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Bom Jesus-PI

Introduo Genmica
As primeiras evidncias surgiram em 1944; Diversos estudos mostravam como era a molcula de DNA; Em 1953, WATSON & CRICK determinaram a estrutura do DNA.

O que genoma

Genoma o conjunto de sequncias de DNA de um ser vivo. A genmica

Rene os mtodos para se revelar e analisar estas


sequncias.

Classificao Genmica
1.Genmica Estrutural: -Identificar, isolar, localizar e caracterizar o conjunto de gene de um organismo (genoma). 2. Genmica Funcional: -Descrever a funo biolgica dos genes mediante o conhecimento de como eles interagem, para definir um fentipo determinado. 3. Genmica Comparativa: -Comparao e estudos da evoluo dos genomas.

Sequenciamento do DNA
a identificao da ordem exata dos pares bases (A,T,G e C) em um segmento de DNA.

Importncia: O conhecimento da sequencia de bases de um gene fornece importantes informaes sobre sua estrutura, funo e relao evolutiva com outros genes.

Mtodos de Sequenciamento do DNA


Um dos mtodos mais utilizado o chamado mtodo didesoxi conhecido tambm como de terminadores de cadeia ou de Sanger; Consiste em identificar, continuamente e sequencialmente durante o processo, o ltimo nucleotdeo incorporado na extremidade de alongamento da cadeia;

Processo de sequenciamento de DNA


Mapeamento; Criao de uma biblioteca; Preparao do modelo; Separao; Chamando Base; Anotao e Verificao.

Tcnicas de Identificao e Separao de Genes


PCR simples e em tempo real; Arranjos de alta densidade em membranas; Sage - Anlise seriada da expresso gnica; Eletroforese bidimensional; HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Espectrometria de massa; Microarranjos ou chips de DNA; Tomografia eletrnica; Anlise in silico; Nothern blot; Southern blot; Bioinformatica.

PCR simples
a tcnica que permite a amplificao do DNA ou DNA in vitro, utilizando-se basicamente de uma reao enzimtica catalizada pela polimerase, cuja atividade depende de ions Mg++. O PCR convencional no apresenta valores quantitativos.

PCR em tempo real


Consiste em amplificar cpias de DNA in vitro, usando os elementos bsicos do processo de replicao natural do DNA. o mtodo para rpida amplificao de sequncias especficas de DNA.

Sage - Anlise seriada da expresso gnica


uma tcnica para quantificar em larga escala a expresso de genes de uma dada populao de RNAs mensageiros. Esta tcnica gera etiquetas (tags) de cDNA que so concatenadas e sequenciadas para, em seguida, serem analisadas e anotadas.

Microarranjos ou chips de DNA


So lminas slidas, nas quais fragmentos de DNA fita simples, denominados de sondas, so depositados e imobilizados de forma ordenada e em reas especficas, chamadas de spots.

Os microarranjos (DNA chips) permitem o estudo de centenas de milhares de variaes genticas (SNPs) no genoma humano.

Nothern blot
uma tcnica usada para estudar a expresso gnica, ou seja, verificar se um determinado gene de um genoma ou no transcrito em RNA e quantificar isso. teis: Em estudo de expresso gnica. Estudo de diferentes tecidos. Estuda o padro temporal de expresso de genes durante o crescimento do indivduo.

Southern blot
Serve para verificar se uma determinada sequncia de DNA est ou no presente em uma amostra de DNA analisada. Aplicaes: Alteraes em um nico nucleotdeos; deteco de inseres, delees e rearranjos; ordenamento de fragmentos do DNA em um mapa fsico;

fragmentos de cromossomo.

Bioinformtica
Desenvolvimento de ferramentas e mtodos computacionais para anlise, manipulao, construo, edio e gerenciamento de dados biolgicos; Consiste principalmente na anlise computacional de sequncias de DNA, RNA e protenas.

Introduo Protemica
Proteoma
o conjunto de protenas expresso por um genoma em determinadas condies.

Protemica
o mtodo direto para identificar, quantificar e estudar as modificaes ps traducionais das protenas em uma clula, tecido ou mesmo organismos.

