Instituto Politcnico da Guarda

Escola Superior de Sade

Drug delivery into the skin by degradable particles

A libertao de frmaco na pele por partculas biodegradveis
Tecnologia Farmacutica 3 ano | 2 semestre 10 de Abril de 2013 Andr Arajo Pereira Ana Cristina Gonalves 7003229 Ana Lima 7003253

Resumo

Atualmente Partculas pode ser utilizadas como sistema de libertao de frmacos pelos folculos pilosos Estudo realizado Sistema de libertao de frmaco com dois componentes:

Partculas biodegradveis isotiocinato de fluorescena

Formulao para degradao da protease

Resumo
Aplicaram-se em pele suna
Partculas + Protease Partculas em simultneo com a Protease

Partculas isoladamente

(aps 30 min)

Realizaram-se bipsias e avaliou-se a profundidade de penetrao das partculas atravs de microscopia de varrimento a laser

Introduo

At recentemente a via intercelular era a nica considerada relevante para substncias de aplicao tpica

Neste estudo ser demonstrado que os folculos pilosos representam uma via de penetrao eficiente
Estes so um alvo interessante para a entrega de frmaco uma vez que esto rodeados por uma densa rede de capilares, clulas dendrticas e clulas estaminais (importante
na Medicina Regenerativa e Imunomodelao)

Introduo
Folculos pilosos
reservatrio de longa durao para as substncias de aplicao tpica

impedem a perda de frmaco por lavagem, contacto com a roupa ou descamao

Partculas 500 nm penetram mais profundamente do que partculas com maiores ou menores dimenses

Introduo
Em condies in vivo, o movimento dos plos actua como uma bomba de engranagem, devido sua estrutura de superfcie em zigue-zague, conduzindo as partculas em profundidade nos folculos pilosos. Por outro lado no existe evidncia que as partculas so capazes de atravessar a barreira de pele intacta, com o objetivo de alcanar as clulas vivas por via intercelular ou transfolicular.
Utilizadas como sistema de transporte eficiente para a libertao de frmacos de aplicao tpica para o reservatrio dos folculos pilosos

Partculas

Introduo

Frmaco

Para que o frmaco atinja as clulas vivas necessrio que atravesse a barreira da pele. Com a utilizao das partculas na libertao do frmaco, consegue-se uma penetrao independente atravs da barreira da pele

Clulas

Introduo

A libertao contnua do frmaco atravs das partculas no plasusvel, pois esta j teria ocorrido durante o perodo de armazenamento, provocando a penetrao de frmaco independente das partculas Tambm quando a libertao de frmaco nos folculos pilosos por partculas ocorre por estmulos externos, como radiao laser e calor ou ultra-sons necessrio equipamento adicional, o que nem sempre praticvel

Introduo
No estudo atual penetrao das partculas biodegradveis com base num sistema de dois componentes

armazenados separadamente por um longo perodo de tempo

O tempo de degradao das partculas de 30 minutos, ento estas tm tempo suficiente para penetrarem em profundidade no folculo piloso com estrutura intacta.

Introduo

Apenas quando as partculas atingem o local alvo so degradas e libertam o frmaco

Assim foi estudado: Processo de degradao das partculas; Libertao do frmaco;

Influncia do tamanho destas na profundidade de pentrao pelo folculo piloso.

Materiais e mtodos
Preparao da partcula
1. Partculas compostas por Albumina Srica Bovina (ASB)
2. 3. 4. 5. Ligao cruzada de mleculas de ASB; Dissoluo do modelo de carbonato de clcio; O isotiocianato de fluorescena (FITC) foi incorporado nas molculas de ASB As partculas com frmaco incorporado foram submersas em soluo tampo fosfato salino (PBS)
As partculas obtidas de ASB/FITC apresentam uma morfologia esfrica uniforme com um dimetro mdio 500 30 nm
tamanho analisado por microscopia eletrnica

foram produzidas atravs da co-percipitao de molculas de ASB com carbonato de clcio;

Materiais e mtodos
A decomposio das particulas de ASB iniciou com a adio da soluo de protease Esta mistura foi colocada numa sala temperatura ambiente durante 30 minutos para que ocorra degradao completa das partculas de ASB A protease vai hidrolizar as ligaes peptidicas das molculas de ABS e quebrar as partculas em resduos de aminocidos

Materiais e mtodos
Modelo de pele
Modelo semelhante pele humana Pele de orelha de porco A sua exciso superior permitindo uma melhor penetrao folicular

O movimento do pelo foi simulado atravs de massagens aps a aplicao de partculas incorporadas com frmaco
As formulaes foram aplicadas orelha com rea marcada de 6 cm

