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Fixao Biolgica do Nitrognio FBN

nfase em leguminosas

1 Fotos: Stoller do Brasil Ltda.

A ANPII
A Associao Nacional dos Produtores e Importadores de inoculante uma entidade sem fins lucrativos que congrega produtores e importadores de inoculante, visando difundir o uso deste importante insumo biolgico, bem como desenvolver aes contnuas para o melhoria de qualidade dos produtos colocados disposio dos agricultores. Fundada em 1990, a entidade vem seguidamente realizando palestras e outras aes que levam ao agricultor brasileiro as mais atualizadas informaes sobre esta importante tecnologia. Com este curso, a ANPII leva a informao aos agrnomos, tcnicos agrcolas, estudantes de agronomia e agricultores, mostrando os aspectos tericos e prticos para a mxima rentabilidade das lavouras de leguminosas.
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Empresas filiadas ANPII

Para acessar as pginas das empresas, v at a pgina da ANPII: www.anpii.org.br

Estrutura do curso
O curso est estruturado de forma a dar uma continuidade entre todos os tpicos, visando a formao de um raciocnio lgico entre os diversos mdulos. Assim, importante que se termine e entenda perfeitamente o contedo de um mdulo antes de passar para o seguinte. Para navegar dentro dos mdulos, clique nos botes de Informao - - e ser encaminhado para outro slide com a ampliao das informaes. Aps, clicar no boto de retorno - - e retornar ao slide no qual se encontrava. Responda s questes do final do mdulo antes de acessar o gabarito, para ver se de fato entendeu bem. Se o acerto foi baixo, refaa o mdulo, procurando focar nas questes onde ocorreram os erros. Entre nas pginas cujos links se encontram nas aulas ou no final do curso. Eles trazem informaes sobre o assunto.

Mdulo 1
A importncia do nitrognio para o seres vivos. O N na natureza. O papel dos microrganismos. A transformao do N atmosfrico em N assimilvel pelas plantas.A fixao biolgica.

A importncia do nitrognio para a vida na terra


Todos os seres vivos necessitam de protenas para seus processos vitais. E como as protenas possuem elevadas quantidades de nitrognio, este nutriente essencial para todos os seres vivos da terra. Os animais herbvoros assimilam nitrognio atravs dos pastos, os carnvoros atravs da protena de outros animais e os onvoros, como o homem, tanto pelas protenas vegetais como animais. Nenhum ser vivo, a no ser alguma espcies de microrganismos, possui a capacidade de aproveitar o nitrognio existente no ar. Este um dos paradoxos da natureza. O N existe em abundncia na atmosfera: 79% do ar composto de nitrognio mas, ao mesmo tempo, este nutriente considerado escasso nos solos e caro para a alimentao.

A qumica do N na natureza
Esta indisponibilidade do N atmosfrico ocorre porque a forma como ele se encontra uma molcula com trplice ligao, tornando a molcula muito pouco reativa - N N. Para romper esta ligao h necessidade de grande quantidade de energia. Para transformar o N atmosfrico em amnia nas indstrias de fertilizantes, necessria uma temperatura de 500 C e 250 atm. de presso, alm do consumo de elevadas quantidades de gs natural. A reao: N2 + 3 H2 2 NH3

Quando ocorrem descargas eltricas na atmosfera, durante as tempestades, uma certa quantidade de molculas de N2 rompida e o nitrognio, a sob a forma de xidos, carreado pelas chuvas para o solo. Estima-se, de uma maneira geral, que este aporte do nutriente seja, em mdia, de 10 kg/ha, variando para mais em regies tropicais e para menos em regies frias.
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A transformao biolgica do nitrognio


Aparentemente paradoxal, por sua abundncia no ar e escassez no solo, o N conta com mecanismos biolgicos para sua incorporao ao sistema solo-planta. Um grupo de microrganismos, chamados diazotrficos, que habitam o solo e outros ambientes, possui a capacidade de, em condies ambientais, combinar o nitrognio com amnia, incorporando-o s cultura perenes ou anuais. Durante milhares de anos as plantas foram abastecidas de nitrognio graas ao aporte pelas chuvas e pelo sistema biolgico. Como estes microrganismos realizam a reao? Na forma de vida livre ou em associaes simbiticas, estas bactrias ou os sistemas por eles gerados, possuem um complexo enzimtico denominado Nitrogenase, que catalisa a reao, tornado-a possvel sem as condies drsticas de energia necessrias quando no se dispe do catalisador biolgico. Voc lembra como atua um catalisador? Se no lembrar, clique no cone ao lado e v at o slide que mostra isto. De uma forma esquemtica, estas transformaes do N na natureza podem ser sintetizadas no Ciclo do Nitrognio. Clique no cone para ver:
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Os organismos fixadores de nitrognio


Por fixao do nitrognio entende-se o processo pelo qual este elemento passa da forma molecular como se encontra na atmosfera, para uma forma qumica, orgnica ou inorgnica, disponvel para organismos. Assim, tanto o processo qumico como os processos biolgicos so classificados como formas de fixar o nitrognio. Na natureza existe um nmero ainda no determinado de microrganismos capazes de fixar o nitrognio. Ano aps ano descobrem-se novos microrganismos, em sua maioria oriundos do solo, que realizam o processo e incorporam o nutriente ao solo. De uma forma didtica, estes organismos podem ser classificados em trs categorias:
De vida livre no associativos De vida livre associativos Simbiticos.

A grande maioria dos estudos sobre fixao sobre bactrias, mas existem outros organismos fixadores, como algas (Azola, p.ex.). Alguns fungos tambm podem fixar N mas sob condies muito especficas, segundo alguns autores.

