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Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra Laboratrio de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral

Trabalho N 3: Preparaes a fresco

Objectivos: - Observao de clulas procariticas e eucariticas a fresco

- Avaliao da mobilidade bacteriana

Introduo: A identificao microbiana ser tanto mais fivel quanto maior o nmero de caractersticas de que dispusermos relativamente ao microrganismo em estudo. No que respeita s bactrias, alm da morfologia, tipo de agrupamento e reaco tinturial, a mobilidade um outro parmetro que poder auxiliar na sua identificao. Na maior parte das situaes, a mobilidade bacteriana conferida por flagelos, sendo possvel de observar ao microscpio ptico.

Para avaliar microscopicamente a mobilidade de bactrias vivas em soluo aquosa podemos


recorrer a dois tipos de tcnicas: (a) Tcnica entre lmina e lamela: apesar de simples e fcil de executar, est associada a facilidade de formar correntes de convexo, assim como da exsicao rpida do produto (b) Tcnica da gota pendente: em que a probabilidade de contaminao do operador est diminuda, permite uma observao mais prolongada, e elimina as correntes de convexo Deve ter-se em ateno que por vezes bactrias imveis, quando em meio aquoso, parecem movimentar-se de forma estranha e errtica. Estes movimentos so devidos aos movimentos Brownianos, resultantes dos movimentos aleatrios das molculas de gua contra as bactrias, e no devem, por isso ser confundidos com movimentos prprios das bactrias.

Microbiologia geral - FFUC

Preparaes a fresco

Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra Laboratrio de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral

Trabalho N 3: Preparaes a fresco

Tcnica entre lmina e lamela

Objectivo: Observao de clulas eucariticas (leveduras) em preparaes a fresco

Protocolo: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Esterilizar a ansa e o fio direito Limpar e secar uma lmina de vidro Flamejar a lmina Colocar uma gota de gua estril no centro da lmina Destapar o tubo contendo a cultura da levedura em estudo e flamejar o bucal do tubo Com o fio direito, tocar nas bactrias em cultura, e voltar a flamejar o tubo, antes de o tapar Suspender as bactrias na gota de gua que colocou na lmina Esterilizar o fio direito Colocar uma lamela sobre a suspenso obtida, evitando a formao de bolhas de ar Observar ao microscpio, primeiro com a objectiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado

11.

Registe os resultados na folha anexa

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Preparaes a fresco

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Disciplina: Microbiologia Geral

Trabalho N 3: Preparaes a fresco

Tcnica da gota pendente

Objectivo: Observar clulas procariticas em preparaes a fresco Avaliao da mobilidade bacteriana

Protocolo: 1. 2. Esterilizar a ansa e o fio direito Limpar e secar uma lmina de Koch

3.
4. 5. 6.

Preparar uma lamela


Com a ansa, colocar uma gota de gua estril no centro da lamela Esterilizar a ansa Com o auxlio do fio direito aplicar uma pequena poro de vaselina em dois cantos opostos da lamela

7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15.

Esterilizar o fio direito e deixar arrefecer Destapar o tubo contendo a cultura da bactria em estudo e flamejar o bucal do tubo Com o fio direito, tocar nas bactrias em cultura, e voltar a flamejar o tubo, antes de o tapar Suspender as bactrias na gota de gua que colocou na lamela Esterilizar o fio direito Inverter a lmina de Koch e centrar a depresso da lmina com a gota presente na lamela Pressionar ligeiramente a lmina contra a lamela Inverter a lmina, ficando a lamela voltada para cima, com a gota suspensa Observar ao microscpio, primeiro com a objectiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado

16.

Registe os resultados na folha anexa

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Preparaes a fresco

Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra Laboratrio de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral

Trabalho N 3: Preparaes a fresco

Aluno: ___________________________________________________________________ N de aluno: ______________ Turma: __________ Data: ___ / ___ / ___

Resultados:

Tcnica entre lmina e lamela: 1. 2. Desenhe o que observou

Espcie testada: ______________________________________

Trata-se de uma levedura ou de uma bactria? ______________________________________

3.

Que tipo de movimentos observou? ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________

Tcnica da gota pendente: 1. 2. 3.

Espcie testada: ______________________________________ Sim

A bactria em estudo mvel?

No

Trata-se de uma levedura ou de uma bactria? ______________________________________ Que tipo de movimentos observou? ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________

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Preparaes a fresco

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