UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO DEPARTAMENTO DE QUIMICA

SECCION DE ANALISIS QUIMICO INSTRUMENTAL

METODOS Y CURVAS DE CALIBRADO

EN ANALISIS INSTRUMENTAL

MsC Alfredo Cruz Monzn

Trujillo Per

METODOS DE CALIBRADO En muchos anlisis qumicos por va instrumental es comn medir la respuesta analtica de un instrumento (absorbancia, rea, %emisin, etc), ante cantidades conocidas de analito (patrones o estndares). Es tambin comn representar dicha relacin mediante las llamadas Curvas de Calibracin, que viene a un grafico que representa la zona donde la seal analtica es directamente proporcional a la concentracin, relacin conocida como Ley de Beer Lamberg.

Disoluciones Patrn: Aquella que contiene una cantidad perfectamente conocida de un analito particular .(casa comercial reconocida, por ejemplo Merck, Omega, Sigma, Aldrich,etc). Disoluciones Standard: Aquella que contiene una cantidad conocida de analito por preparacin directa en un laboratorio de ensayos qumicos.

Las disoluciones patrn sirven justamente para evaluar a travs de un instrumento (adecuado y cualificado), la veracidad, precisin y exactitud con que se han preparado las disoluciones estndar. Las disoluciones que contienen todos los reactivos y disolventes usados se llaman disoluciones en blanco o simplemente blanco , los cuales iden la respuesta del instrumento a las impurezas o especies interferentes de los reactivos.

CONSTRUCCION DE CURVAS DE E CALIBRADO

1. Preparar muestras conocidas de analito que cubran el intervalo adecuado de concentraciones que cumplan con la ley de Beer. 2. Calibrar el instrumento a cero con el blanco, para corregir la respuesta del mismo a la presencia de algn contaminante. 3. Trazar un grafico con las respuestas del instrumento frente a la concentracin del analito determinado. 4. Determinar la mejor recta que ajusta dichos datos (incluyendo el blanco), que se encuentran comprendidos en la zona lineal. 5. Determinar la pendiente y ordenada en el origen con sus respectivas incertidumbres (en trabajos detallados cada estndar de lee mnimo 5 veces). 6. Obtener la ecuacin de regresin lineal que ajusta dichos datos, la cual tiene la forma:

Respuesta Mtodo Analtico = A + B X Y = A + BX

El intervalo lineal de un mtodo analtico, es el intervalo de concentraciones del analito en que la respuesta es proporcional a su concentracin. El intervalo dinmico, es el intervalo en el cual hay una respuesta del instrumento al analito aun cuando no sea lineal. Antes de la construccin de la curva de calibrado se hace necesario realizar el estudio estadstico de descarte de datos, o en su defecto el calculo de %Coeficiente de Variacin, el cual no debe sobrepasar el 1% para poder afirmar que los valores son estadsticamente similares. No es fiable extrapolar la curva de calibrado para leer un valor que esta fuera de l, por cuando cabe la posibilidad que exista desviaciones tanto positivas como negativas de la ley de Beer. Se debe medir entonces solamente en el intervalo lineal, y en caso de haber valores fuera del mismo se deben realizar las convenientes diluciones de muestra.

METODO DE CURVA DE ESTANDARES EXTERNOS

Ejemplo: Se requiere cuantificar el grado de contaminacin por nitritos (NO2-), de un residuo slido. Se usaron en la metodologa fiolas de 50 mL para preparar las s sgtes disoluciones estndar:
Estndar 1 2 3 4 5 6 ppm NO20,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 Absorbancia 0,000 0,022 0,043 0,067 0,088 0,111

Si se toman 5,1244 g de una muestra solida y se extrae los nitritos hacia una fiola de 100 mL y de all se colocan 5 mL de muestra y se le trabaja exactamente como los estndares (aforando finalmente a la marca con agua destilada), entonces se obtiene una absorbancia de 0,024. Determinar las ppm en la muestra solida analizada

Determinacion de Nitritos por Espectrofotometria Molecular

0.12

0.1

y = 0.111x - 0.0003 R = 0.9998

0.08

Absorbancia

0.06

0.04

0.02

0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

-0.02

Concentracin Nitritos (ppm NO2-)

METODO DE ADICION DE ESTANDARD

Es especialmente til en el anlisis de muestras complejas, en donde es considerable el efecto de la matriz.

Se puede aplicar de diferentes formas, siendo la mas habitual, la sgte:

1. Depositar en una serie de fiolas una mismo volumen de muestra Vx

2. Aadir volmenes crecientes de una disolucin estndar (de concentracin Cs), a cada una de las fiolas. 3. Aforar a la marca con los reactivos y disolvente (Vt). 4. Leer en el instrumento correspondiente la cual emitir la seal analitica S. 5. Es posible tambin hacer adiciones sucesivas de la disolucin estndar a

un mismo volumen fijo de muestra, con lo cual las medidas se van

haciendo en la muestra original y despus de cada adicin de estndar sobre la muestra.