"A mente que se abre a uma nova idia, jamais voltar ao seu tamanho original." (Albert Einstein)

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Bactrias fixadoras
De vida livre, no associativas.
Estas bactrias vivem de forma livre no solo e algumas em gua, mais ou menos independente da cobertura vegetal e das condies de solo. Ocorrem com mais intensidade em solos com elevado teor de matria orgnica, pois ali encontram nutrientes em grande quantidade. Estas bactrias possuem a enzima nitrogenase em seu corpo, fixam o N para formar suas protenas e depois o liberam para o solo. Os principais gneros deste tipo so:
Azotobacter Derxia Beijerinckia Clostridium (anaerbica)
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Bactrias fixadoras
De vida livre associativas
Estas bactrias podem viver livremente no solo mas tambm se associam com razes de vrias plantas, alojando-se nas camadas superficiais das razes, fixando nitrognio e transferindo parte deste para a planta. Alguns autores as classificam associativas facultativas e obrigatrias. Hoje estas bactrias so objeto de muitos estudos, j estando em desenvolvimento inoculantes para uso em diversas gramneas, como milho, trigo, arroz e cana de acar. Alm do efeito na fixao do N, estas bactrias tambm tem, em maior ou menor grau, poder de estimular o enraizamento das plantas, pela produo de hormnios de crescimento. O principais gneros so:
Azotobacter (A. paspali) Azospirillum Herbaspirillum Burkholderia Glucanoacetobacter

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Vamos curtir Portinari?

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Bactrias fixadoras
Simbiticas
Como o nome est dizendo, estas bactrias formam sistemas simbiticos com plantas, criando novas estruturas ndulos onde vai ser gerada a enzima nitrogenase e um complexo sistema bioqumico. A enzima nitrogenase no existe na planta e nem na bactria. S ser formada dentro da nova estrutura. A simbiose s ocorre nas plantas da famlia das Leguminosas. No interior do ndulo ocorre a transformao do nitrognio molecular, aportado pela soluo do ar no solo, em amnia, que vai sofrer diversas transformaes e se deslocar atravs da seiva para a parte area da planta. Por sua vez, a bactria vai se nutrir de carboidratos aportados pela planta, formando, assim, um tpico sistema simbitico. Este sistema conhecido desde o sec. XIX e vem sendo utilizado na agricultura desde meados do Sec. XX. Hoje, o uso destas bactrias j se constitui em uma excelente tecnologia agrcola, trazendo benefcios tanto para aumento de produtividade nas culturas de leguminosas, como no enriquecimento do solo em nitrognio, melhorando sua fertilidade. Clique no cone ao lado e veja como se forma o 14 ndulo:

Questes importantes.
Tente responder estas questes sem olhar nos slides anteriores. Depois confira os acertos (esperamos 100%...)
Como se explica que o nitrognio sendo to abundante na atmosfera seja escasso nos solos e sua aquisio sob forma de fertilizante mineral to cara? Porque a reao de transformao do N2 em amnia requeira tanta energia quando feita no laboratrio e se realize temperatura ambiente no interior do ndulo? Qual a diferena fundamental entre as bactrias de vida livre e as simbiticas?
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Fim do primeiro mdulo

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Mdulo 2
O inoculante. Classificao do rizbio. Seleo de estirpes. Produo. Padres de qualidade. Nmero de bactrias por semente. Cadeia do inoculante.

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Inoculantes

Inoculante, por definio legal, tal como se encontra na legislao do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento MAPA, todo o produto que contenha microrganismos favorveis ao crescimento de plantas. Como vemos, o inoculante contm microrganismo sendo, portanto, um produto vivo. Esta a forma de se inserir a bactria no solo, para estar presente junto s razes, no momento em que esta se formar a partir da germinao das sementes. Como veremos adiante, hoje existem inoculantes em duas formas fsicas: slidos (em p, tendo a turfa como sua suporte para as bactrias) e fludos (lquidos, com a bactria estabilizada em seus processos metablicos por protetores celulares). Antigamente as bactrias fixadoras eram todas classificadas dentro de um gnero, Bacillus radiccola. Posteriormente foram classificadas como Rhizobium e, atualmente com os novos critrios de gentica so classificadas em diversos gneros e espcies. importante que se saiba que as bactrias so especficas para determinados grupos de plantas. Assim, um gnero que nodula a soja no ir nodular o feijo e vice versa. No slide a seguir vemos a tabela de classificao.
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Estirpes

Alm da diviso em gnero e espcie, as bactrias se subdividem em estirpes, antigamente chamadas raas (strains, em ingls, cepas em espanhol e souches em francs). Estas estirpes se diferenciam entre si pela maior ou menor capacidade de fixar o nitrognio e transferi-lo para as plantas. Assim como se selecionam plantas e animais por suas caractersticas produtivas, tambm existe um enorme trabalho para selecionar estirpes de rizbios, para que as mais produtivas sejam incorporadas ao inoculante. As estirpes selecionadas passam a ser recomendadas e so cadastradas pelo MAPA para que possam ser usadas na produo de inoculantes. Por lei, as empresas s podem produzir Inoculantes com as estirpes recomendadas, o mesmo acontecendo com empresas estrangeiras que exportam seus Inoculantes para o Brasil O Brasil tem um sistema de seleo e de recomendao que modelo para o mundo, pois o sistema j tem mais de vinte anos de funcionamento e as estirpes usadas no pas so de alta eficincia. Entidades como a Embrapa Soja, a Embrapa Cerrado, a Embrapa Agrobiologia e a EMBRAPA Centro Oeste, bem como a FEPAGRO (P. Alegre, RS) e o IAC (Campinas, SP), entre outras, mantm um intenso programa de seleo de estirpes. Aps o processo de seleo os trabalhos so apresentados na reunio da RELARE (Rede de Laboratrios para Recomendao, Padronizao e Difuso de Tecnologia de Inoculantes Microbianos de Interesse Agrcola) e, se aprovados o MAPA cadastra as estirpes. O processo de seleo longo e complexo. Comea em casa de vegetao, em vasos com areia e soluo nutritiva, passa para vasos com solo e depois so feitos testes de campo em diversas regies do Brasil, com experimentao em 22 rede, por trs ou mais anos.

