Catalina bejarano Julio Cesar Heredia

Agrobacterium tumefaciens produce tumores en las plantas.

A. tumefansis es una bacteria del

suelo,gramnegativa,que infecta a las plantas en lugares donde hay heridas y que produce la enfermedad de las agallas de la corona. Afecta a una amplia gama de especies vegetales, fundamentalmente dicotiledneas. Las agallas son protuberancias que se producen en los lugares de infeccin.

Agrobacterium tumefaciens
La bacteria se identifico en 1907

como responsable de la enfermedad ,y en 1947 se determino que las protuberancias que produca estaban formadas por un conglomerado de clulas indiferenciadas que se dividen activamente .

Agrobacterium tumefaciens transfiere genes a las clulas vegetales

El material gentico de Agrobacterium tumefaciens se

encuentra localizado en su cromosoma y en varios de sus plsmidos. Uno de esos plsmidos es el responsable de la induccin de tumores y se le llama plsmido Ti (tumor inducing). Durante el proceso de infeccin la bacteria transfiere una porcin bien definida de ese plsmido, llamada T-DNA, al genoma de las clulas vegetales. La integracin y expresin de ciertos genes del T-DNA hace que las clulas transformadas se dividan y proliferen sin control y se formen los tumores.

Plsmido Ti
ADN-T, que es lo nico que se

transfiere. Posee borde izquierdo, gen de biosntesis de la hormona vegetal. Borde derecho gen de catabolismo de opinas . Genes vir que provocan la transferencia de la regin T-DNA.

Mecanismo de infeccin
El ADN-T entra al ncleo y se inserta al azar en algn sitio del genoma. All se expresan sus dos genes: El de las hormonas que provoca el crecimiento descontrolado de las clulas vegetales. La sntesis de metabolitos denominados opinas (aminoacidos que ayudan a la supervivencia de la bacteria)

Mecanismo de infeccion

Los genes T-DNA se pueden sustituir por genes forneos

Lo que se hace es obtener un plsmido Ti no

oncogenico,eliminando los genes los genes del T-DNA y sustituyndolos por genes forneos. Sin embargo ,el gran tamao del plsmido Ti hace difcil su manipulacion,por eso se han sintetizado vectores de menor tamao, que solo conservan las regiones esenciales para la transformacin . Se denominan vector de transformacin cumplen las funciones de transferir ,integrar y hacer posible la expresin del segmento de DNA forneo.

Regiones de transformacin gentica mediada por Agrobacterium

1. 2.

3.

4. 5.

Un origen de replicacin en E.coli, que permite a la bacteria multiplicar el plsmido donde se ha introducido el DNA forneo. Un origen de replicacin en Agrobacterium,que le permita multiplicarse en la bacteria E. coli. Genes de resistencia a antibiticos ,para seleccionar E coli y Agrobacterium que contengan los plsmidos vectores. Una regin vir, esencial para la transferencia e integracin del T-DNA en el genoma de la clula vegetal. Un T-DNA desarmado que solo conserva los bordes derecho e izquierdo.

Vectores cointegrados
Se toma el plsmido de E. coli

donde se ha clonado previamente el gen forneo y se transfiere al plsmido de Agrobacterium mediante recombinacin homologa.
El resultado es un plsmido donde

se encuentra la regin vir y el TDNA con el DNA foraneo.

Vectores binarios
Se utilizan dos plsmidos de Agrobacterium ,uno con la

regin vir y el otro con el T-DNA, este segundo plasmido es mucho mas pequeo que el plasmido Ti y es mucho mas facil de manipular para poder introducir los genes foraneos entre los bordes del T-DNA.
Este tipo de vectores son los mas utilizados ya que se

requiere menos manipulacin de los plsmidos.

Marcadores de seleccin
Permiten a la clula transformada

vivir en presencia de una agente selectivo, que suele ser un antibitico o un herbicida. El gen marcador de seleccin mas utilizado es el que confiere resistencia al antibitico kanamisina.

Marcadores informadores
Confieren a la clula transformada una

caracterstica fsica nueva que la hace distinguible de las no transformadas. Se ha desarrollado un marcador informador que no precisa de la adicin de un sustrato para identificar las clulas transgnicas. El gen de la fluorescencia verde, procedente de la medusa Aequorea victoria.

Gracias

Bibliografa
Azcon Bieto y Manuel Talon.fundamentos de

fsiologia vegetal.mcgraw hill,2008.