Resumiendo: Vx = volumen de muestra (alicuota), tomada. Cx = concentracin del analito en la muestra problema Vs = volumen de estandar aadido. Cs = concentracin del analito en la solucin estndar. S = seal analitica del instrumento
Si la respuesta del instrumento respecto al volumen de estndar aadido (Vs), es lineal, entonces:

S Cx)

Vs Cs + Vx Cx
Vt

S = K ( Vs Cs + Vx
Vt

S = K Vs Cs + K Vx Cx CS) Vs Vt Vt

S = K VX CX + (K
Vt Vt

Al comparar con la ecuacion: Y = A + BX

En donde los valores de A y B, se pueden determinar de la acuacin de a recta ajustada por los mnimos cuadrados. El valor de Cx (concentracin del analito en la muestra), se puede obtener simplemente relacionando:
A = B
De donde: Cx =

( K Vx Cx )/Vt (K Cs ) / Vt
A * Cs B * Vx

Vx Cx Cs

Ejemplo: En 05 fiolas de 50 mL se depositan exactamente 10 mL de una muestra de agua mineral, y se les adicionan secuencialmente 0 ; 5 ; 10 ; 15 y 20 mL de una disolucin patrn que contiene 11,1 ppm Fe3+. Si se les reduce a cada una de ellas para finalmente hacer reaccionar el Fe2+ con fenantrolina, entonces se desarrolla el color rojo caracterstico. Si el fotmetro reporta los sgtes valores

Estndar Vs (mL S. Patron) 1 2 3 4 5 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00

Absorbancia 0,240 0,437 0,621 0,809 1,009

Calcular las ppm Fe total presente en la muestra analizada.

Determinacion de Fe por Espectrofotometria - Adicion de Estndar
1.2 1

y = 0.0382x + 0.2412 R = 0.9998

Absorbancia

0.8 0.6 0.4 0.2 0

-10

-5 -0.2

10

15

20

25

Volumen de estandar aadido (mL)

Es posible tambin, (por cuestiones de ahorro de tiempo y volumen de muestra) , el uso de slo 02 fiolas, para lo cual se har solamente una nica adicin de estndar (Vs) a una de las 02 muestras, con lo cual:

S1 = seal analtica de la muestra diluida.

S2 = seal analtica de la muestra y el estndar aadido.

Donde: S1 = K Vx Cx / Vt

S2 = K (Vx Cx + Vs Cs ) / Vt

Dividiendo y despejando Cx (concentracin desconocida), nos queda:

Cx = __S1 Cs Vs___ ( S2 S1) Vx

Ejemplo:

Se tienen 02 fiolas de 50 mL en los cuales se depositan

exactamente 25 mL de una muestra de agua residual filtrada y clarificada. Se adiciona a una de ellas 2 mL de

una disolucin patrn de 2,50 ppm Cu.

Se aforan ambas fiolas hasta la marca con una solucin de HNO3 al 1%, y se lleva a lectura en un equipo de Absorcin Atmica (AAS), con lo cual se obtienen absorbancias de 0,80 y 1,40 respectivamente.

Determinar las ppm Cu, presente en la muestra

problema.

METODO DEL PATRON INTERNO Un patrn interno es una cantidad conocida de un compuesto que es diferente al analito de inters pero que se aade a las muestras (o estndares), problema. Son especialmente tiles cuando la cantidad de muestra analizada (o la respuesta del instrumento), vara algo cada vez que se utilizan por razones que son difciles de controlar. Asimismo es de gran utilidad cuando pueden darse perdidas de muestra durante los pasos de preparacin previo al anlisis. Consiste en aadir una cantidad medida de patrn interno a la muestra problema, para posteriormente y medir la relacin (patrn interno/analito), Verificando su constancia de variacin, por cuanto se pierde la misma fraccin

de ambos en cualquier operacin.

Para usar un patrn interno se prepara primero la mezcla conocida tanto del patrn interno como del analito, y luego se mide la respuesta relativa del detector a las 2 especies.

La seal de respuesta a graficar en el eje Y, no es la del analito, sino el cociente (seal analito/seal patron interno), mientras que en el eje X se ubican siempre las concentraciones del aalito en los estandares:
Ejemplo:
Se tienen 05 estndares cuyas concentraciones en Sodio son: 0,10 ; 0,50 ; 1,00 ; 5,00 ; 10 ppp Na; a la vez que son de 1000 ppm Li. (Fiolas de 100 mL) Al leer en un equipo de AES (emision atomica), se obtuvieron los sgtes datos expeerimentales:
Estndar 1 2 3 4 ppm Na+ 0,10 0,50 1,00 5,00 Emision Na+ 0,11 0,52 1,80 5,90 Emision Li 86,00 80,00 128,00 91,00

10,00

9,50

73,00

Muestra

4,4

95

En una fiola identica se colocan 20 mL de muestra y una cantidad de Li suficiente para que al aforar a la marca tenga tambien 1000 ppm Li. Al leerla se obtiene una intensidad de emision de 4,4 para el sodio y una intensidad de 95 para el Litio. Calcular las ppm Na en la muestra problema.

Estndar 1 2 3 4 5 Muestra

ppm Na+ 0,10 0,50 1,00 5,00 10,00

Emision Na+ 0,11 0,52 1,80 5,90 9,50 4,4

Emision Li 86,00 80,00 128,00 91,00 73,00 95

(Emis Na+/Emis Li) 0,00128 0,0065 0,01406 0,06484 0,13014 0,04632

Para Graficar:

Determinacion de Sodio por Emision Atomica - Patron Interno

0.14

0.12

(Emision Na+/Emision Li)

y = 0,013x + 0,0003 R = 0,9999

0.1

0.08

0.06

0.04

0.02

0 0.00

2.00

4.00

6.00

8.00

10.00

12.00

Concentracin Sodio (ppm Na+)