UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

Facultad de Estudios Superiores Cuautitln Seccin de Tecnologa Farmacutica

Qumico Farmacutico Bilogo

Laboratorio de Desarrollo Analtico

Desarrollo de un mtodo analtico para la determinacin de contenido qumico de difenhidramina en jarabe

Equipo 3 Acua Garduo Josue Europa Rebollo Tania Franco Gonzalez Jose Antonio Lpez Hernndez Jaime Vega Barcelata Edgar

Viernes 30 de Noviembre de 2012

Desarrollar un mtodo analtico espectrofotomtrico mediante la aplicacin de fundamentos fsicos, qumicos y fisicoqumicos que permita cuantificar de manera precisa la cantidad de difenhidramina en una muestra farmacutica lquida (Jarabe).

OBJETIVOS PARTICULARES

Durante el desarrollo del mtodo analtico, proponer procedimientos para obtener aspectos importantes en la validacin del mtodo, teniendo como objetivo principal, la precisin de este. Al obtener la precisin, desarrollar procedimientos para la obtencin de otros aspectos importantes en la validacin de mtodos analticos como es: exactitud, linealidad y reproducibilidad. Para lo anterior, preparar un placebo cargado cuya composicin resulte lo ms parecido a la muestra farmacutica estudiada. Evaluar el contenido qumico de difenhidramina en muestras farmacuticas especficas de jarabe de la marca BRUDIFEN, de laboratorios Bruluart.

Problema analtico Seal analtica Respuesta analtica Resultado analtico

Se desconoce la cantidad de difenhidramina en una muestra farmacutica (jarabe)

Conjunto de cambios significativos que nos indican la presencia del analito (absorbancia)

La interpretacion de las seales obtenidas

mg de DFH en 100mL de jarabe BRUDIFEN

Peso molecular: 255.39 Pka: 8.9 log Po/w: 3.16 log K:1.22

250 nm
Solubilidad: Fcilmente soluble en metanol, soluble en alcohol; muy ligeramente soluble en agua y cido actico glacial; casi insoluble en ter dietlico. La difenhidramina es una amina terciaria con un pKa de 9.0 (de Roos et al., 1970), bloquea el efecto de la histamina a nivel del receptor transmembranal H1

120

100

80

60 BH B 40

20

0
0 2 4 6 8 pH 10 12 14 16

Formulacin BRUDIFEN Cada 100 ml de JARABE contienen: Clorhidrato de difenhidramina 0.25 g Vehculo, c.b.p. 100 ml.

Formulacin Benadryl

Procedimiento para la separacin de la muestra.

3mL

ESPECIFICIDAD DEL MTODO

Selectividad (o especificidad) = aptitud de un mtodo para determinar exacta y especficamente el analito de inters en presencia de otros componentes en la matriz de la muestra bajo las condiciones establecidas del Especificidad = aptitud de un mtodo para medir solamente lo que se busca medir Es la aptitud de un mtodo para valorar inequvocamente el analito en presencia de componentes que se sospecha que puedan estar presentes (impurezas, degradantes, matriz, etc.) (ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95)

Espectro de absorcin de la DFH a una concentracin de 46 mcg/mL en HCL 0.1 N

2.5

1.5

0.5

0 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310

Long de onda 220 (nm)

Espectro de absorcin de la muestra extrada de concentracin terica 46 mcg/mL en HCl 0.1 N

2.5

1.5

0.5

0 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310

Espectros de absorcin de un estndar de DFH de concentracin 46 mcg/mL en HCl 0.1 N (en azul), y una muestra proveniente de la extraccin, con la misma concentracin terica.

DETERMINACIN DE LA EFICIENCIA DE LA EXTRACCIN.

Para determinar la eficiencia de la extraccin, se prepar un placebo cargado con una cantidad conocida de DFH, en base a la reportada en el marbete. Las proporciones de excipientes y principio activo se muestran en la siguiente tabla:

DFH Glicerina Popilenglicol Sacarosa Metil Parabeno Propil Parabeno

Agua destilada

P. Activo Cosolvente Cosolvente Edulcorante Conservador Conservador Colorante Saborizante Solvente

625 mg 7.5 mL 7.5 mL 120 0.25 g 0.125 0.25mL c.s.p 250 mL

Se prepara un estndar de concentracin: 46.5 mcg/mL de DFH.

