adolescentes 1 2 ml ----- RN 2 3 ml ----- Lactantes (1 mes a 2 aos) 3 5 ml ----- nios 2 aos

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

INOCULACIN DE LAS BOTELLAS Sistemas automatizados Se debe descontaminar el tapn de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar que se seque, ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de ste. Sistemas manuales Se debe destapar el frasco para inocular la muestra. Este procedimiento tiene riesgo de contaminacin por lo que se debe tener mxima precaucin en no tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Mantencin y transporte de las botellas

Mantener a temperatura ambiente y enviar rpidamente al laboratorio. Nunca refrigerar.

Las muestras se transportan a temperatura ambiente. La incubacin a 35C debe realizarse lo antes posible, pudiendo darse como mximo de tiempo 2 horas desde que se tom la muestra.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Procedimiento (resumen)
Retirar los tapones externos de los frascos y desinfectarlos con alcohol iodado, dejndolo secar al menos un minuto. Localizar por palpacin la vena que se va a puncionar. debe utilizarse una vena distinta para cada extraccin. Cuando no haya venas accesibles puede realizarse la extraccin de sangre arterial.

No son adecuadas las muestras procedentes de catter, solamente en caso de que se sospeche infeccin del propio catter.
Desinfectar con alcohol la zona de piel de unos 10 cm. de dimetro. Se comenzar por el centro y se irn haciendo crculos concntricos hacia el exterior. Repetir el paso anterior pero con el alcohol iodado, dejndolo secar durante un minuto.
El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Extraer la sangre sin tocar en ningn momento el campo desinfectado. Si fuera necesario palpar nuevamente la vena se utilizarn guantes de goma estriles o se desinfectarn los dedos de la misma manera que la piel del paciente. La cantidad de sangre a introducir en cada frasco viene determinada por el modelo utilizado en cada hospital, entre 15-20 ml por toma en adultos y 1-3 ml en nios.

Como norma general es adecuado que la sangre mantenga una proporcin 1:10 con el medio de cultivo. Es decir, para un frasco de 100 ml, introducir 10 ml. de sangre.
En caso de neonatos y nios pequeos en que no se pueden obtener volmenes grandes de sangre es suficiente una cantidad de 1-5 ml, que se introduce en un solo frasco. Introducir la sangre en los frascos evitando que entre aire en el frasco para cultivo en anaerobiosis. La ventilacin se realizar en el laboratorio de Microbiologa. Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen. Introducir los frascos a 35C - 37C.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Nmero de muestras: tres hemocultivos por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano. El intervalo entre las extracciones debe ser superior a una hora cuando sea posible, pero cuando exista una gran urgencia en iniciar el tratamiento, este intervalo puede acortarse hasta 15 minutos. El desarrollo bacteriano se detecta por turbidez del medio de cultivo; colonias visibles en la capa sedimentada de sangre, o sobre sta. Hemlisis de la sangre , produccin de gas. Cuando se obtiene un cultivo positivo se debe efectuar una tincin de Gram Los medios de cultivo selectivos de traspaso deben estar basados en el resultado de la tincin de Gram, segn la morfologa encontrada es el medio selectivo para subcultivo.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Incubar a 35 C T. de gram

Sangre anaerob. Agar Chocolate,CO2 sangre EMB. Bacterias:

Staphylococcus aureus Staphylococcus coag neg,Streptococcus grupo B Streptococcus viridans Streptococcus pneumoniae Anaerobios Neisseriae meningitis Neisseriae gonorrhoeae Hemophylus influenzae Brucella Salmonella Escherichia coli
Observar cada da por 5 das E identificar

2 O 3 Muestras de sangre perifrica asptica.

3 frascos con 10 ml. De sangre por muestra

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

COCOS

Gram +

Gram En diplos o cadenas

COCOBACILOS

Racimos

Antobiograma en agar chocolate y CO2 BACILOS Gram + Gram -

DNASA y /o coagulasa

Optoquina, bilis esculina, CINa al 6.5%

Antobiograma

Antobiograma

Esculina. Antobiograma en agar sangre

Pruebas bioquimicas de identificacin y antobiograma

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

PROTOCOLO A SEGUIR SEGN CONDICIN CLNICA

Condicin clnica
Adultos y adolescentes: -Septicemia severa, meningitis, osteomielitis, artritis, neumona. - Endocarditis infecciosa. - Endocarditis Infecciosa. - Bacteriemia de origen desconocido (paciente con tratamiento).