Classificao do rizbio
Bactria
Bradyrhizobium japonicum Bradyrhizobium elkanii Rhizobium leguminosarum, biovar phaseoli Rhizobium tropici Rhizobium etli

Leguminosa
Soja Feijo

Rhizobium leguminosarum, biovar vicae


Rhizobium leguminosarum, biovar trifolii Sinorhizobium meliloti Mesorhizobium loti Bradyrhizobium spp.

Lentilha, ervilha
Trevos Alfafa, trevo carretilha Lotus corniculatus Amendoim, leguminosas tropicais Icentrosema, mucuna, caup,etc.).23

Cansou? Viaje um pouco por estas montanhas

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Produo de inoculante

J vimos que os inoculantes devem ser produzidos com estirpes selecionadas. Estas estirpes ficam guardadas em um Banco de Estirpes, localizado na FEPAGRO, rgo da Secretaria de C&T do R. G. do Sul, em Porto Alegre. Anualmente este Banco envia as estirpes liofilizadas para as empresas registradas no MAPA (o registro condio obrigatria para a produo). A se inicia todo um processo super cuidadoso visando a produo do inoculante. A ampola recebida aberta cuidadosamente em cmara asstica (cmara de fluxo laminar) e repicada para tubo ou placa de Petri com meio de cultura apropriado, onde ir se desenvolver. A seguir, vai sendo cultivada sempre em maior escala, at chegar aos fermentadores para ser cultivada em grande volume de meio de cultura lquido. Conforme a indstria, h fermentadores de diversos tamanhos,podendo variar de 200 a 2.000 L ou mais. Estes fermentadores so aerados com ar filtrado em filtros absolutos. O caldo tambm permanentemente agitado, para perfeita homogeneizao do crescimento bacteriano. Alis, voc conhece a curva tpica de crescimento bacteriano? Se no lembra, clique no cone ao lado para ver.

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Produo de inoculante

Aps o caldo atingir uma elevada concentrao (acima de 5 X 109 bactrias por mL), feita a segunda etapa do processo: mistura com a turfa (inoculante em p) ou com os protetores celulares (inoculante lquido). No caso do p, a turfa extrada da jazida, seca, moda e tem seu pH corrigido. A seguir embalada j na embalagem final e enviada para esterilizao por raios gama, para eliminar todos os microrganismos ali existentes, ficando apta a receber a cultura do rizbio que crescer livre de competio e antagonistas. Como operao seguinte, o caldo injetado nos pacotes e o inoculante ficar alguns dias em maturao para que a bactria se desenvolva na turfa. No caso do lquido, a bactria misturada com substncias protetoras, tambm esterilizadas, e da vai para as embalagens finais, que podem ser frascos ou sachs, conforme a empresa. Todas estas operaes so de extrema complexidade e devem ser executadas por pessoal especializado e em ambientes dotados da maior assepsia, pois o risco de contaminao por microrganismos do ar muito grande. O que sempre deve ser transmitido ao agricultor que o inoculante um produto de alta tecnologia, apesar de seu baixo preo. Dentro de cada pacote de inoculante existe um grande trabalho de pesquisa, feito por cientistas de alta capacidade e uma produo super cuidadosa, para garantir um produto de elevada qualidade.

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Padres de qualidade

O inoculante hoje regulado por Lei especfica e por diversas portarias do MAPA, visando garantir que o produto chegue dentro das condies especificadas s mos do agricultor. Os fiscais do Ministrio fiscalizam rigorosamente as empresas de inoculantes, coletando amostras que so enviadas ao laboratrio de referncia (FEPAGRO) para anlise oficial. As empresas que tiverem amostras fora do padro podero ser penalizadas por multas, embargo do produto ou at suspenso ou cassao do registro. Para obter registro, um inoculante dever garantir no mnimo 1 X 109 (um bilho) de clulas de Rhizobium/Bradyrhizobium por grama ou mL de produto at o final do prazo de validade, que no poder ser menor que seis meses. Cada empresa poder registrar qualquer concentrao acima desta, garantindo-a at o vencimento. O inoculante tambm dever ter um baixo nvel de contaminantes. A legislao exige que o inoculante no apresente contaminantes abaixo da diluio 1 X 10-5
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No sabendo que era impossvel, ele foi l e fez.

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Nmero de bactrias por semente

To importante quanto se ter um elevado nmero de bactrias por grama, se saber quantas bactrias so necessrias por semente, para se obter uma elevada nodulao. J vimos no Mdulo 1 que as bactrias devero estar ao redor do pelo radicular para que este se curve e forme o ndulo. A pesquisa vem trabalhando h alguns anos para determinar o nmero mnimo de bactrias que devero ser colocadas em torno de cada semente, para que tenhamos uma nodulao eficaz. Esta nmero era de 80.000 ha 15 anos, depois aumentou para 16.000, mais tarde para 300.000, para 600.000 e, atualmente, a recomendao da RELARE e da Reunio de Pesquisa de soja de 1.200.000 bactrias por semente, embora na legislao ainda permanea o nmero de 600.000 bact/sem. Por que ser que houve um aumento to grande? Dois fatores so primordiais:

Aumento da produtividade da soja. H alguns anos atrs a produtividade era de 1.800 a 2.200 kg/ha. Atualmente exige-se no mnimo 3.000 kg/ha. Ora, se necessitamos mais gros, tambm necessitamos mais nitrognio, o que exige mais bactrias. Uso de produtos (fungicidas, inseticidas e micro nutrientes) nas sementes. Estes produtos, em maior ou menor grau, causam mortalidade de bactrias, o que exige que se coloque um nmero mais elevado, prevendo uma taxa de mortalidade. Este assunto, produtos no tratamento das sementes, ser visto no mdulo 4 Se desejar ver resultados que mostrem o efeito do nmero de bactrias por semente, clique no cone ao lado 29

Evoluo do nmero de bactrias por semente recomendao da pesquisa


1400000 1200000 1000000
Bact/sem.

