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Dra. Mercedes Emelinda López I PERIODO 2013

Dra. Mercedes Emelinda López

I PERIODO 2013

Tecnica histologica

Tecnica histologica
Tecnica histologica
Tecnica histologica
Tecnica histologica

Definicion

Se define técnica histológica al conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada, a fin

de posibilitar su estudio al microscopio

Tecnicas Histologicos

Se realizan una serie de pasos para la preparacion del tejido para su posterior estudio en el microscopio

La tecnica mas comunmente utilizada en los laboratorios de histotecnologia es la de la Parafina

Estan relacionadas con los avances de la microscopia

Pasos de la Técnica

  • Para su realización se efectúan una serie de pasos secuenciales ordenados

  • 1. Obtención de la muestra

  • 2. Fijación de la muestra

  • 3. Deshidratación

  • 4. Aclaramiento

  • 5. Inclusión

  • 6. Corte

  • 7. Coloración

  • 8. Montaje

1.Obtenion de la Muestra

De tres fuentes puede provenir el material humano: las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. De éstas, sólo la primera puede darnos material normal; las dos últimas proporcionarán tejidos patológicos.

  • - Necropsias: son las piezas que se obtienen de un cadáver. Para histología normal es necesario que se trate de un cadáver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesión, por lo menos el órgano que se quiere estudiar.

-Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al

microscopio y efectuar un diagnóstico histopatológico.

- Piezas operadas: los tejidos que han sido extraídos de las intervenciones quirúrgicas, generalmente

tumores u órganos inflamados, también pueden darnos material de investigación pero, como en el caso anterior, sólo servirán para anatomía patológica

Obtencion de la Muestra

  • Autopsias-Necropsias

Tipos

Medicolegales

Hospitalarias

  • Biopsias

Tipos

Incisionales

Excisionales

Transoperatorias Por Aguja

Citologia Exfoliativa

  • Autopsia Forense o Necropsia:

  • Necropsia Médico Forense:

  • Es el procedimiento médico encaminado a que en la revisión interna y externa del cadáver sea posible establecer la causa de muerte del occiso relacionado con una averiguación previa y en auxilio de una investigación judicial.

  • Es recomendable que en los siguientes casos se efectué la necropsia médico legal:

  • 1.- En todas las muertes violentas incluyendo aquellas en que este la duda de violencia.

  • 2.- Personas que fallecieron en áreas de reclusión y/o seguridad y que estuvieron bajo responsabilidad de servidores públicos de seguridad pública y procuración de justicia.

  • 3.- Muertes en la vía pública.

  • 4.- Muertes sospechosas de haberse producido por violación a los derechos humanos.

 Autopsia Forense o Necropsia :  Necropsia Médico Forense:  Es el procedimiento médico encaminado
  • Requisitos para la práctica de la necropsia:

  • Orden escrita para la práctica del estudio de necropsia firmada por la Autoridad Ministerial.

  • Copia de la Averiguación Previa.

  • Acta Médica.

  • En caso de haber recibido atención médica horas o días previos a su muerte, resumen clínico de las intervenciones y tratamientos a las que fue sometido.

  • Orden de entrega a los familiares y de aviso a la Autoridad del Registro Civil.

  • Objetivos a determinar:

  • 1.- La causa de muerte (Cuando es posible).

  • 2.- La hora aproximada de la muerte.

  • 3.- La identidad del cadáver.

  • 4.- Descripción detallada de las lesiones externas e internas, así como de los hallazgos de necropsia, siguiendo los protocolos internacionalmente aceptados

Autopsias Medicolegales

Autopsias Medicolegales

Autopsia Clínica:

  • Es generalmente realizada para determinar no sólo la causa de la muerte, que en muchos casos es conocida, sino todos los procesos patológicos que afectaban al individuo.

  • Tiene propósitos de estudio e investigación.

  • Es solicitada por los facultativos que atendieron al paciente y debe ser autorizada por los familiares.

