Pasos de la Tcnica Histolgica Bsica

Toma de Material
Los mtodos ms utilizados son: Biopsias Necropsias Improntas Frotis de clulas superficiales Frotis de clulas sanguneas Animales de experimentacin Aplastados celulares

Fijacin

La fijacin debe realizarse lo ms rpido posible luego de tomada la muestra, para evitar los procesos de autolisis. Adems se debe escoger el mtodo ms adecuado al objetivo del estudio a realizar. Se pueden clasificar en los siguientes mtodos:

Por inmersin: pequeos trozos del tejido son sumergidos en el liquido fijador. Por perfusin: el lquido fijador se aplica por inyeccin vascular. Por vapores: consiste en utilizar lquidos fijadores que emitan vapores, se debe realizar bajo campana extractora de gases.

Deshidratacin

Luego de que la muestra ha sido fijada se debe eliminar el fijador y deshidratar. Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones acuosas con una concentracin de menor a mayor del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol etlico. La deshidratacin gradual se hace para evitar la deformacin de la morfologa del tejido, debido a la rpida salida del agua.

Aclaramiento

Posterior a la deshidratacin el tejido se debe sumergir en un lquido que sea miscible tanto en el medio de inclusin como en el medio de deshidratacin. El lquido comnmente utilizado es el xilol. Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el tejido se vuelve transparente.

Inclusin

Para poder obtener cortes delgados que puedan ser observados al microscopio ptico, los tejido deben ser incluidos en una sustancia de consistencia firme, la cual puede ser hidrfila o hidrfoba. Un medio hidrfobo que se puede utilizar es la parafina o el paraplast. Este ltimo es una parafina altamente purificada a la cual se le han agregado cantidades variables de polmeros especiales, lo cual le dar distinta dureza y plasticidad al taco de inclusin.

Corte

El taco obtenido en la inclusin se debe cortar en secciones lo suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato llamado micrtomo. Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el exceso de parafina, formando una pirmide truncada.

Corte

Los cortes que se van obteniendo se deben ir estirando, esto se puede realizar en un bao termoregulado (40-45 C). El estiramiento se basa en la dilatacin de la parafina producto del calor. Luego estos cortes se van recogiendo con un portaobjetos.

Tincin

Primero la parafina debe ser eliminada sumergiendo los portaobjetos con los cortes en un solvente orgnico que puede ser xilol. Luego los cortes deben ser hidratados pasando por una serie de graduaciones decreciente de alcohol etlico, hasta llegar a una solucin que sea 100% agua. Una vez rehidratado el tejido puede ser teido. Los colorantes ms utilizados son hematoxilina y eosina.

Montaje

Luego de teir el tejido este debe ser deshidratado nuevamente, para esto hay que pasarlo por una serie de alcoholes en grado ascendente. Posteriormente hay que pasar el tejido por xilol, de modo de hacerlo miscible con el medio de montaje. Finalmente se le agrega el medio de montaje y se le coloca el cubreobjetos, teniendo cuidado en no dejar burbujas.

Observacin al Microscopio

Observacin al Microscopio