Resultados obtenidos de la extraccin de difenhidramina a placebo cargado. Absorbanci Solucin a 1 1.4724 2 1.4547 3 1.4674 4 1.4653 5 1.4645 6 1.5206 Std 46.5 mcg/mL Conc. (mcg/mL)

mg extrados mg tericos % extrado 38.45 41.34206872 34.4517239 89.6013626 38.45 40.84508786 34.0375732 88.5242476 38.45 41.20167864 34.3347322 89.2970929 38.45 41.14271481 34.2855957 89.1692995 38.45 41.1202524 34.266877 89.1206164 38.45 42.69542902 35.5795242 92.5345232 Promedio 89.70% Desvest C.V
0.014296843 1.592615572

1.6561

Se puede observar, que la extraccin tiene una eficiencia del 89.70%, la cual ser considerada en las extracciones a la muestra.

VALIDACION DEL METODO ANALITICO

La validacin de un mtodo analtico es un proceso de evaluacin sistemtico para demostrar que el mtodo cumple con los requisitos necesarios para el uso que se le va a dar.

QU SE NECESITA PARA UNA VALIDACION?

instrumentos

calificados y calibrados

*Mtodos documentados

*Estndares de Referencia confiables

*buenas tcnicas de muestreo * Analistas calificados

Precisin
Es el grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea de producto o de una referencia. Un analista debe preparar 6 soluciones a la concentracin del analito que represente la concentracin de referencia utilizada. Preparadas por dilucin o por pesadas independientes.

Resultados

Solucin 1 2 3 4 5 6
n=6 Promedio= 1.47415 Desvest= 0.02347754 % C.V= 1.59261557

Absorbancia
1.4724 1.4547 1.4674 1.4653 1.4645 1.5206

Criterios de aceptacin: El % C.V no debe exceder del 2%

OPTIMIZACIN DE LA EXTRACCIN.
A pesar de haber obtenido la precisin del mtodo satisfactoriamente, la eficiencia de la extraccin era del 89.70%, por lo cual se efectuaron modificaciones a la metodologa de la extraccin para evitar la prdida del principio activo durante la misma. Entre las cuales se incluyeron. Uso de tapones de plstico hermticos. Cambio de llaves y empaques en embudos. Aumentar el tiempo de agitacin de 1 a 2.5 minutos para favorecer las reacciones cido base, y la separacin de fases. Empleo de perlas de ebullicin durante el desecado (se evita que haya salpicaduras fuera del vaso)

NOTA: SE REALIZ EN PLACEBO CARGADO.

Se prepar un std de 43mcg/mL

EXACTITUD
CUALIDAD DE UN MTODO PARA PROPORCIONAR RESULTADOS ANALTICOS ACORDES AL CONTENIDO REAL DE LA MUESTRA. DETERMINACIN: A)SE CONOCEN LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA Y ES POSIBLE PREPARAR UN PLACEBO ANALTICO.
B)NO SE CONOCEN LOS COMPONENTES DE LA MUESTRA. PREPARAR

SE DEBEN

6 MUESTRAS ADICIONADAS.

Placebo analtico adicionado 1 2 3

Cantidad adicionada (g) 38.54 38.53 38.61 38.54 38.70 38.74

Cantidad recuperada (g) 37.56 37.58 37.64

% recobro (y) 97.44438199 97.52367685 97.49617009

(y)2 9495.40758 9510.86755 9505.50318

4
5 6

37.75
37.72 37.55

97.95104638
97.47370213 96.92134306

9594.40749
9501.12261 9393.74674

Prom recobro Desvesta C.V suma suma y2 n IC

IC-

97.46838675 0.327612731 0.336122041 584.8103205 57001.055 6 97.81225116

97.12452235

El intervalo de confianza incluye al 97%.

El IC (u) debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del porcentaje de recobro se incluya en el intervalo: 97-103% si el mtodo es espectrofotomtrico El CV del % de recobro: No mayor a 3% si es qumico o espectrofotomtrico.

LINEALIDAD DEL SISTEMA.