 Autopsia Clínica :  Es generalmente realizada para determinar no sólo la causa de la

Biopsias

Biopsias

BIOPSIA

es

un

procedimiento

realizado con el

propósito

de

obtener

tejido

o

células

del

cuerpo para examinarlos con el microscopio.

BIOPSIA  es un procedimiento realizado con el propósito de obtener tejido o células del cuerpo

BIOPSIA

Las biopsias usualmente se realizan para determinar si un tumor es maligno (canceroso) o para determinar la causa de una infección o inflamación inexplicada.

Los endoscopios flexibles (tubos flexibles de fibra óptica, con un lente para la visión y luz) permiten que el cirujano observe dentro del cuerpo a través de una

incisión pequeña y que tome una muestra de tejido.

Tipos de biopsias:

La biopsia endoscópica

La biopsia de la médula ósea

La biopsia excisional o inscisional

La biopsia de aspiración por medio de una aguja fina

Una biopsia de perforación

La biopsia de raspado

La biopsia de la piel

PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA RESULTADO DE LA BIOPSIA
PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA RESULTADO DE LA BIOPSIA

PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA

PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA RESULTADO DE LA BIOPSIA
PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA RESULTADO DE LA BIOPSIA
PACIENTE REALIZANDOSE ENDOSCOPIA RESULTADO DE LA BIOPSIA

RESULTADO DE LA BIOPSIA

Los sitios comunes para las

biopsias son:

La médula ósea. Los senos. El tracto gastrointestinal. El riñón. El hígado. El pulmón. Los nódulos linfáticos. La piel. La tiroides. El cerebro.

Los sitios comunes para las biopsias son: • La médula ósea. • Los senos. • El
Los sitios comunes para las biopsias son: • La médula ósea. • Los senos. • El

Después de una biopsia, la muestra de tejido se envía a una de las siguientes áreas de la anatomía patológica para que la examinen y la analicen:

La patología quirúrgica. La citología. La autopsia.

BIOPSIA POR CONGELACION

Técnica utilizada para evaluar Inmediatamente el tejido obtenido durante el acto quirúrgico para

poder tomar una conducta

terapéutica con el diagnostico anatomopatologico.

PASOS

  • 1. Congelación de la muestra del tejido

( anhídrido carbónico)

  • 2. Corte del tejido congelado (criostato)

El proceso dura unos 10 minutos

  • 3. Tinción de los cortes

H-E y azul de metileno

BIOPSIAS TRANSOPERATORIAS

  • Se realiza rapidamente durante el acto quirurgico para decidir un conducta medicoquirurgica

  • El tejido en fesco sin fijacion se congela a altas temperaturas con la utlizacion de un aparato llamado CRIOSTATO

BIOPSIAS POR CONGELACION- CRIOSTATO

  • - Crióstato: consta de un micrótomo tipo Minot incluido en una cámara de congelación. El volante de inercia que controla la realización

del

corte

permanece en el exterior, mientras que la cuchilla y el mecanismo de avance están

situados dentro de la cámara fría (normalmente a -20º C).

Citologia Exfoliativa

Utilidad Descatar Malignidad

Determinacion de Sexo

Estudio Hormonal

CITOLOGIA EXFOLIATIVA

Citología exfoliativa: estudio citológico de las células exfoliadas de un órgano en comunicación con el exterior o

fácilmente accesible: cérvix y/o

vagina,

bronquios,

mucosa

estómago

oral,

CITOLOGIA EXFOLIATIVA  Citología exfoliativa: estudio citológico de las células exfoliadas de un órgano en comunicación
CITOLOGIA EXFOLIATIVA  Citología exfoliativa: estudio citológico de las células exfoliadas de un órgano en comunicación
CITOLOGIA EXFOLIATIVA  Citología exfoliativa: estudio citológico de las células exfoliadas de un órgano en comunicación
CITOLOGIA EXFOLIATIVA  Citología exfoliativa: estudio citológico de las células exfoliadas de un órgano en comunicación

CITOLOGIA EXFOLIATIVA O

PAPANICOLAU

Es una técnica que

nos

sirve

detectar

precozmente

cáncer

cervicouterino.

para el
para
el

Citologia cervicovaginal

  • La toma citológica cervicovaginal consiste en pasar suavemente un algodón y una espátula de madera por el cuello uterino El procedimiento es indoloro.