Introduo Protemica
A Protemica pode ser separada em diversos campos de acordo com o objetivo de

estudo:
Protemica da expresso;

Protemica Funcional;
Protemica Estrutural.

Funcionalidade da Anlise Protemica


1. Esclarecer as protenas envolvidas em rotas metablicas; 2. Identificar novos alvos farmacolgicos e marcadores biolgicos; 3. Identificao de molculas bioativas, a partir de extratos naturais; 4. Caracterizao das respostas celulares a determinadas drogas, doenas e mudanas ambientais.

Principais reas da Protemica


1. Microcaracterizao protica; 2. Manifesta diferena para comparao dos

nveis de protena;
3. Estudos das interaes protena-protena

(espectrometria de massas)

Tcnicas de identificao e separao de protenas


Eletroforese bidimensional Espectrometria de massas Citometria de fluxo Colorao fluorescente de protenas Western blotting Micro arranjos proticos Microscopia eletrnica de mega-complexos proticos Cromatografia Anlise in silico Bioinformtica

Eletroforese bidimensional
Consiste em separar molculas que possuem cargas; Separa com alta resoluo um grande nmero de protenas de uma amostra complexa;

Fluorescncia

Nitrato de prata

Etapas de Separao de Protenas da Eletroforese


Primeira Dimenso; Consiste em uma focalizao isoeltrica (IEF) onde as protenas so separadas pela sua carga eltrica em um gel de poliacrilamida com um gradiente de pH.

Etapas de Separao de Protenas da Eletroforese


Segunda Dimenso; As protenas previamente separadas pela IEF so submetidas a uma eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE).

Etapas de Separao de Protenas da Eletroforese


Estas separaes independentes atingem um alto nvel de resoluo;

As protenas so visualizadas diretamente no gel,


atravs de mtodos de colorao, resultando num

perfil bidimensional de pontos (spots) cada um


contendo muitas cpias de protenas.

Espectrometria de massas
uma tcnica analtica de estudos de molculas; Utilizada para identificar e caracterizar todas as protenas visualizadas na eletroforese sem que ocorra a destruio destas durante o processo.

Cromatografia
Consiste na passagem da protena atravs de uma coluna (fase estacionria) que desenhada para reter ou diminuir a velocidade da passagem da fase mvel onde esto as macromolculas (protenas).

A tcnica baseia-se numa propriedade particular, como o tamanho, carga ou afinidade qumica.

Cromatografia
As protenas podem ser separadas:
IEX cromatografia de troca inica

HIC cromatografia de interao hidrofbica


GF filtrao em gel

AC Cromatografia de afinidade

IEX

AC

GF

Western blotting
um mtodo usado para detectar uma certa protena em uma amostra, usando anticorpo especfico para aquela protena; Esta tcnica tambm d informao acerca do tamanho da protena.

Concluso
A crescente gerao de dados genmicos e o progresso tecnolgico no estudo de protenas fizeram com que a anlise protemica se tornasse uma ferramenta poderosa para estudos sobre a fisiologia e a gentica de vrios organismos.

Referncias Bibliogrficas
CARVALHO, L. G.; MAFFEI, E. M. D.; O Ensino da Transcrio e Traduo para Portadores de Necessidades Educativas Especiais Visuais e Pessoas de Viso Normal; Gentica na Escola, 2007. SILVA, A. M. S.; et all; Protemica Uma abordagem Funcional do Estudo de Genoma, Sade e Pesquisa e, Revista, Duque de Caxias, v. 2, n. 2, p. 01-10, 2007. MASSOCO, C. O.; CARMONA L.; BACCARIN R.Y.A. Tcnica de citometria de fluxo para avaliao da produo de espcies reativas de oxignio pelas clulas do lquido sinovial de eqinos, Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., v.58, n.4, p.665-667, 2006. SALVATO, F.; CARVALHO, M. C. C. G.; Mtodos e estratgias em protemica e suas aplicaes na rea vegetal, Cincia Rural, Santa Maria, 2010.

Referncias Bibliogrficas
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Referncias Bibliogrficas
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TEIXEIRA, K. Regina dos Santos; Genmica e protemica / Jean Luiz Simes Arajo. Seropdica: Embrapa Agrobiologia, 2006. 37 p.
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