1.200.000

Atual, aprovado Em 2008

800000 600000 400000 200000 0 80.000 160.000 300.000 600.000

Clculo do nmero de bactrias por semente: Conc. Inoculante X dosagem Bact/sem. = -----------------------------------350.000 350.000 = Nmero mdio de sementes em uma saco de 50 kg.
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Cadeia do inoculante
INFORMAO ADEQUADA ASSISTNCIA TCNICA FISCALIZAO

PESQUISA

PRODUTOR DE INOCUL.

AGRICULTOR

ESTIRPES EFICIENTES
Elaborao: Solon C. de Araujo

INOCULANTE DE ALTA QUALIDADE

USO CORRETO DO PRODUTO


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A cadeia do inoculante

A cadeia do inoculante comea com a pesquisa, que seleciona estirpes de elevada eficincia e as disponibiliza para a produo dos inoculantes. Por sua vez, os produtores de inoculante tem a obrigao de oferecer produtos de elevada qualidade, com concentraes de bactrias que permitam atingir 1 milho e duzentas mil bactria por semente em doses viveis para o agricultor. assistncia tcnica cabe difundir a noo da importncia do inoculante para o processo produtivo e a maneira correta de seu uso. A fiscalizao deve assegurar que o produto que chega ao agricultor esteja dentro dos padres de garantia. Finalmente, o agricultor, beneficirio final de todo o processo, deve usar corretamente o produto, tratando-o como um insumo de elevada importncia para a produtividade de sua lavoura. Assim, o inoculante uma cadeia, onde cada um deve fazer corretamente seu papel. Basta que um dos agentes falhe em seu trabalho para que toda a tecnologia se perca e no resulte em benefcio. Todos, como em uma equipe, devem fazer bem seu papel para que o agricultor tenha ganhos de produtividade com o uso de inoculante.
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Cada um tem que fazer sua parte bem feita...

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Questes importantes

Pode-se inocular sementes de feijo com um inoculante para soja? Porque? Pela legislao hoje existente, uma empresa que selecione uma tima estirpe de Bradyrhizobium pode produzir inoculantes com ela? Uma empresa deseja registrar seu inoculante com 500 milhes de bactrias por grama. O MAPA aceitar este registro? E com 2 bilhes por grama? Um inoculante com concentrao de 4 milhes de bact/g e usado na dosagem de 120 g/saca 50 kg, quantas bactrias aportar por semente? Este nmero est dentro do recomendado pela pesquisa?
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Parabns

Voc terminou mais uma mdulo, j est na metade do curso. Se tiver dvidas ou desejar enviar sugestes, nos contate atravs do Fale conosco da pgina www.anpii.org.br

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Mdulo 3
Resultados experimentais com o uso de inoculantes. Ganhos da inoculao para a cultura seguinte.

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Crenas...

O uso de inoculante essencial em plantio de primeiro ano, pois a bactria ainda no existe no solo e, sem ela, no haver N disponvel para a planta. Nos primeiros plantios de soja no cerrado, sem o uso de inoculante, as plantas no cresciam, ficavam amareladas e s se obtinha produo com a adubao com N mineral. Posteriormente, com a seleo de estirpes de Bradyrhizobium adequado ao cerrado, as plantas nodularam abundantemente e hoje todos conhecem as notveis produtividades alcanadas nos solos sob cerrado. Entretanto, nos anos seguintes, depois de vrios cultivos sucessivos, a bactria se estabelece no solo e vai produzir ndulos mesmo sem o uso continuado do inoculante. Estes ndulos iro fixar nitrognio, o que pode levar crena de que a inoculao no ser mais necessria. Inmeros agricultores deixam de usar o produto por acreditarem que novas inoculaes no resultam em aumentos de produtividade, deixando, assim, de obter maiores ganhos em suas lavouras. O simples fato de existirem ndulos em uma planta no segurana de se obter muito N. Como vimos anteriormente, a soja necessita de grandes quantidades de N e isto s pode ser obtido com ndulos vigorosos e no sue mximo potencial de fixao, o que obtido com o uso anual de inoculante

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Dados de pesquisa

A pesquisa demonstra de forma inequvoca que a reinoculao, ou seja, a inoculao anual, traz resultados altamente compensadores no aumento de rendimento nas lavouras. H, tambm vrios trabalhos demonstrando que uma leguminosa, alm de fixar todo o N que ela necessita, deixa o solo enriquecido neste nutriente, o que vai beneficiar a cultura seguinte. Nos slides seguintes vamos expor vrios trabalhos que demonstram isto de forma muito clara. So dados de diversas entidades de pesquisa, resultado do trabalho de vrios anos de muitas instituies de pesquisa e em diversos locais do Brasil

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DADOS DE PESQUISA
INOCULAO E NITROGNIO EM SOJA 2750 2700 2650 2600 2550 2500 2450 2400 2688 2638 2580 2535 2527
K g g

inocC/ + 30 Kg N plantio

TRATAMENTOS
Adaptado de Comunicado Tcnico 74 -Embrapa
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C/inoc. + 50 Kg N enchim.gros

C/inoc. + 50 Kg N pr flor.

S/inoc + N

r o s / h a

c/inoc

Comentrios

Estes resultados so de um ensaio feito pela Embrapa Soja em Jaciara, no MT, em um solo onde havia sido plantada soja inoculada por cinco anos seguidos. No sexto ano foi montado o ensaio e os resultados mostram que o Bradyrhizobium existente no solo foi suficiente para fazer a soja produzir 2.500 kg/ha. Entretanto, quando se fez uma nova inoculao houve um aumento de 8%, mostrando que a bactria existente no solo suficiente para um determinado nvel de produtividade. Mas se queremos produzir mais, necessrio fazer uma nova inoculao. interessante notar que no tratamento com 30 kg de N no sulco e mais a inoculao, teve uma produo mais baixa. Poderamos supor que o N mineral mais o N da FBN poderia aumentar a produo de gros, mas o efeito foi contrrio. Isto se deve ao fato de que o N mineral na base inibe a formao de ndulos e, portanto, prejudica o fornecimento de N durante o ciclo da planta. Isto ser melhor explanado do mdulo 4.
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Reinoculao
Em

13 experimentos conduzidos em 7 locais, a reinoculao aumentou o rendimento em at 23% e o N total dos gros em at 25%.

