Aminocidos, Pptidos e Protenas

Aminocidos, Pptidos e Protenas

As protenas so as macromolculas biolgicas mais abundantes; So constituintes fundamentais de todas as clulas, sendo o veculo que transporta a informao do DNA para as vrias actividades celulares; Constitudas por aminocidos ligados entre si; A funo de uma protena determinada pela sua estrutura, logo depende da sequncia de aminocidos que a constitui.

Aminocidos
Molcula orgnica constituda por, pelo menos, um grupo amina e um grupo carboxilo; Existem cerca de 20 aminocidos presentes nas protenas, sendo todos eles aminocidos; -aminocidos: o grupo amina e o grupo carboxilo esto ligados ao mesmo carbono (carbono- );

O -aminocido mais simples.

Um aminocido definido pelo seu grupo lateral (R).

Estrutura geral de um aminocido.

Aminocidos Essenciais
Aminocidos essenciais so aqueles que no so sintetizados pelo organismo humano; fundamental uma dieta equilibrada em aminocidos essenciais; Os nove aminocidos essenciais para o Homem so: fenilalanina, valina, treonina, triptofano, leucina, isoleucina, metionina, histidina e lisina; Para alm destes, a arginina, cistena, glicina, glutamina e tirosina so condicionalmente essenciais, dependendo das caractersticas da populao; Por exemplo, doentes de PKU (fenilcetonria) necessitam de ingerir regularmente tirosina.

Off-topic: PKU uma doena gentica autossmica recessiva caracterizada por uma deficincia na enzima fenilalanina hidroxilase, que catalisa a reaco de sntese da tirosina a partir da fenilalaniana.

Estereoisomeria
Devido geometria tetradrica em torno do carbono-, os vrios grupos podem ocupar dois arranjos espaciais diferentes (L- e Daminocidos); O carbono- , portanto, um centro quiral (o que implica que opticamente activo); Como as duas formas no podem ser sobrepostas, designam-se enantimeros; Os L-aminocidos predominam na D-gliceraldedo Natureza.
L-gliceraldedo

Estereoismeros da alanina.

Classes de Aminocidos
A classificao depende das caractersticas do grupo R; Classificao quanto : Polaridade (polar ou apolar) determina a tendncia para interagir com a gua; Carga (positivo ou negativo) propriedades cidobase; Aromticos;

Aminocidos polares.

Aminocidos apolares.

Aminocidos positivos.

Aminocidos negativos.

Aminocidos aromticos.

de notar que, devido presena de ligaes deslocalizadas, estes aminocidos tm uma absorvncia muito caracterstica na regio dos ultravioletas.

Propriedades cido-Base
Quando em soluo aquosa, um aminocido existe sob a forma de um io dipolar (zwiterio, do alemo io hbrido); Um zwiterio pode actuar como cido ou como base (os aminocidos so anfotricos);

Curvas de Titulao

pKa do grupo carboxilo ~2

pKa do grupo amina ~9

Curva de titulao da glicina.

Curva de titulao do glutamato.

Os aminocidos tm vrias regies tampo.

Ligao Peptdica
a ligao de 2 aminocidos (com libertao de gua) para formar um dipptido.

Esquema geral da reaco.

Exemplo de um pentapptido: SerGlyTyrAlaLeu.

Oligopptido vrios aminocidos; Polipptido muitos aminocidos;

Protenas milhares de aminocidos.

Maior protena conhecida: titina tem cerca de 27000 aminocidos.

Cadeias de aminocidos
Pptidos
(N a.a. < 30)

Ribossomticos

No Ribossomticos

Polipptidos
Polmeros de aminocidos
Massa molecular (Da ou MW)

Independente da conformao estrutural

Estruturas

Estrutura Primria

Estrutura Secundria
Local Estabilizada por pontes de Hidrognio

Hlices

Turns

Folhas

Hlices

Folhas

Anti-Paralelas

Paralelas

Estrutura Terciria
Tridimensional

Foras intervenientes na estrutura

Ligaes Hidrofbicas
Dependentes do meio

Pontes de enxofre

Motivos e Domnios

Estrutura Quaternria
Fibrosas Globulares

Mquinas Moleculares

Tcnicas de separao
As caractersticas das protenas e de outras biomolculas usadas nos vrios processos de separao so:
solubilidade, carga inica, tamanho molecular e especificidade da ligao com outras molculas biolgicas.

