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FEAD-MG

FACULDADE DE ESTUDOS ADMINISTRATIVOS DE MINAS GERAIS

Trabalho apresentado a disciplina de Imunologia do curso de graduao de Medicina Veterinria.

CITOMETRIA DE FLUXO
COMPONENTES

CITOMETRIA DE FLUXO
CITO Clula METRIA Medida FLUXO Movimento

CITOMETRIA DE FLUXO
uma tcnica de medio das propriedades de clulas em suspenso, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas uma a uma por um feixe de luz (LASER).

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Um citmetro de fluxo similar a um microscpio.

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Um citmetro de fluxo tem 5 principais componentes: um fluxo de clulas uma fonte de luz - normalmente so usadas lmpadas; lasers de alto poder; lasers de poder baixo e lasers de diodo. um detector e conversor de sistema analgico para digital (ADC) um sistema de amplificao um computador para anlise de sinais.

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As clulas que sero analisadas se acoplam a um fluorocromo, diretamente ou atravs de uma protena.

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Um ncleo de um linfcito marcados com fluorforos (fluorocromos) diferentes: DAIP (azul, manchando o DNA, e as seqncias especficas de dois pares de cromossomos, verde e vermelho (FISH).

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Posteriormente, as clulas suspendidas em uma soluo fisiolgica so injetadas em um sistema de fludos para serem expostas individualmente a um jato de luz focalizada. um mtodo de leitura rpido, que permite analisar um elevado nmero de clulas A citometria de fluxo permite, alm de caracterizar os antgenos expressos pelas clulas, analisar o tamanho e a granulosidade celular.

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Sistema fluido Sistema ptico Sistema eletrnico

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Fluorescncia Comprimento de onda gerado pela excitao dos fluorocromos, aps atingir absoro mxima da luz do laser. O detector de FL1 (fluorescncia 1) O detector de FL2 (fluorescncia 2) O detector de FL3 (fluorescncia 3)

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As informaes provenientes dos diferentes sensores, so agrupadas, formando as caractersticas de cada clula que so expressas em um histograma

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Marcadores "cluster of differentiation" (CD) e um nmero especfico para identificar estes marcadores celulares. Cada CD refere-se a uma determinada molcula de superfcie celular (antgenos especficos) caracterizada por um conjunto de anticorpos monoclonais.

CD3 citoplasma e membrana de timcitos CD4 clulas T perifricas maduras, moncitos e macrfagos CD8 clulas T citotxicas CD20 e CD 19 clulas B maduras CD45 clulas hematopoiticas CD56 clulas NK

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Aplicaes Hematologia veterinria Para a hematologia veterinria o grande potencial de aplicao clnica desta tcnica inclui a quantificao das clulas CD34+ como indicao da capacidade de reconstituio hematopoitica aps transplante de clulas-tronco avaliando-se resposta imunolgica e subpopulaes linfocitrias. Esta tcnica tem uma ampla aplicao nesta rea cientfica, incluindo a avaliao de clulas-tronco hematopoiticas, contagem diferencial de clulas da medula ssea, eritrcitos, leuccitos e plaquetas.

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Aplicaes Avaliao de clulas-tronco hematopoiticas Avaliao da medula ssea Avaliao de eritrcitos Avaliao dos leuccitos Avaliao de plaquetas

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Vantagens Medio em partculas individuais, em um nmero levado, com rapidez e preciso e com a possibilidade de medir mltiplos parmetros em todas as clulas. Deteco de partculas raras. Velocidade, preciso e convenincia (dezenas de amostras por dia). Procedimento muito pouco destrutivo (necessita de muito pouca quantidade de material). Anlise de grandes populaes de clulas.

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Desvantagens Necessidade de clulas em suspenso. Alto custo diagnstico e do aparelho Mo-de-obra especializada.

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Bibliografia Metodologia e aplicao da citometria de fluxo na hematologia veterinria Disponvel em: http://www.scielo.br/pdf/cr/v35n4/a40v35n4.pdf Consultado em : 10/04/2012 Aplicaes da citometria de fluxo no diagnstico oncohematolgico Disponvel em: http://www.sbpc.org.br/upload/congressos/2_Aplicacoes_da_citometria_de_flu xo_no_diagnostico_onco-hematologico.pdf Consultado em: 11/03/2012 Citometria de fluxo Disponvel em: http://www.biomedicinapadrao.com/2010/06/citometria-defluxo.html Consultado em: 11/03/2012