CICLO CELULAR

CROMOSSOMOS

COMPACTAO DA CROMATINA

NVEIS DE COMPACTAO DA CROMATINA

1:

NUCLEOSSOMA - octmero de histonas H2A, H2B, H3 e H4. H1. Reduo no tamanho DNA entre 6 a 7 vezes. 2: SOLENIDE- 6 nucleossomos. 3 :ALAS - solenide- alas unidas - protenas no-histnicas (crommeros). 4 CROMOSSOMOS- enrolamento final.

1 NVEL: NUCLEOSSOMO

SOLENIDE

SOLENIDE

COMPRIMENTO DO CROMOSSOMO 1
DNA NUCLEOSSOMA SOLENIDE

PRFASE METFASE BANDA

15cm 1,5cm (1:10)~ 200pb 0,3cm (1:50)~1200pb 10a 100kb 50m (1:3000) 15m (1:10000) 10 a 20 milhes pb

PRINCIPAIS CONSTITUINTES CROMOSSMICOS

Elementos Fundamentais de um Cromossomo: Origens de Replicao; Um centrmero; Telmeros;

ORIGENS DE REPLICAO DO DNA

Cada

cromossomos replicado pelo incio simultneo da replicao em regies mltiplas dentro do cromossomo Rplicons. processo replicao controlado cada cromossomo ser replicado totalmente apenas uma vez na fase S

CENTRMEROS
Constrio

Primria seqncias DNA repetitivas + protenas ( CENP-B). Cpias seqncias mltiplas com 171 pb = DNA alfa. Classificao da forma cromossomo. Stio de ligao das cromtides irms.

CENTRMERO

CENTRMERO
Formao

cinetcoro= complexo DNA+ protenas, durante a prfase.

Cinetcoro-

interao complexa; - microtbulos;

CENTRMERO

CLASSIFICAO CROMOSSMICA

TELMEROS

Telmeros extremidades cromossmicas; DNA + protenas, seqncias repetidas (TTAGGG)n Funo : Integridade cromossmica; estabilidade; evitam a degradao dos cromossomos (nucleases); replicao correta dos telmeros (telomerase). Telomerase presente clulas embrionrias e germinativas; clulas somticas parecem ter telomerase inativa morte celular por encurtamento telmero antes de ocorrer alterao cromossmica. Reduo : associao ponta a ponta; quebras ; translocaes. Telomerase ativa clula somtica poder indicar condio neoplsica.

SATLITES

Cromossomos

22. Ligado ao brao curto: Constrio secundria. Stio formao ribossomo (genes RNAr) Regies organizadoras nucleolares (RON/NOR)

Acrocntricos: 13, 14, 15, 21 e

TIPOS DE CROMATINA
Eucromatina

: ativa, menos condensada, replica cedo na fase S. Heterocromatina : seqncias repetidas, mais condensada, replica tarde na fase S. H. Constitutiva : sempre inativa (pericentromrica e brao longo do cromossomo Y ). H. Facultativa : inativa e ativa (cromossomo X)

CULTURA

CELULAR

MEIO DE CULTURA: RPMI 1640, TC 199, HAM F10, depender do tipo celular a ser cultivado. SORO FETAL: Bovino ou humano. Presena de fatores de crescimento celular. AGENTE MITOGNICO: Fito-hemaglutinina, etc ... se for necessrio.. AGENTE BLOQUEADOR DA DIVISO CELULAR: Inibidores do fuso: Colchicina; vinblastina. SOLUO HIPOTNICA: Tumefao das Soluo salina ( KCl; Citrato de sdio; etc...) clulas;

Caritipo - Tcnica

Sangue perfrico (linfcitos); Meio de cultura ( RPMI/199 ,soro, fito-hemaglutinina) Incubar 37 C por 72 horas; Adicionar colchicina; e a soluo hipotnica; Fixar o material; Distribuir em lminas; bandas; colorao(GIEMSA); Observar em MO; Selecionar, fotografar e montar o caritipo; Resultado.

ESQUEMA DO CARITIPO EM SANGUE PERIFRICO

METFASE HUMANA

BANDAS G
cromossomos

submetidos ao de uma enzima tripsina que desnatura as protenas cromossmicas; colorao posterior com corante de Giemsa; as bandas G escuras so regies ricas em AT. cada cromossomo com padro tpica de regies claras e escuras.

NOMENCLATURA

NOMENCLATURA DO CARITIPO HUMANO PADRO BG

BANDAS G

CARITIPO FEMININO

BANDAS Q

cromossomos corados com corantes fluorescentes (quinacrina-mostarda; DAPI...); regies cromossmicas ricas em AT; cromossomos com padro de bandas brilhantes e opacas; anlise feita em microscpio de fluorescncia (UV); diferenciao longitudinal dos cromossomos.

BANDAS Q

BANDAS R
cromossomos

so desnaturados com o uso de soluo salina e calor; colorao posterior com corante de Giemsa; cada cromossomo com padro tpica de regies claras e escuras; as bandas R escuras so regies ricas em GC; padro inverso das bandas Q e G; diferenciao longitudinal dos cromossomos.

BANDAS R

COMPOSIO DAS BANDAS CROMOSSMICAS

Padro de banda BANDAS G/ Q Propriedades

Contm DNA rico em AT (55-60%); Replicao tardia na fase S Contm poucos genes;

BANDAS R

DNA rico em GC (50-60%) Replicao precoce na fase S Contm a maioria dos genes

BANDAS DE ALTA RESOLUO

cromossomos

no estgio de prmetfase, menos condensados; tcnica de bandas G, Q ou R colorao posterior com corante de Giemsa; maior nmero de bandas; deteco de alteraes cromossmicas estruturais menores.

STIOS FRGEIS
zonas

de instabilidade cromossmicas; cultura especial com meio pobre em timidina e cido flico ou um inibidor da timidina sintetase (metatrexate ou fluordesoxiuridina); colorao com uso de Giemsa; stios frgeis visualizados como falhas ou quebras cromossmicas; regies susceptveis a quebras cromossmicas;

STIO FRGIL

BANDAS C
cromossomos

submetidos a ao de uma soluo de hidrxido de brio; colorao posterior com corante de Giemsa; desnaturao da eucromatina e heterocromatina facultativa; marcao da heterocromatina constitutiva; regies centromricas dos cromossomos e outras regies que contenham heterocromatina constitutiva (brao longo do Y).

BANDA C

Nomenclatura de Bandas

HIBRIDIZAO IN SITU COM FLUORESCNCIA (FISH)

O FISH a tcnica na qual um segmento de DNA cromossmico especfico (sonda) hibridizado com cromossomos metafsicos, profsicos ou interfsicos, e ento observado com microscopia de fluorescncia. Sonda locus especfica Sonda centromrica Sonda para marcar todo o cromossomo

FISH

FISH EM CLULA NEOPLSICA