MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

Qumica industrial

Introduccion El principal objetivo de un proceso fermentativo es el de obtener productos metablicos tiles a partir de materiales biolgicos (sustratos).

El proceso fermentativo comprende dos principales fases distintas: la fermentacin y la recuperacin de los productos.

Introduccion Para el cultivo de microorganismos en condiciones ptimas, as como para la produccin, por parte de los microorganismos, de los metabolitos o las enzimas deseadas, deben ser desarrollados procedimientos de fermentacin.

Introduccion

Pero tambien el desarrollo de cepas mediante manipulacin gentica y/o la regulacin del metabolismo mediante la optimizacin del medio de cultivo as como el control adecuado de los factores fsico-qumicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales (02, Temperatura, pH, etc).

Introduccion

La recuperacin del producto o "procesamiento posterior" (del ingls downstream processing) conlleva la extraccin y purificacin de los productos biolgicos.
La recuperacin en los procesos bioqumicos difiere de la recuperacin qumica, principalmente, en que los materiales biolgicos son frecuentemente mucho ms lbiles.

Introduccion
Por lo tanto, la produccin de productos metablicos tiles a partir de microorganismos con lleva una ntima relacin entre la ciencia y la tecnologa.

Por un lado se deben desarrollar los microorganismos de inters industrial y por otro se debe asegurar que estos microorganismos puedan crecer en gran cantidad bajo aquellas condiciones que originen el mejor rendimiento posible del producto.

Fermentacion
La Fermentacin es un proceso catablico de oxidacin incompleto, totalmente anaerbico, siendo el producto final un compuesto orgnico.

Estos productos finales son los que caracterizan los diversos tipos de fermentaciones.
Fue descubierta por Pasteur, que la describi como la vie sans lair (la vida sin el aire).

Fermentacion
El proceso de fermentacin es anaerbico ya que se produce en ausencia de oxgeno. Esto significa que el aceptor final de los electrones del NADH producido en la glucolisis no es el oxgeno, sino un compuesto orgnico que se reducir para poder reoxidar el NADH a NAD+. El compuesto orgnico que se reduce (acetaldehdo, piruvato etc) es un derivado del sustrato que se ha oxidado anteriormente.

Fermentacion Sin embargo, en la industria la fermentacin puede ser oxidativa, es decir, en presencia de oxgeno, pero es una oxidacin aerbica incompleta, como la produccin de cido actico a partir de etanol. Las fermentaciones pueden ser:

Naturales, cuando las condiciones ambientales permiten la interaccin de los microorganismos y los sustratos orgnicos susceptibles.
Artificiales, cuando el hombre propicia condiciones y el contacto referido.

Productos, reacciones y grupos microbianos responsables de los procesos fermentativos mas importantes
Lactico + etanol + CO2 Biomasa + CO2

Lactobacilos. Streptococcus Leuconostoc

O2

Hongos comerciales Levaduras Zimomonas

Clostridium butiricum

Clostridium propionicum y Propioniobacterium

Enterobacterias
Los grupos que mas interesan desde el punto de vista alimentario son: enterobacterias y clostridium (Sanitario) y bacterias lacticas , propionibacterias y levaduras (Productivo)

De acuerdo con Steinkraus (1995), la fermentacin de los alimentos sirve a 5 propsitos generales: Enriquecimiento de la dieta a travs del desarrollo de una diversidad de sabores, aromas y texturas en los substratos de los alimentos. Preservacin de cantidades substanciales de alimentos a travs de cido lctico, etanol, cido actico y fermentaciones alcalinas. Enriquecimiento de substratos alimenticios con protena, aminocidos, cidos grasos esenciales y vitaminas. Detoxificacin durante el proceso de fermentacin alimenticia. Disminucin de los tiempos de cocinado y de los requerimientos de combustible.

Fermentacion En lneas generales, un proceso tpico de fermentacin comienza con la formulacin y esterilizacin del medio de cultivo as como la esterilizacin del equipamiento. Las clulas se hacen crecer primero en un cultivo de mantenimiento (5 a 10 mL), posteriormente en un matraz (200 a 1.000 mL) y de ah en un prefermentador (10 a 100 L) para finalmente inocular el fermentador de produccin (1.000 a 100.000 L).

Fermentacion

Una vez que la fermentacin se ha completado, las clulas se separan del cultivo lquido. Si el producto es intracelular, se rompen las clulas, se eliminan los restos celulares y se recupera el producto del fluido libre de restos celulares.
Si el producto es extracelular, se purifica a partir del sobrenadante libre de clulas.

Biorreactor
Un biorreactor es la parte principal de cualquier proceso fermentativo en el cual se emplean sistemas microbianos para la manufactura economica de una amplia variedad de productos biologicos utiles.