Solubilidade Proteica
Cada protena precipita a concentraes de sal diferentes, esta caracterstica aproveitada como um meio de purificao proteica

Cromatografia por excluso molecular

A fase estacionria (matriz) consiste num gel com poros de diferentes tamanhos

proteinas com maior massa

Recolha das protenas de menor massa que entretanto percorreram o caminho dos poros

Cromatografia por troca inica

Molculas carregadas ligam-se a grupos de carga oposta que se situam na matriz Remoo das protenas que se ligaram matriz feita alterando as caractersticas do meio

protenas com carga negativa

Cromatografia por afinidade

Um ligando que tem uma afinidade especfica a uma certa protena ligado a uma matriz inerte por ligao covalente (brao de intercalagem)

protenas que no tm afinidade com o ligando

Remoo das protenas que reconheceram o ligando feita alterando as caractersticas do meio

Electroforese
Gel SDS-PAGE

As protenas tratadas com SDS ficam com a razo forma e carga por massa, similares

Electroforese
Gel Bidimensional

Eixo Horizontal carga Eixo Vertical massa

Centrifugao

Sequenciao
Real da cadeia polipeptdica
Sequncia de 8 passos

Do DNA do gene correspondente

Espectroscopia
O peso molecular calculado usando o tempo de voo de um modelo

Para molculas com a mesma carga, o tempo do detector inversamente proporcional massa.

Passos chave: 1. Produo de ies a partir da amostra 2. Separao dos ies com massas diferentes 3. Deteco dos ies produzidos no primeiro passo 4. Recolha de informao para construir o espectro de massa

Propriedades espectroscpicas dos aminocidos

Absoro da luz UV (p.e.: Fen, Trp, Tyr) Restantes aminocidos absorvem IV
Ao incidir luz na amostra, a diferena entre a intensidade incidente e a transmitida permite determinar a absorvncia Como cada a.a. tem uma absorvncia especfica, possvel determinar a estrutura 3D da protena

Resumo
Caracterstica Carga Processo de separao Cromatografia por troca inica; Electroforese; Cromatografia de gel; SDS-PAGE; Centrifugao; Cromatografia por afinidade;

Tamanho

Especificidade da ligao

Critrio de Pureza
Assume-se que a protena se encontra num elevado grau de pureza, aps se revelarem homogneos todos os testes disponveis para a caracterizao de uma protena
Mtodos cromatogrficos so pouco sofisticados na avaliao da pureza Mtodos electroforticos so exactos para avaliar identidade molecular

Exemplos de Proteinas Biolgicas

Titina

1. Movimento

(actina, miosina, msculo)

mantm integridade estrutural do sarcmero passagem de substncias atravs da membrana plasmtica transporte de gases atravs da circulao sangunea auxiliam a correcta dobragem da protena encaminham protena destruio (protenas proteolticas)

Protena carreadora
(atravs membrana)

2. Transporte

Hemoglobina, Mioglobina
(por todo o corpo)

3. Transporte/ Auxlio clula

Chaperones

Exemplos de Proteinas Biolgicas

4. Transduo de sinal 5. Transmisso de sinais por todo o corpo
(hormonas) Neurotransmissores
(dopamina, serotonina, noradrenalida, acetilcolina)
transduo de sinal durante a sinapse

Citocinina

responsvel pela ocorrncia, ou nao, de divises celulares provoca contraces do tero e ejeco do leite das glndulas mamrias localizados na membrana celular dos linffitos B permitem fazer reconhecimento de substncias ou organismos estranhos

Oxitocina

6. Reconhecimento celular

Anticorpos

Exemplos de Proteinas Biolgicas

7. Suporte
Histonas Protenas estruturais intrinsecas
conferem suporte ao material gentico (formao de cromatina) protenas transmembranares ligadas ao citoesqueleto da clula confere proteco e estrutura a partes do corpo (p.e. cabelo, unhas) insero de numerosos filamentos de actina

8. Estrutura
Queratina

9. Juno intercelular

Actina

Exemplos de Proteinas Biolgicas

Enzimas
metabolismo energtico (fosforilao oxidativa e fotossntese) colabora no processo de coagulao sangunea transforma fibrinognio em fibrina desencadeia uma reaco em cascata dando uma resposta inflamatria

10. Metabolismo

(agrupamento em sistemas enzimticos nas membranas)

11. Coagulao 12. Resposta inflamatria

Trombina
(protrombina)

Sistema de complemento
(protenas de complemento)