  • El moco obtenido que contiene células se deposita en un pequeño cristal (portaobjetos) y se tiñe con diversos colorantes. Más tarde se examinan al microscopio las características de forma, tamaño, coloración

...

,

etc., que tienen las células.

  • Distintas células de aspecto normal

CITOLOGIA EXFOLIATIVA

Los

pasos a seguir en

citología son:

la toma de

 · Anamnesis y registro para PAPANICOLAU citología.  · Preparación de las láminas.  ·
·
Anamnesis y registro para
PAPANICOLAU
citología.
· Preparación de las láminas.
·
Toma
de
la muestra
utilizando espátula de madera
o plástico para el exocérvix y
cepillo para el endocérvix,
teniendo en cuenta:
- No hacer tacto vaginal antes
de la toma de la muestra
- Usar espéculo sin lubricante
- Exponer muy bien el cérvix
-
Limpiar el
exceso de flujo
con torunda de algodón.
  • - Extender la muestra en forma adecuada para que quede delgada

  • - Fijar la muestra utilizando cito-spray, fijador comercial o alcohol al 95%.

  • · Identificar adecuadamente la lámina.

  • ·Informar a la usuaria sobre la importancia de reclamar oportunamente el resultado.

CITOLOGIA EXFOLIATIVA

CITOLOGIA EXFOLIATIVA 1. Infección - Vaginosis Bacteriana - Tricomonas - Clamydia - Herpes 2. Otros ·

1. Infección

  • - Vaginosis Bacteriana

  • - Tricomonas

  • - Clamydia

  • - Herpes

2. Otros

· Cambios reactivos

  • - Cambios reparativos

  • - Inflamación por atrofia

Citologia Cervicovaginal

Citologia Cervicovaginal

La biopsia dirigida y el curetaje endocervical pueden

arrojar

cualquiera

de

los

anatomopatologico:

siguientes

· Negativa para neoplasia · Infección por VPH · NIC de bajo grado: NIC I

resultado

· NIC de alto grado: NIC II, NIC III

·Neoplasia

microinfiltrante:

adenocarcinoma

escamocelular

o

·Neoplasia infiltrante: escamocelular o adenocarcinoma

CITOLOGIA EXFOLIATIVA CITO BRUSCH

CITOLOGIA

EXFOLIATIVA

CITO BRUSCH
CITO BRUSCH
CITOLOGIA EXFOLIATIVA CITO BRUSCH

La citología exfoliativa oral se define como el estudio e interpretación de los caracteres de las células que se descaman,

natural o artificialmente, de la

mucosa

oral.

Consiste

en

observar

al

microscopio

la

morfología

de

las

células

epiteliales

superficiales

después de su toma, fijación y

tinción

(6).

Es

una

técnica

sencilla,

no

agresiva,

relativamente

indolora

y

bien

aceptada por los pacientes, por

lo

que

podría

ser

útil

en

el

diagnóstico

precoz

del

cáncer

oral

La citología exfoliativa oral se define como el estudio e interpretación de los caracteres de las
La citología exfoliativa oral se define como el estudio e interpretación de los caracteres de las

2. FIJACION

  • La fijación tiene por objeto la conservaion celular, evitando su destruccion Por lo tanto es un método histológico destinado a obtener preparados duraderos que conservan la estructura morfológica y química de las células

2. FIJACIÓN

La fijación tiene por objetivo:

Mantener

el

tejido

en

estado natural y evitar su

desintegración

autolisis.

o

su

 

Endurecer el material

Eliminar bacterias u otros agentes.

2. FIJACIÓN La fijación tiene por objetivo:  Mantener el tejido en estado natural y evitar

Fijación de la muestra.

FIJADORES

Se llaman fijadores a las sustancias químicas o a los agentes físicos que se utilizan para tal fin.