Experimentos em Rede Nacional (Embrapa Soja, Embrapa Cerrados, Embrapa Arroz e Feijo, Embrapa Trigo, Embrapa Agropecuria Oeste, FECOTRIGO, UFRGS). Maringela 43 Hungria Embrapa Soja

Ganhos de produtividade

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Mais resultados

Universidade de Uberlndia, em reas com cinco anos de cultivo de soja. Este experimento foi encomendado pelos prprios agricultores, atravs da Fundao Tringulo, de Uberaba, MG. Inoculante em p, aumentou o rendimento de gros em 29% Inoculante lquido em 27% Resultados apresentados na reunio da soja, 12 a 14 de agosto de 2003, Uberaba.
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Resultados da RELARE - 2004


Trabalhos realizados nos estados do RS, PR, MT, DF e GO Foram instalados 29 ensaios com populaes mdias da bactria nos solos de 103 a 105 clulas / grama.

Ensaios com rendimentos acima de 2.400 kg/ha.


Em todos os ensaios, foram obtidos incrementos mdios de produtividades de 8% com a reinoculao. A reinoculao proporcionou incrementos de at 1.950 kg/ha. Maringela Hungria Embrapa Soja, 2004
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E da? Vale ou no vale a pena inocular todos os anos?

Os dados so incontestveis. Existem muito mais resultados, de diversas partes do Brasil e de outros pases comprovando as vantagens da inoculao anual. Uma pesquisa na literatura trar ainda mais resultados que devem ser usados pelos agrnomos da assistncia tcnica para mostrar ao agricultor as vantagens econmicas desta prtica agrcola. A seguir, vamos ver como a inoculao, alm de aumentar a produtividade na leguminosa, ainda vai economizar nitrognio para a cultura que a suceder, seja milho, trigo, arroz ou outra.
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T bom...um cafezinho, um pequeno descanso.

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Efeito de inoculao na cultura seguinte


Efeito da nodulao da soja na produo de trigo
1.974 2.000 1.500 Prod. de trigo (kg/ha) 1.000 500 0 Soja. nod 1.529

Soja. no nod Linhagens de soja

Neste experimento, foram plantadas reas com soja nodulada e ;reas com soja no nodulada. Aps a colheita da soja, foi plantado trigo. Na rea onde a soja estava nodulada, o trigo produziu 30% a mais do que na rea de soja sem ndulos. A soja, alm de produzir o N total para sua produo, ainda deixou N no solo para beneficiar o trigo.

Adaptado de Mascarenhas, H.A.A. et al 2003.

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Comentrios

Como podemos ver nos slides anteriores, a inoculao um processo gerador de rentabilidade para o agricultor, seja pelo aumento da produtividade na leguminosa em que usado, seja pela economia de nitrognio na cultura que a sucede. Esta tecnologia umas poucas que pode ser utilizada por todos os agricultores, desde os mais capitalizados at os de menor porte,pois o investimento para sua utilizao extremamente baixo, estando ao alcance de todos. Assim, para se obter mais lucro com pouco investimento, o uso de inoculante uma excelente ferramenta. Entretanto, vale enfatizar que todos devem fazer corretamente seu papel na cadeia: a pesquisa, a assistncia tcnica, o produtor de inoculante, os rgos de fiscalizao e o agricultor.
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FBN em outras leguminosas


Nos slides anteriores falamos muito sobre soja, mas isto no significa que outras leguminosas no possam se beneficiar do processo de fixao do nitrognio. Muito pelo contrrio. Feijo, feijo caupi, amendoium, trevos, alfafa, mucuna, crotalria, tremoo e espcies arbreas utilizam inoculante com muito sucesso, diminuindo ou at eliminado totalmente o N mineral. Trabalhos recentes de pesquisa com feijo tm demonstrado excelentes resultados com o uso de inoculantes. uma prtica ainda pouco difundida, mas que dever se estender cada vez mais, pela economia que traz para o agricultor. O feijo caupi, ou feijo de corda, largamente cultivado no Nordeste do Brasil e tambm em algumas regies do MT e do PA, tem apresentado excelentes resultados com novas estirpes que foram recentemente selecionadas e que esto tendo enorme sucesso no aumento da produtividade. Assim, sempre que se pensar em plantar qualquer leguminosa, importante consultar o agrnomo responsvel, bem como as empresas participantes da ANPII para verificar a disponibilidade do respectivo inoculante.
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Questes importantes
As

bactrias que permanecem no solo por vrios anos so suficientes para se obter elevadas produtividades nas leguminosas? Qual a mdia de aumentos de produtividade que se obtm com a reinoculao? Em mdia, quanto a soja deixa de N para a cultura seguinte?
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Mais um mdulo terminado


Parabns, mais um mdulo finalizado com sucesso. Veja como aos poucos voc est acumulando conhecimentos seqenciais sobre a importante tcnica da FBN. No mdulo seguinte voc ter informaes sobre a forma correta de usar o inoculante e sobre os fatores que afetam positiva e negativamente o funcionamento do produto.

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Mdulo 4
Tipos de inoculante. Modo de usar. Fatores que influenciam o resultado do inoculante.