Protocolo
- Dos cultivos previo al tratamiento antimicrobiano. - Dos cultivos en 24 hrs. -Dos cultivos 1 a 2 hrs. antes del tratamiento. - Dos hemocultivos en 24 horas. Si persisten negativos a las 24 horas, obtener otros dos hemocultivos. -No ms de tres cultivos.

Comentarios
-10 ml de sangre de cada brazo. - Tomar dos muestras al comienzo de la fiebre. Si los primeros son negativos, obtener un segundo set a las 24-48 horas. -Tomar muestra justo antes de administrar una nueva dosis de antibitico. - Puede haber bacteriemia 1 hora antes de la fiebre - Dos cultivos pueden ser suficiente para diagnstico de bacteriemia en RN

- Episodios febriles. Nios menores: - Neonatos a 1 ao. - 1 a 6 aos.

- 0,5 a 1,5 ml de una vez - 1 ml por ao de edad, en tiempos diferentes.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

EXAMEN DE LOS CULTIVOS Observacin Macroscpica

Microorganismos asociados al aspecto macroscpico de hemocultivos
Aspecto macroscpico Hemlisis Microorganismo asociado Streptococcus, Staphylococcus, Listeria spp. Clostridium, Bacillus spp Bacilo gramnegativo aerobio, Staphylococcus, Bacteroides spp. Bacilo gramnegativo aerobio, anaerobios Pseudomonas spp., Bacillus spp., levaduras Staphylococcus aureus Staphylococcus, Streptococcus

Turbidez Formacin de gas Formacin de velo Cogulo Colonias visibles (puntiformes)

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

SELECCIN DEL MEDIO DE CULTIVO Dependiendo de la Tincin de Gram

Medios de cultivo utilizados, segn tincin de Gram Gram Cocacea grampositiva Bacilo grampositivo Cocacea gramnegativa Bacilo gramnegativo X X AS Ch X X X X X X Mac CNA X X X Ana X X X X X Bruc X

AS=agar sangre Ch=agar chocolate Mac= agar Mac Conkey CNA= agar Columbia-colistin-cido nalidixico Ana=agar anaerobio Bruc=Agar Brucella

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

HEMOCULTIVOS PARA MICROORGANISMOS ESPECIALES

Micobacterias Mycobacterium tuberculosis cursa con cortos perodos de bacilemia, por lo que su recuperacin a partir de una muestra de sangre es menos frecuente que M. aviumintracelullare y otras micobacterias no tuberculosas.

El mtodo de lisis-centrifugacin (recomendado) Las micobacterias son microorganismos intracelulares y la lisis celular permite la liberacin de las micobacterias lo que favorece su desarrollo.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA

Hongos Las fungemias constituyen una infeccin cada vez ms frecuente principalmente en pacientes inmunosuprimidos.

El mtodo de lisis-centrifugacin (recomendado) Recupera levaduras y hongos dimrficos

Las levaduras tambin se recuperan a partir de sistemas automatizados de hemocultivos, pero requieren subcultivo en medios adecuados y una incubacin prolongada.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Brucella spp
El mtodo de lisis-centrifugacin (recomendado) Es un mtodo de eleccin que recupera Brucella mejor que el tradicional mtodo de Castaeda.

En casos de sospecha clnica de Brucella:

Incubar la muestra ms de 7 das. En el caso de los sistemas automatizados, se recomienda el subcultivo ciego terminal a los 7 y 14 das.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Hacek

El trmino HACEK es un acrnimo para un grupo de bacilos gram negativos fastidiosos que incluyen a :
Haemophilus aphrophilus Actinobacillus actinomycetemcomitans Cardiobacterium hominis Eikenella corrodens Kingella kingae

Se recuperan en hemocultivos de pacientes con endocarditis infecciosa, aunque pueden aislarse a partir de otros focos infecciosos. Las recomendaciones para los hemocultivos son: Mantener la incubacin inicial por 7 a 14 das y efectuar subcultivo terminal a los 7 y 14 das.

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

Incubar a 35 C T. de gram

Sangre anaerob. Agar Chocolate,CO2 sangre EMB. Bacterias:

Staphylococcus aureus Staphylococcus coag neg,Streptococcus grupo B Streptococcus viridans Streptococcus pneumoniae Anaerobios Neisseriae meningitis Neisseriae gonorrhoeae Hemophylus influenzae Brucella Salmonella Escherichia coli
Observar cada da por 5 das E identificar

2 O 3 Muestras de sangre perifrica asptica.

3 frascos con 10 ml. De sangre por muestra

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo

BACTERIOLOGA MDICA

El saber de mis hijos har mi grandeza - QBC. Martn Echeverria Jacobo