Cualidades que debe tener un fijador:

1. Actuar con rapidez, matando y fijando a las células antes de que aparezcan los fenómenos agónicos o post-mortem (autólisis, desintegración, etc.).

  • 2. Poseer alto poder de penetración para asegurar la fijación

correcta hasta en las capas profundas de la pieza a fijar.

  • 3. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que

presentaban in vivo.

4. Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios para su observación ulterior (ejecución de cortes, coloración, etc.).

 

5. No provocar o impedir la producción de

estructuras artificiales.

6. No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos

friables o quebradizos

Manera de actuar de los fijadores

  • Varía con la composición o naturaleza de los mismos: coagulando las proteínas sin combinarse con ellas (alcohol, ácido pícrico, yodo, calor),

  • formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas (ácido crómico y sus sales), o reduciéndose en contacto con las mismas y originando en su seno un precipitado sumamente fino (ácido ósmico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).

  • La mayor parte de los fijadores actúan como oxidantes, favoreciendo así la coloración ulterior de los tejidos (recuérdese que éstos, en su mayoría, son reductores que muchos colorantes se transforman en leucobases incoloras al combinar una molécula de hidrógeno).

TIPOS DE FIJACION

Fijación por inmersión:

el tejido se sumerge en las soluciones fijadoras.

• Fijación por inmersión: el tejido se sumerge en las soluciones fijadoras.

Fijación por perfusión:

el órgano que debe fijarse

se infiltra con el medio de fijación a través de su propio sistema vascular.

• Fijación por perfusión: el órgano que debe fijarse se infiltra con el medio de fijación

Tipos de fijadores

Fisicos y Quimicos

  • FIJADORES FÍSICOS:

  • 1. Desecación

  • 2. Calor seco.
    3. Calor húmedo.
    4. Frío.

  • 5. Congelación y desecación.

Fijadores Quimicos

  • Fijadores químicos

  • Son los más utilizados; pueden ser fijadores simples, constituidos por una sola sustancia química, y fijadores compuestos o mezclas fijadoras cuando varias sustancias intervienen en su constitución.

  • FIJADORES SIMPLES:

  • a) Formol al 10%, es el más usado. Su empleo es aconsejable en todos los casos en que no se disponga de un fijador especial, principalmente cuando se trata de fijar órganos o tejidos para estudios histológicos topográficos.

  • b) Alcohol etílico absoluto o de 96%, se usa generalmente en microquímica.

  • c) Alcohol metílico, se lo emplea con frecuencia para fijar frotis desecados (sangre, médula ósea, ganglio, bazo, líquidos de punción, etc.).

  • d) Ácido ósmico al 1 ó 2%, es poco penetrante pero enérgico, conserva muy bien estructuras celulares.

FIJADORES COMPUESTOS:

  • En su composición intervienen un número

variable de fijadores simples racionalmente elegidos con el fin de completar la acción de cada uno de ellos o atenuar sus defectos.

  • a) Líquido de Fleming, mezcla cromo-osmio- acética.

  • b) Líquido de Zenker, mezcla bicromato- sublimado-acética.

  • c) Líquido de Helly, mezcla Zenker-formol.

  • d) Líquido de Bouin, mezcla picro-formos-acética

3. DESHIDRATACION

  • Las piezas al ser retiradas del fijador, o después de haberlas lavado, están embebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergiéndolos en líquidos anhidros, ávidos de agua. Para evitar alteraciones provocadas por una deshidratación brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando, preferentemente, alcohol etílico de graduación creciente.

