Marcadores de clulas tumorales circulantes en sangre perifrica de pacientes con melanoma correlacin con recurrencia de la enfermedad y la progresin

Reid AL, Millward R, Pearce M, et al

Sabelys Morales Celedn Residente 2do ao Dermatologa y sifilografa Instituto Biomedicina

Introduccin
Melanoma cutneo: tumor originado en melanocitos normales de la piel Incidencia mundial aumento. USA 70230 nuevos casos/anuales Alto potencial metastsico. Difcil tratamiento Mtodos de diagnstico etapas tempranas

 Clasificacin: caractersticas histolgicas, metstasis ganglios o sistmicas (AJCC) Melanomas delgados y localizados: extirpacin quirrgica Pacientes 5% lesin < 1 mm espesor 25-40% lesin 2-4 mm espesor 50-75% lesin > 4 mm espesor Enfermedad metastsico y muerte 10 aos Recada a pesar de tener 10 aos libre de enfermedad

Paciente posterior a reseccin quirrgica Melanoma etapas tempranas

Dx clnico: libre de enfermedad

Dx incorrecto ( puede ser) Clulas tumorales en torrente sanguneo o permanecer latente Metstasis a distancia

 Estudios Ca mama, colon-rectal y prstata: presencia de clulas y relacin progresin de la enfermedad. Melanoma: uso controvertido, no esta claro su valor pronostico, marcadores apropiados no estn bien definidos.

 Mltiples marcadores: naturaleza heterognea de las clulas de melanoma 1. MLANA: melanocitos. Progresin nevus a melanoma 2. ABCB5: marcador de clulas madre (quimioresistentes) 3. MCAM: marcador de progresin de melanoma 4. PAX3: desarrollo del melanocito, isoforma PAX3d alta en melanoma 5. TGFB2: moduladores de proliferacin, migracin, apoptosis, adhesin y angiognesis. comportamiento agresivo

 Objetivo: Investigar si el fenotipo de las clulas circulantes de melanoma representa un indicador til de la etapa de la enfermedad, la recidiva y la eficacia del tratamiento.
Multimarcador cuantitativo de reaccin en cadena de polimerasa en tiempo real (qRT-PCR)

Materiales y mtodos:
Pacientes: 230 y 152 control. Firma consentimiento informado

Departamento de oncologa hospital Sir Charles Gairdner y clnica del melanoma Hospital Perth (Australia)
Perodo: 3 aos y 9 meses

Anlisis qRT-PCR, para expresin de 5 marcadores: MLANA, ABCB5, TGF2, PAX3d, MCAM

 MCP: 154 pacientes y MM: 76 pacientes Muestreo: 1 sola vez con la historia clnica y 140 pacientes muestreados en serie. Se cultivaron clulas de melanoma humano. A2058 en medio Dulbeccos Puncin venosa 2.5 ml en tubo PAXgene Blood RNA con estabilizadores RNA

 El ARN fue aislado PAXgene Blood RNA Kit y tratadas con DNasa Se cuantifico ARN. Muestra con insuficiente ARN excluidos (< 8 ) ARN total cDNA Incubacin: 37C * 1 h y 95C * 1 min qRT-PCR: # trascripciones ARNm para los genes

 Cada ensayo incluyo curva estndar, control negativo (transcripcin inversa), control positivo ( lnea celular A2058)

Resultados
Anlisis de multimarcadores qRT-PCR para estimar el fenotipo y la cantidad de clulas que circulan en la sangre del paciente. Positividad para marcadores y el nivel de expresin, para la correlacin con la presencia de la enfermedad, el estadio, la recurrencia y el resultado del tratamiento.

Resultados: Expresin de marcadores en sangre: Pacientes melanoma > propensos presentar 1 marcador en sangre Sanos: 0 1 marcador Pacientes: 2 o mas

Expresin del marcador con relacin etapa clnica: MLANA y ABCB5: etapas III y IV

Correlacin con la recurrencia de enfermedad Valor pronostico del marcador: relacin expresin del marcador y recurrencia de enf. Recidiva: 73 pacientes MLANA-ABCB5 Paciente recidiva expresaban 5 marcadores La co-expresin de MLANA y ABCB5 produjo un valor predictivo positivo del 56% y un valor predictivo negativo del 72%.

Presencia de marcadores con respecto al tiempo desde el diagnstico, recurrencia los marcadores estn presentes en sangre en todas las etapas, incluyendo muchos aos despus del diagnstico o la extirpacin quirrgica del tumor primario, (sin clnicos de la enfermedad)

Marcador con respecto a tratamiento clnico:

Tratamiento no Qx: 34 pacientes: 3 pacientes: Paciente 1: melanoma III, radioterapia 2 meses antes de tto: ABCB5 y 17 meses despus: MCAM, MLANA y ABCB5 Paciente 2: ablacin con radiofrecuencia metstasis a pulmn 3 meses antes: ningn marcador y 3 meses despus: MLANA, ABCB5 y PAX3d. Fallece 3 meses Paciente 3: ganglios (+). Interfern 1 da antes: ningn marcador , 6 y 12 meses: TGFB2 y por 26 meses TGF2, MCAM y ABCB5

Discusin: El uso de un multimarcador qRT-PCR de clulas circulantes de melanoma mostr correlacin con Dx de melanoma. Solo el 8% de los pacientes con melanoma no mostr marcadores. Varios marcadores: todos los estadios. tempranas incidencia < que avanzados

TGF2 mas comn en los controles. No uso marcador nico ABCB5 alta informacin melanoma. Fenotipo de clulas madre de melanoma Estudio: factor predictor de progresin y recurrencia de la enfermedad Pacientes libres de enfermedad (permanecer en sangre) Trasplante de ratn- ratn, desarrolla enfermedad metastsico

MLANA mostr predictor potencial de eventos de recurrencia, mas frecuente estadios avanzados

Se detectaron clulas tumorales circulantes en todos los estadios de la enfermedad, incluso clnicamente sano

MCAM: fue el mas adecuado para monitoreo de tratamiento, indica erradicacin ineficaz de clulas tumorales.

Conclusin: Las clulas tumorales circulantes son detectables en todos los estadios de la enfermedad La deteccin de ABCB5, MLANA y MCAM puede ser de valor pronstico. Prueba de multimarcador qRT-PCR en sangre proporciona un mtodo adecuado desde el que desarrollar una prueba fiable para la supervisin del estado de enfermedad.