* Es la cualidad que tiene el mtodo para cuantificar confiablemente al analito sin importar la proporcin en la que se encuentre con respecto al resto de los componentes de la mezcla. * Se debe aleatorizar su preparacin y su lectura. * Se preparan a partir de un stock (una sola pesada) y se realiza el mismo numero de diluciones para los 5 niveles de concentracin. * Criterios de aceptacion: r2 0.98 b= 0 IC (m) no debe incluir el cero

Linealidad del sistema: Se prepararon 5 niveles de concentracin por triplicado de la solucin de referencia, a partir de un stock. La concentracin central representa al 100% en la muestra procesada para su medicin.

mcg/ml (X) 16 16 16 32 32 32 48 48 48 64 64 64 80 80 80 suma desv std cv promedio r r2

abs (y) 0.5566 0.5294 0.5227 1.0469 1.0337 1.042 1.5502 1.554 1.5336 2.0218 2.0248 2.0458 2.4314 2.4312 2.421 22.7451

x2 256 256 256 1024 1024 1024 2304 2304 2304 4096 4096 4096 6400 6400 6400 42240

y2 0.30980356 0.28026436 0.27321529 1.09599961 1.06853569 1.085764 2.40312004 2.414916 2.35192896 4.08767524 4.09981504 4.18529764 5.91170596 5.91073344 5.861241 41.3400158

xy 8.9056 8.4704 8.3632 33.5008 33.0784 33.344 74.4096 74.592 73.6128 129.3952 129.5872 130.9312 194.512 194.496 193.68 1320.8784

x/Y 28.7459576 30.2228938 30.6102927 30.5664342 30.9567573 30.7101727 30.9637466 30.8880309 31.2989045 31.6549609 31.6080601 31.2836054 32.9028543 32.905561 33.0441966 468.362429 1.12661595 3.60815432 31.2241619 0.99885498 0.99771127

2.5 y = 0.0298x + 0.0844 R = 0.9977 2

1.5

0.5

0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Sum Y2-(b1Sum xy) b0*SumY sy/x (SUM X/N) 2 1/SUM x2

Sb1

IC + IC-

4.35542063 2.7066669 4.147215484 2.036471331 2304 2.36742E-05 4.82119E-05 0.025104138 0.027895862

La r2 result mayor a .98, sin embargo la ordenada al origen no fue de 0, y el intervalo de confianza incluye al cero.

CUANTIFICACIN EN JARABE COMERCIAL

. Para la cuantificacin, se consider que la eficiencia de la extraccin es de 97.46%..

solucion

Concentracin absorbancia (mcg/mL) 1.6046 1.5686 1.6046 1.6039 1.6043 1.5476 1.6412 44.9742 43.9651 44.9742 44.9545 44.9658 43.3766 46

mg mL mta reales

mg por cada 100mL

1 2 3 4 5 6 std

38.4552 15.6626 245.5231 37.5925 15.4970 242.5787 38.4552 15.6464 245.7769 38.4385 15.6233 246.0329 38.4480 15.6325 245.9488 37.0892 15.6395 237.1512

98.21 97.03 98.31 98.41 98.38 94.86

promedio

97.53

243.83 DFH mg por cada 100 mL de jarabe 97.53% contenido qumico.

CONCLUSIONES
*Se presentaron buenos porcentajes de precisin (DFH 1.59%), y exactitud (96.74%) * A pesar de haber obtenido la precisin del mtodo satisfactoriamente, la eficiencia de la extraccin era del 89.70%, por lo cual se efectuaron modificaciones a la metodologa de la extraccin para evitar la prdida del principio activo durante la misma. * En cuanto a la linealidad del sistema la r2 result mayor a .98, sin embargo la ordenada al origen no fue de 0, y el intervalo de confianza incluye al cero. * Se realiz una cuantificacin de DFH en una muestra farmaceutica comercial, tomando en cuenta que para la cuantificacin, se consider que la eficiencia de la extraccin es de 97.46% dando como resultado un 97.53 % 243.83 mg/dL lo cual est dentro de las especificaciones marcadas para este principio activo en jarabes.

El mtodo propuesto para la determinacin de DFH en jarabe demostr ser adecuado ya que presentan una precisin y exactitud apropiadas, por lo que podria

ser adecuado para el anlisis de DFH en proyectos posteriores.

BIBLIOGRAFA: -FEUM Dcima edicin, Mxico (2011) Vol. 1 y

vol. 2. -Colegio nacional de quimicos farmaceuticos biologos mexico a.c. guia de validacion de metodos analiticos. -http://www.drugbank.ca/drugs/DB01075 -USP 35 NF 30 Formulario Nacional Vol. 2 (2012)