Deshidratación en alcoholes sucesivos
Deshidratación en alcoholes sucesivos

4. ACLARAMIENTO

  • Impregnación por un disolvente de la parafina

  • Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xilol o toluol (este último es el que nosotros utilizamos). Al agregar el toluol, no debe aparecer ninguna turbidez. Si se pone blanco-lechoso es que la deshidratación no ha sido bien lograda y debemos repetir el baño de alcohol absoluto

PENETRACION EN PARAFINA

  • Penetración de la parafina

  • Se sumergen las piezas en parafina (56-58º de punto de fusión), mantenida líquida en la estufa a no más de 62ºC. Después de 1 a 2 horas se renueva la parafina

PENETRACION EN PARAFINA  Penetración de la parafina  Se sumergen las piezas en parafina (56-58º

5. Inclusion en parafina

  • Inclusión definitiva o formación del bloque

  • En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafina fundida, del mismo punto de fusión de la que ha servido para la penetración. Se colocan las piezas orientándolas y luego se pone el molde en heladera

  • A los 15-30 minutos la

parafina se habrá solidificado completamente

5. Inclusion en parafina  Inclusión definitiva o formación del bloque  En moldes de papel

6. CORTE

  • El objeto de la inclusión es hacer posible la reducción del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la luz para examinarlo al microscopio. Los micrótomos son instrumentos de gran precisión que nos proporcionan cortes delgados parejos y de espesor graduable. Los cortes más corrientes son los de 4-6 micras

6. CORTE  El objeto de la inclusión es hacer posible la reducción del tejido a

Tipos de Microtomo

  • - Tipo deslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla se desliza por unas guías especiales merced a un soporte al que se sujeta la cuchilla con unos tornillos.

  • - Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se desliza sujeta a una platina, ésta se desliza verticalmente cuando se hace girar una manivela. Permite obtener cortes seriados en forma de cinta.

  • Tipo Criostato

7. Coloracion

  • Clasificación de los colorantes:

  • Según su origen se clasifican en:

  • COLORANTES NATURALES:

  • Animales (carmín)

-

-

Vegetales (hematoxilina, orceína, azafrán)

  • COLORANTES ARTIFICIALES O SINTÉTICOS (COLORES DE ANILINA):

  • Ácidos: sales cuya base es incolora y su ácido es coloreado (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes citoplasmáticos.

-

Básicos: sales cuya base es coloreada y el ácido es incoloro (azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes nucleares.

-

Neutros: sales en las que tanto el ácido como la base son coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro.

-

-

Indiferentes: no forman sales. Tiñen aquellas sustancias que tienen un

poder disolvente superior al del líquido que ha servido para preparar la

solución colorante (Sudán lll, rojo escarlata).

COLORACION

  • las coloraciones pueden ser:

  • - Ortocromáticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solución colorante empleada. - Metacromáticas: una sustancia o un componente celular se tiñe con un color diferente al del colorante empleado.

COLORACION

Colorantes más utilizados en histología humana:

HEMATOXILINA:

  • - Es un colorante vegetal.

  • - Para ser utilizada debe ser oxidada previamente. Los agentes oxidantes

pueden ser: el aire (varios meses de exposición) u oxidantes artificiales (óxido

de mercurio, permanganato de potasio, dicromato potásico, etc.)

  • - Es un colorante directo, pero en la práctica se lo utiliza en forma de lacas hematoxilínicas (se utiliza alumbre de potasio o de sodio como mordiente

para preparar la solución colorante), comportándose en este caso como un colorante indirecto.

EOSINA:

  • - Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixanténicos halogenados con tres grupos arilo).

  • - Presenta autofluorescencia espontánea.

  • - Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohólicas.

Para colorear se emplea generalmente una batería de coloración

  • PAS (Ácido Peryódico de Schiff): Tiñe carbohidratos (mucopolisacáridos) de color rojo, por ejemplo las células caliciformes en el intestino.

  • Tricrómico de Masson: Tiñe de color azul la colágena, de rojo la queratina, y de morado los núcleos (muy utilizada para los cortes de piel).

  • Nissl: Tiñe de color morado el retículo endoplásmico rugoso y los corpúsculos de Nissl en las neuronas.

COLORANTES Y REACCIONES HISTOLOGICAS COMUNES

REACTIVO

RESULTADO

Hematoxilina

Azul: núcleo; regiones acidas del citoplasma; matriz del cartílago

Eosina

Rosa: regiones básicas del citoplasma; fibras de colágena.