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Tipos de inoculantes
Os primeiros inoculantes, ainda sem finalidade comercial, eram uma simples cultura da bactria em meio de cultura agarizado. As bactrias eram dissolvidas em gua no momento do uso e misturadas com as sementes. Este inoculante, entretanto, era de baixa durabilidade e deveria ser conservado em refrigerado at o momento do uso, o que o tornava pouco prtico para uso extensivo. Diversos veculos foram testados para o desenvolvimento e manuteno do rizbio, sendo que a turfa (um solo com elevado teor de matria orgnica, geralmente em reas com baixa drenagem) mostrou-se como o melhor suporte para a bactria. Posteriormente outros tipos de substratos foram testados, mas nenhum demonstrou a qualidade da turfa para a obteno de elevadas concentraes da bactria por um perodo til. No mdulo 2 vimos quais as concentraes que um inoculante deve ter. Em torno de 1990 comearam a surgir os inoculantes lquidos, mais prticos de usar e que hoje ocupam cerca de 70% do mercado.
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Inoculante turfoso
A turfa retirada das jazidas, seca e moda. Seu pH, geralmente muito baixo, corrigido. A seguir a turfa embalada j no pacote no qual ser comercializada, hermeticamente fechada e esterilizada por raios gama ou feixe de eltrons. Esta esterilizao necessria para eliminar os microrganismos existentes no material original, um solo altamente propcio para o desenvolvimento de microrganismos. Se estes permanecessem na turfa iriam competir e at em alguns casos ser antagnicos ao rizbio, impedido as elevadas concentraes necessrias. Aps a esterilizao, que no feita nas empresas produtoras de inoculantes mas em empresas especializadas neste ramo, o caldo de cultura com o Bradyrhizobium ou Rhizobium injetado no pacote de turfa em condies assticas e feita uma mistura, para que toda a turfa fique impregnada com o caldo bacteriano. Alguma s empresas adicional aditivos que beneficiam o desenvolvimento das bactrias. Nesta turfa, esterilizada e enriquecida com o meio de cultura, o microrganismo ir se desenvolver dentro da tpica curva de crescimento bacteriano, conforme vimos no mdulo 1. Esta curva que ir determinar o prazo de validade do produto.
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Inoculante lquido
Visando facilitar o uso do inoculante, foram desenvolvidos inoculantes lquidos, sem a presena de turfa. Neste caso, o caldo de cultura aps atingir o mximo de concentrao, misturado com substncias chamadas protetores celulares, que reduzem drasticamente o metabolismo da bactria, deixando-a em estado que simplificadamente, poderemos chamar de dormncia. Nesta situao a bactria diminui sua respirao, sua nutrio e sua reproduo, mas permanece viva por um determinado perodo. Desta forma, o comportamento da bactria bem diferente nos dois tipos de inoculante: no turfoso, a bactria est em pleno crescimento, como em qualquer meio de cultura, enquanto no lquido ele entre j na concentrao mxima e vai morrendo lentamente.
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Outros tipos de inoculante


Oleoso.
Foi comercializado durante cerca de quatro anos e retirado do mercado, pois as bactrias eram liofilizadas e ficavam muito fragilizadas, apresentando elevada mortalidade, em especial em solos com alguma adversidade.

Gel.
Tambm mais ou menos na mesma poca do inoculante oleoso foi produzido um inoculante em gel. A bactria, liofilizada, era diluda em gua juntamente com um polmero que virava um gel. Tambm foi retirado do mercado poucos anos depois, pelo mesmo motivo anterior.

Inoculante lquido-turfoso.
Recentemente surgiram inoculantes lquidos aos quais acrescentada uma certa quantidade de turfa, visando usar os benefcios do lquido (facilidade de uso) e da turfa (proteo s bactrias). Ainda no se firmaram no mercado e necessitam de mais estudos da pesquisa par ver se resultam em vantagens frente aos demais inoculantes.
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Modo de usar o inoculante


Como vimos no mdulo 1,o inoculante uma cadeia, onde todos tem que cumprir seu papel corretamente para que a tecnologia funcione. Assim, o agricultor, aquele que vai usar o produto, tambm deve faz-lo de forma cuidadosa, levando em conta uma srie de fatores para que o produto funcione. Antes de usar o produto, temos que dar ateno a diversos pontos:
Validade do produto. Nunca usar produto vencido. No usar produto especfico para uma leguminosa em outra cultura. J vimos que os inoculantes so especficos. Se sobrou uma caixa de inoculante para soja, no poder ser utilizada no plantio de feijo, e vice versa. O inoculante um produto vivo, portanto sujeito a limites de temperatura. Nunca armazenar inoculante em freezer. Guard-lo no local mais fresco que tiver na fazenda, evitando elevadas temperaturas. No expor o produto ao sol. O sol emite raios ultravioleta, aquece e seca, trs inimigos das bactrias. Portanto, sempre que for inocular as sementes, faa o procedimento sombra.
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Modo de usar
O princpio bsico da inoculao colocar 1 milho e duzentas mil bactrias em cada uma das sementes. Obviamente que isto s pode ser feito com uma boa mistura. Assim, podemos usar, para uma boa mistura, algumas formas:
Mquina de tratamento de sementes. Existem no mercado diversas mquinas desenvolvidas especificamente para o tratamento de sementes. Estas mquinas possuem duas caixas em linha, sendo que na primeira se colocam os fungicidas, inseticidas, micro nutrientes e outros produtos. Na segunda caixa vai apenas o inoculante. Assim, a semente tratada primeiro com os defensivos e, por ltimo, com o inoculante. Existem caixas para inoculante lquido e turfoso, conforme o caso. Betoneira ou tambor com eixo excntrico. Quando se utiliza betoneira ou os tambores com eixo excntrico, em primeiro lugar colocam-se as sementes no recipiente seguido de todos os produtos que sero usados no tratamento das sementes, menos o inoculante. Fazer o tambor girar diversas vezes at que as sementes estejam todas bem recobertas pelos produtos. A seguir, coloca-se o inoculante e gira novamente, at que as sementes estejam recobertas pelo inoculante.