Materiais e mtodos
Protocolo n 1 Protocolo n 2 Protocolo n 3
Partculas foram aplicadas sobre a pele [10 l/cm] Aplicou-se uma massagem durante 2 min 30 min aps foi realizada a biopsia

Partculas foram aplicadas na pele Aps um tempo de penetrao de 30 min, [5 l/cm] da soluo de protease foi aplicada na mesma rea da pele 30 min aps foi realizada a biopsia

Antes da aplicao na pele, as partculas foram misturadas com a soluo da protase durante 30 min. 30 min aps foi realizada a biopsia

Materiais e mtodos
Amostras de pele

Aplicao e penetrao

Biopsias por puno

Removidas pequenas pores de pele

Microscopia de varrimento a laser permitiu vizualizar a distribuio do corante nos folculos pilosos O sinal de fluorescncia foi detetado a 630 nm, a uma distncia significativa da autofluorescncia das amostras de tecido

Resultados

Imagem das particulas obtida por microscopia de varrimento a laser

Cintica do proceso de degradao das particulas aps contacto com a protease microscopia de tranmisso tica

Resultados
Penetrao Folicular

Penetrao das partculas sozinhas no folculos capilares protocolo 1

Penetrao das partculas e posterior administao da protease no folculos capilares protocolo 2

Resultados
Profundidade de penetrao do corante e das partculas nos folculos pilosos nos diferentes protocolos
Foram analisados 20 foliculos pilosos Profundidade mdia 886 101 m

P1 Aplicao de partculas sozinhas P2 Administrao de protease s particulas anteriormente aplicadas P3 Aplicao simultnea de protease e partculas

Resultados
Partculas foram aplicadas antes da administrao da protease (P2) fluorescncia detetada 841 159 m

Nas zonas mais profundas dos folculos pilosos a intensidade de fluorescncia foi comparada detetada quando as partculas foram aplicadas sozinhas (P1)
Nas zonas superiores verificou-se fluorescncia superior (280 80 m) uma intensidade de

No P3 foi detetado um sinal de fluorescncia intensa de 486 80 m Nas zonas mais profundas dos folculos pilosos no foi encontrado nenhum sinal de fluorescncia

Discusso
As partculas utilizadas neste estudo tinham uma dimenso mdia de 500 30 m Dimetro timo para a penetrao nos folculos pilosos.
O processo de penetrao folicular mais eficaz quando as partculos possuem o mesmo tamanho que a espessura da cutcula

A penetrao in vitro pode ser estimulada por um aparelho de massagem, o que indica que este um processo puramente mecnico

Discusso
Partculas Protease

hidrlise das ligaes da molcula, ento as partculas de ASB so degradadas e o frmaco modelo libertado

Aps o contacto de 30 min das partculas com a protease, estas foram completamente degradadas ou reduziram o seu tamanho para menos de 50%

Discusso
Segundo um estudo realizado anteriormente, considera-se que quanto < o dimetro das partculas < a profundidade de penetrao

A taxa de penetrao das partculas atravs do P1 foi de aproximadamente 900m No P2 foi observado um comportamento semelhante Estes resultados so semelhantes porque o tempo de espera para a aplicao da protease foi o suficiente para a penetrao das partculas

Discusso
Zona superior do folculo (P2) intensidade de fluorescncia maior provocado pela degradao das partculas - corante foi degradado

Este efeito foi apenas observvel nos 250m superiores do folculo piloso o que corresponde profundidade da protease

Discusso

No P3 verificou-se uma intensidade de fluorescncia de 500m As partculas foram parcialmente degradadas antes da aplicao na pele reduo significativa do seu dimetro mdio

Penetrao:
Menos profunda em comparao com as partculas originais (P1); Mais profunda que a fluorescncia causada pela penetrao da protease (P2).

Discusso
Se o tamanho for reduzido significativamente a penetrao tambm diminui. A menor profundidade de penetrao detetada foi a da protease (P2), no aplicada sobre a forma de partculas. Partculas biodegradveis facilitam o processo de libertao de frmaco. O corante fluorescente investigado neste estudo foi libertado prximo dos locais alvo nos folculos pilosos. O transporte deste mais eficiente quando as partculas foram utilizadas como sistema transportador.

Discusso

Estes resultados permitem verificar que esta uma ferramenta promissora na libertao de frmacos, como por exemplo para o tratamento do acne e da vacinao tpica

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Drug delivery into the skin by degradable particles

A libertao de frmaco na pele por partculas biodegradveis
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