DICROSMO CIRCULAR

Tcnica de espectroscopa de absorcin electrnica, que se basa en el cambio de configuracin electrnica molecular de un estado fundamental a un estado excitado, esto se debe a la absorcin de radiacin electromagntica polarizada.

 Un haz de luz polarizado es aquel que tiene su vibracin electromagntica en un solo plano. Un haz de luz polarizado circularmente, se obtiene girando el plano de polarizacin de forma continua y en un solo sentido alrededor del eje de propagacin de la fase luminosa.

 Cuando un haz de luz polarizado, incide sobre una muestra en la cual el rayo circularmente polarizado a la derecha es absorbido de una manera distinta al rayo circularmente polarizado a la izquierda, se da el fenmeno de dicrosmo circular.

 El campo elctrico de una onda polarizada circular derecha (ED) se compara con una hlice que gira alrededor de la direccin de propagacin. Una componente circular izquierda (EI), constituye una hlice que gira alrededor de la direccin de propagacin en direccin opuesta a ED. Si ED gira en sentido a las manecillas del reloj y EI en sentido contrario con una frecuencia tal que los 2 vectores formen un ngulo idntico, la resultante E corresponder al movimiento de la onda polarizada en un plano, en este el campo elctrico oscila siguiendo la direccin del eje de las x.

 Como consecuencia de la diferencia de absorcin entre EI y ED, la longitud del vector EI es distinto a la longitud del vector ED y la resultante E no describe una circunferencia, sino una elipse; la velocidad del componente EI es diferente de la de ED, de esta manera, la interaccin de la radiacin con la muestra induce un desfasamiento y un cambio de magnitud diferencial en ambos componentes originalmente polarizados circularmente, y estos fenmenos provocan una rotacin del plano de polarizacin en un ngulo a y la distorsin de este plano genera una elipse.

UNIDADES COMNMENTE EMPLEADAS EN DICROSMO CIRCULAR COMO TCNICA ESPECTROSCPICA

En espectroscopia de dicroismo circular (DC) la diferencia de absortividad molar entre las dos componentes circularmente polarizadas de la luz ( ), se expresa como la elipticidad molar , siendo el angulo de elipticidad ( = arctan del cociente del eje menor entre el eje mayor de la elipse) As, la absorcion dicroica diferencial esta definida como = I- D Donde I y D son los coeficientes de distincin molar para los rayos izquierdo y derecho respectivamente. La elipticidad molar esta relacionada con la absorcion dicroica diferencial , por = 3300

APLICACIONES
Determinacin de la estructura Secundaria de protenas que no pueden ser cristalizadas. Estudio de ligando. Estudio de cambios de entorno: pH, agentes desnaturalizantes, T, solventes, etc. Determinacin de estructuras 2rias de protenas de membranas (difciles de cristalizar) y dentro de vesculas lipdicas (in vivo). Estudio de interacciones protena-protena y cidos nucleico-protena. Estudios de aspectos estructurales de: cidos nucleicos, polisacridos, pptidos, hormonas y otras molculas pequeas.

APLICACIONES
Estudios experimentales de las estructuras de las protenas y sus transiciones entre el estado nativo y desplegado son importantes ya que nos revelan como las protenas funcionales son trasladados desde el DNA y de esta manera se pueden entender enfermedades como posibles casos de Alzheimer, fibrosis qustica y escorbuto, las cuales se creen que estn relacionadas con el mal plegamiento de las protenas.

 Dicroismo circular para distintas proteinas vs

Dicrosmo circular en el espectro UV lejano

 Los espectros de dicrosmo circular se obtienen generalmente en las regiones del ultravioleta cercano (250-350 nm) y lejano (180-250 nm) de la radiacin electromagntica. Las seales en la regin del UV cercano son muy sensibles a los cambios en la conformacin en una molcula.

 Un espectro de dicrosmo circular es una representacin de la diferencia de los coeficientes de absorcin molar para la luz polarizada circularmente a la derecha y a la izquierda frente a una longitud de onda dada.Los enantimeros tendrn espectros DC que sern imgenes especulares uno del otro.

 Con espectroscopa DC se pueden identificar las configuraciones absolutas de los compuestos quirales por comparacin, ya que la misma configuracin absoluta de dos compuestos con configuraciones electrnicas semejantes, darn espectros DC del mismo signo.

Equipos para obtencin de espectros de DC

La caracterstica ms importante de un Espectropolarmetro de Dicrosmo Circular, es que debe contar con una fuente de luz polarizada. En general un espectrofotmetro de dicrosmo circular cuenta con un generador de radiacin, que inicialmente se filtra y luego se polariza (esta orientado a 45 . Si el polarizador se rota 90, la luz es circularmente polarizada hacia la izquierda).

 La luz polarizada pasa por un modulador fotoelstico que consiste en un material que se comprime y expande para producir radiacin circularmente polarizada (generalmente un cristal de seleniuro de zinc) la cual incide sobre la muestra bajo estudio, colocada en una celda con ventanas de materiales estables. La radiacin que emana de la celda pasa a un detector que proporciona los espectros de dicrosmo circular.

Originalmente el dicrosmo circular se meda con el dicrgrafo de Roussel-Jouan. 1) Fuente de luz 2) Monocromador 3) Prisma de Rochon 4) Cristal Oscilante 5) Celdilla 6) Multiplicador de electrones 7) y 8) Amplificadores 9) Detector 10,11,12) Amplificadores 13) Fuente de energa para cristal oscilante 15) Ajustadores de longitud de onda y de ancho de rejilla 16) Dispositivos de Registro automtico

Imagen de instrumentacion pdf

http://www.biologiaosea.com.ar/files/semina rios/sem%20dicrosimo%20circular.pdf

Ventajas:
Experimento simple, rpido y no destructivo. Se usa para cualquier tamao de molcula. Es el complemento de tcnicas ms detalladas y precisas (Cristalografa y RMN)

Limitaciones
La deconvolucin de un espectro en 4 o 5 componentes que no varan de protena a protena puede ser una sobre simplificacin. Los espectros de referencia de protena 100 % -hlices no se pueden comparar con espectros de protena que solo tengan una fraccin de -hlices (la intensidad aumenta con la longitud de la hlice) Las bandas del UV-cercano puede contribuir al espectro en el UVlejano.

Las formas de las curvas en el UV-cercano dependen de la estructura 2ria y 3ria.

Fuentes de error
Desviaciones y distorsiones en los espectros de estructuras tpicas, sobre todo en las lminas que tienen espectros muy variables La absorcin de los aromticos y puentes disulfuro. Absorcin del solvente: Hay que trabajar con buffers muy diluidos y que no absorban a menos de 200nm

Comparacin de CD con UV-VIS

En el caso del UV-vis se utiliza como fuente luz no polarizada, mientras que en los procesos dicroicos la luz est polarizada. En la forma de espectroscopia ms simple, la absorcin, se mide cuanta luz de una dada frecuencia es absorbida por una coleccin de molculas. Para que una sustancia absorba es necesario que cambie el momento dipolar de la transicin. El dicrosmo circular mide la absorcin diferencial de la luz polarizada circularmente hacia la derecha y hacia la izquierda. Como en CD se realiza una resta, se pueden obtener picos positivos y picos negativos, lo que permite ganar resolucin. As el CD tiene poca intensidad pero alta resolucin. Cuando se produce la interaccin entre 2 monmeros, se tiene un desdoblamiento excitnico de distinta energa. En UV-vis se obtienen 2 picos simtricos respecto de donde estara la transicin