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Equipamentos para tratamento de sementes

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Cuidados na inoculao
O processo de inoculao deve ser feito sombra, como j vimos anteriormente. Quando no se usar produtos para o tratamento das sementes, deve-se umedecer as sementes com 200 a 330 mL de gua por saca de 50 kg. Para aumentar a aderncia, pode-se usar gua aucarada (soluo a 10%). Semear o mais rpido possvel aps a inoculao, em especial se forem usados fungicidas ou micronutrientes nas sementes. O ideal semear na seqncia da inoculao. Mas se isto no for possvel, deve-se semear no mximo doze horas aps a inoculao. No caso de se prever um tempo maior, que nunca poder passar de 18 horas, deve-se aumentar a dose de inoculante. Em solos de primeiro ano de plantio, a dose recomendada sempre o dobro da dose normal. Solos de primeiro ano de cultivo de soja so muito adversos bactria, causando uma elevada mortalidade. Hoje esto em testes diversos produtos que podem preservar a bactria viva nas sementes por perodo de vrios dias, permitindo a inoculao antecipada. Estes produtos devero ter laudos da pesquisa que comprovem sua eficincia e, em breve, o MAPA publicar a nova legislao sobre o uso deste produtos.

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Cansou? Um cafezinho vai bem...

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Fatores que influenciam na FBN


O processo de fixao envolve dois organismos vivos: a planta e a bactria. Portanto, ambas esto sujeitas a inmeros fatores ambientais eu podem favorecer ou prejudicar o processo e que devem tomar a ateno do agricultor para se obtenha o mximo rendimento da tecnologia. Alm dos fatores que j vimos em mdulos anteriores, como uso de bactrias eficientes, uso na quantidade adequada, trabalho sombra mistura com as sementes, existem outros fatores importantssimos que vamos ver a seguir.
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Micronutrientes
Os micronutrientes so essenciais para todos os processos metablicos da planta. Dois se destacam de forma acentuada (molibdnio Mo e cobalto Co). O molibdnio faz parte da enzima nitrogenase, do centro ativo da enzima, e em sua ausncia a enzima no far seu papel de desdobrar a molcula de N2. Como as fontes minerais de Mo no solo so muito poucas e anualmente as culturas vo esgotando o nutriente existente originalmente, torna-se necessria sua reposio para que se obtenham elevadas produtividades. Hoje, na cultura da soja, o uso de Mo j uma prtica indispensvel e no se admite cultivar soja ou feijo sem a adio de Mo. O cobalto, por sua vez, faz parte da cobalamina (vitamina B12), essencial nos processos bioqumicos da fixao. Tambm faz parte do processo de formao da nitrogenase e da leghemoglobina. Entretanto, se estes nutrientes tem um papel altamente positivo no processo de FBN, sua aplicao deve ser muito bem cuidada, pois podem ocorrer efeitos adversos. Sua aplicao na forma de sais (molibdato de sdio ou de potssio) e sulfato ou cloreto de cobalto), quando em contato com as bactrias, causam elevadas mortalidades e no devem ser usados nestas formas.Existem no mercado formulaes de Mo e Co com um grau de compatibilidade mais elevado com as bactrias do inoculante. Outra forma de aplicar o MO e Co e via foliar. Os resultados de pesquisa tem demonstrado que tanto a aplicao via sementes como via foliar apresentam os mesmos nveis de produtividade.
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Outros micronutrientes.
Outros micronutrientes exercem papis importantes no processos metablicos e devem estar presentes nos nveis exigidos pela planta. Como a FBN um processo altamente interativo entre bactria e planta, muitas vezes fica difcil separar o efeito que sobre um dos componentes da simbiose. De forma geral, podemos dizer que o que bom para a planta tambm bom para a simbiose e vice versa. Entretanto, ainda falando sobre micronutrientes, sabe-se que as plantas necessitam de cobre, zinco, mangans (em especial a soja) e muitos outros. Tentando aproveitar a semente como veculo para estes micronutrientes, h produtos no mercado que preconizam o uso destas misturas nas sementes, o que vai causar uma mortalidade quase total das bactrias do inoculante. Assim, estes produtos, em vez de aumentar a produtividade, podero reduzi-la, resultando em prejuzo para o agricultor.

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"Cincia conhecimento organizado. Sabedoria vida organizada."


Immanuel Kant

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Macro nutrientes.
O clcio e o fsforo exercem papel preponderante no processo de FBN. O clcio, alm de seu papel na correo da acidez do solo, tambm atua na fixao do N e sua presena, nos nveis recomendados pela anlise de solo, essencial., O suprimento de fsforo tambm est diretamente ligado ao processo de fixao do nitrognio. Existem trabalhos que mostram de forma muito clara que o suprimento de P nas quantidades recomendadas para a cultura, influenciam diretamente no suprimento de N via fixao biolgica. O nitrognio, como vimos anteriormente (slide 29) pode reduzir a nodulao e prejudicar a produtividade. Quantidades de N disponvel acima de 20 kg/ha, so prejudiciais nodulao. Segundo as informaes da pesquisa, o N mineral totalmente dispensvel quando se faz uma boa inoculao. Mas caso se deseje utilizar algum N na base, a quantia nunca dever ultrapassar os 15 kg/ha.
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Fatores do solo
Como vimos anteriormente, o que bom para a planta tambm bom para a FBN. Assim, os fatores de solo exercem influncia muito grande na formao dos ndulos e na taxa de fixao. Alguns fatores de solo importantes
Acidez. A elevada acidez prejudica a multiplicao das bactrias e, conseqentemente, o aporte de N. Assim, para o pleno funcionamento do sistema, essencial a correo da acidez, conforme indicado na anlise de solo. Matria orgnica. A matria orgnica favorece a multiplicao das bactrias, aumentando as chances de formao de ndulos.J foi observado que em solos sob plantio direto a taxa de FBN maior que em solos sob plantio convencional. Umidade. Nenhum ser vivo vive sem gua e o rizbio no exceo. Assim, solos muito secos causam a mortalidade das bactrias. Muitas vezes agricultores se podem inocular e plantar no p. Se o solo estiver muito seco e demorar a chover, com certeza haver alta mortalidade de bactrias. O excesso de umidade, quando o solo fica alagado por algum tempo, diminui a taxa de fixao, mas no mata a bactria. Quando o solo voltar a seu estado normal, a fixao ser retomada em seu ritmo normal. Compactao. Solos muito compactados dificultam a penetrao do nitrognio no solo e, portanto, dificultam a fixao. Por outro lado, a compactao dificulta a expanso do ndulo, que fica com seu tamanho reduzido, diminuindo a massa nodular. Temperatura. Como todo o ser vivo, os rizbios tem seus limites de temperatura. Temperaturas muito elevadas, durante certo perodo de tempo, contribuem para parar o desenvolvimento das bactrias ou at mesmo mat-las. Acima de 40 o processo de reproduo paralisado e acima de 500 o processo de mortalidade j elevado. Desta forma, recomenda-se manter e operar com o inoculante em ambientes com a temperatura mais baixa.