Tricómica de Masson

Azul oscuro: núcleo Rojo: musculo, queratina, citoplasma Azul claro: mucinógeno, colágena.

Acido peryóico de Schiff

Magenta: moléculas ricas en glucógeno y carbohidratos.

Tinciones histológicas

REACTIVO

NUCLEOS

CITOPLASMA

FIBRAS

FIBRA

COLAGENAS

ELASTICAS

Hematoxilina y Eosina (H-E)

Azul violeta

Rojo o Azul violeta (ribosomas y RER)

Rojo

Sin tinciön o rosa

Azan

Rojo brillante

Rosa palido o azul tenue

Azul

Sin tinciön o rojo a azul rojizo (abundan, ligamentos.

Para elastina (resorcina-fucsina u orcreina)

     

Negro violeta (r-f) o rojo pardo (o)

Van gieson

Azul negro

Amarillo o

Rojo

Sin tinciön

parduzco claro

especial

Tricomica de

Pardo negro

Rojo ladrillo

Verde

Sin tinciön.

Goldner

EH (hematoxilina

Heterocromatina y

Centriolos,

Sin tinciön

Gris tenue

ferrica) de

nucleolo azul

cinocilios,

especial o gris

Heindenhain.

negro

amarillento

Tinciones histoquímicas

Reacción de PAS

Tinción rojo violeta. El acido

peryodico grupos aldehídos en el glucógeno y el los componentes sacáridos de las glicoproteínas. El reactivo de Schiff los tiñe de rojo

violeta

Azul alciano

Tinción

azul.

Polianiones:

moco

sulfatado, glucosaaminoglucanos,

hialuranos.

 

Lípidos (Sudan III, Negro, aceite rojo

Naranja-rojo o pardoLípidos

 

0)

 

Tinción d Feulgen para ADN

Tinción purpura

 

Azul de toluidina

Tinción

azul.

Tiñe

la

cromatina

(ADN), el nucléolo y los ribosomas.

8. Montaje

  • Luego de la coloración, se deshidrata el corte y se procede a la aclaración y montaje definitivo, dado que nos hemos propuesto hacer un preparado en condiciones de ser observado y protegido del ambiente para evitar su deterioro.

  • La deshidratación se realiza con alcoholes de graduaciones crecientes.

  • La aclaración se realiza con xilol o carboxilol. El objetivo de

este paso es impregnar el corte con un disolvente del Bálsamo de Canadá, que al mismo tiempo le confiere un índice de refracción semejante al del vidrio.

  • Para el montaje se limpia el portaobjeto alrededor del corte y se deposita sobre el mismo una gota de Bálsamo de Canadá disuelto en xilol y se cubre con un cubreobjeto.

Reglas Básicas para el diagnostico de un preparado Histológico

  • Mírese el preparado a simple vista: Determinar si es

un órgano macizo o hueco, bordes son artificiales o naturales.

Mírese con el microscopio con el aumento menor y determinar si hay una organización definida ( Corteza y Medula)

Examínese todo el corte minuciosamente con los aumentos menor- mediano

Procédase a un diagnostico hístico especifico cuidadoso Solo utilícese gran aumento para detalles celulares.

PASOS DE LA TECNICA

  • I. Fijación

  • En formol al 10% (1 parte de formol y 9 partes de agua destilada) por lo menos durante 6 hs.

  • II. Corte

  • Se le da el tamaño deseado a la pieza y se la coloca en una bolsa de gasa, con el fin de enjuagarla en agua corriente durante, por lo menos, 15'.

  • III. Deshidratación

  • 1) Alcohol 70º, 1h30'. 2) Alcohol 96º, 1h30'. 3) Alcohol 100º (l), 1h30'. 4) Alcohol 100º (ll), 1h30'. 5) Toluol, entre 1h30' y 3hs.

  • IV. Inclusión

  • 1) Secado de la muestra con gasa. 2) Parafina 56º (l), 1h30'. 3) Parafina 56º (ll), 1h30'. 4) Formación de la barra. 5) 30' de frezzer. 6) Fractura del taco

  • V. Corte