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Inoculantes e fungicidas
H cerca de 20 anos, a semente de soja recebia apenas o inoculante antes do plantio. Com o aparecimento de doenas de solos e outras transmitidas pelas sementes, passou-se a usar fungicidas, como j vimos anteriormente. Muitos destes fungicidas apresentam maior ou menor toxicidade ao rizbio, causando expressiva mortalidade. Durante um certo tempo, pensou-se at que as duas tecnologias, inoculao e uso de fungicidas, seriam incompatveis. Hoje, entretanto, temos como usar as duas tecnologias e tirar lucro com ambas, desde que se tomem algumas precaues:
Usar somente fungicidas recomendados pela pesquisa. Usar os fungicidas que apresentem menor poder txico. No site www.cnpso.embrapa.br encontra-se uma lista dos produtos mais compatveis com o Rhizobium. Usar o inoculante na dosagem que propicie de 600.000 bact/sem (conforme legislao) a 1.200.000 bact/sem, conforme recomendao da pesquisa (vide mdulo 2).. Semear o mais rpido possvel aps a inoculao.

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Inoculantes e outros produtos usados nas sementes.


Mais recentemente comearam a ser usados inseticidas nas sementes de soja, visando prevenir pragas que atacam a soja recm germinada. Ainda no existem muitos testes com estes produtos, mas os primeiros resultados mostram um efeito relativamente pequeno sobre as bactrias do inoculante. Entretanto, como surgem constantemente novos produtos no mercado, sempre importante fazer um acompanhamento de seus efeitos sobre o inoculante, seja consultando os fabricantes dos inseticidas e do inoculante, seja consultando os rgos de pesquisa. Com relao ao micronutrientes, j vimos que os sais de Mo e Co so altamente txicos para o Rhizobium, devendo-se dar preferncia aos produtos formulados, que atenuam o efeito salino, embora no sejam totalmente incuos. As formulaes que contenham outros metais pesados, como cobre, zinco, mangans e outros NO DEVEM SER USADOS SOBRE AS SEMENTES. Grafite. O grafite, bastante usado para facilitar o fluxo de sementes nas semeadeira, se usado na dosagem recomendada no chega a causar problema bactria. Entretanto, como se trata de um produto barato, muitas vezes sua dosagem exagerada, podendo causar desidratao das bactrias e prejudicar a nodulao. Para o uso de qualquer outro produto que venha a ser usado sobre as sementes, juntamente com o inoculante, deve haver uma consulta aos fabricantes ou aos rgos de pesquisa, para no colocar em risco a FBN, uma tecnologia, como j vimos, essencial para elevadas produtividades.
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Questes importantes
Porque o molibdnio importante na FBN? Quais providncias devem ser tomadas no processo de inoculao para se diminuir o efeito negativo dos fungicidas? A adio de 30 kg de N/ha, na adubao no sulco, poder aumentar a produo, pela soma deste N com o N da fixao? possvel usar produtos base de Mn, Zn e Cu em mistura com as sementes inoculadas? Justifique.
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Artigos
Para maiores informaes sobre os processos de FBN, procure ler mais artigos. Na pgina da ANPII, na seo artigos, voc encontrar material de leitura. Esta pgina estar sendo constantemente atualizada, com novos textos. Acesse os links indicados a seguir, onde tambm podero ser obtidas importantes informaes sobre o tema.
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A ANPII e as empresas filiadas


A ANPII uma associao de empresas que, como vimos no incio, preza a qualidade do produto acima de tudo. O propsito da Associao , em breve, estabelecer um processo de certificao dos produtos de suas afiliadas, visando assegurar, em toda sua plenitude, a qualidade dos inoculantes produzidos pelas empresas. Alm do mais, a Associao promove seguidamente eventos que visam a evoluo dos inoculantes comercializados no Brasil. Por tudo isto, sempre que for adquirir inoculantes, prefira sempre os produzidos pelas empresa filiadas ANPII.
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Muito bem!!!! Voc terminou o quarto mdulo e o curso. Parabns e obrigado por sua participao.
Se voc ainda no se cadastrou no site da ANPII (www.anpii.org.br) faa-o agora, para ser comunicado sobre atualizaes do curso. Para o prximo ano, pretendemos inserir um mdulo sobre gentica de Rhizobium, para que todos se mantenham atualizados sobre o tema.

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Links interessantes
www.anpii.org.br www.relare.org.br www.cnpso.embrapa.br www.cnpab.embrapa.br www.cnpao.embrapa.br www.cpac.embrapa.br www.cena.usp.br
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Crditos
Este curso uma iniciativa da ANPII, atravs de sua Diretoria e do apoio de todos os associados. Foi elaborado especialmente para a ANPII pela SCA Consultoria e Treinamento Ltda, atravs do Eng. Agr. Solon C. de Araujo. Colaboraram com sugestes e aportes de conhecimentos:
Eng. Agr. Mariel Bizarro e Eng. Agr. Marcelo Kerkhoff, da Turfal Eng. Agr. Valter Toledo, da BASF-AGRO Eng. Agr. Fernando Martins, da Bio Soja

Agradecemos a todos os pesquisadores da rea que, atravs de suas publicaes e cursos, vm divulgando por todo o Brasil esta tecnologia e que mostraram os resultados de experimentos que comprovam a viabilidade econmica da FBN.
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