Biorreactor La funcion principal de un biorreactor diseado apropiadamente es la de proveer un medio controlado para alcanzar el crecimiento optimo y la formacion de productos finales optimos o cualquiera de ambos, en el sistema celular particular empleado.

Se encuentran dos tipos de biorreactores de uso muy difundido: Tanque agitado Air lift".

Tanque agitado En el tanque agitado, la agitacin se realiza mecnicamente mediante un eje provisto de turbinas accionado por un motor. El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es distribuido por una corona que posee pequeos orificios espaciados regularmente.

Tanque agitado El chorro de aire que sale de cada orificio es "golpeado" por las paletas de la turbina inferior generndose de este modo miles de pequeas burbujas de aire, desde las cuales difunde el 02 hacia el seno del lquido. El sistema de agitacin se completa con cuatro o seis deflectores que tienen por finalidad cortar o romper el movimiento circular que imprimen las turbinas al lquido, generando de este modo mayor turbulencia y mejor mezclado.

Tanque agitado

El tanque est rodeado por una camisa por la que circula agua, lo que permite controlar la temperatura.

Biorreactor Air Lift En los reactores de tipo "air lift, el mismo aire inyectado promueve la agitacin. Bsicamente consiste en dos cilindros concntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una circulacin de lquido ascendente en el compartimento interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado.

Funcionamiento de biorreactores

El estudio detallado de un fermentador cae fuera del objetivo de la microbiologia industrial ya que se concentra en los principios biolgicos de la biotecnologa.
Sin embargo, como la tecnologa de los procesos fermentativos es una amalgama de tcnicas biolgicas e ingeniera qumica, se hace necesario conocer los tipos de fermentadores disponibles sus principales caractersticas.

Los siguientes puntos son los considerados como los criterios ms importantes para el funcionamiento de un biorreactor:
1.- El tanque debe disearse para que funcione aspticamente durante numerosos das, as como para las operaciones de ms larga duracin. 2.- Se debe proporcionar un sistema adecuado de aireacin y agitacin para cubrir las necesidades metablicas de los microorganismos.
3.- El consumo de energa debe ser tan bajo como sea posible.

4.- Debe tener un sistema para el control del pH.

5.- El fermentador debe tener un sistema para la toma de muestras.

6.- Debe existir un sistema para el control de la temperatura.

7.- Las prdidas por evaporacin no deben ser excesivas. 8.- El diseo del tanque debe ser tal que las operaciones laborales durante el funcionamiento, recoleccin, limpieza y mantenimiento sean mnimas. 9.- El tanque debe ser verstil para la aplicacin de diversas modalidades de procesos.

10.- Las superficies internas del tanque deben ser lisas, utilizando, donde sea posible, soldaduras. 11.- La geometra del fermentador debe ser similar a otros tanques ms pequeos o mayores de la planta o a los de la planta piloto para poder reproducir procesos a diferentes escalas. 12.- Deben emplearse los materiales ms baratos que proporcionen resultados satisfactorios. 13.- Debe existir un servicio adecuado de repuestos para el fermentador.

Funcionamiento
El mantenimiento de un ambiente asptico y unas condiciones aerbicas son, probablemente, los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar.

Los fermentadores ms ampliamente utilizados a nivel industrial estn provistos de mecanismos de agitacin, dispersin y aireacin as como de sistemas para el control de la temperatura, pH y formacin de espuma.

Las "tareas" que realiza el biorreactor pueden resumirse del siguiente modo:
Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo a fin de prevenir la sedimentacin o la flotacin. Mantener constante y homognea la temperatura.

Minimizar los gradientes de concentracin de nutrientes.

Suministrar oxgeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.

El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que todo el sistema ha sido esterilizado y posteriormente sembrado con el microorganismo deseado.

Factores fisico-quimicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales

1.- Oxgeno 2.- Temperatura 3.- pH

Oxgeno Uno de los factores ms crticos en la operacin de fermentacin a gran escala es el suministro de un intercambio de gases adecuado.

El oxgeno es el sustrato gaseoso ms importante para el metabolismo microbiano y el anhdrido carbnico es el producto metablico ms importante.

Oxigeno
El oxgeno no es un gas muy soluble ya que una solucin saturada de oxgeno contiene aproximadamente 9 mg/L de este gas en agua. Debido a la influencia de los ingredientes del cultivo, el contenido mximo de oxgeno realmente es ms bajo de lo que debera ser en agua pura. Por lo tanto, el suministro se logra pulverizando aire en el fermentador durante el proceso.

Oxigeno Una vez disuelto el O2 ste tiene que transferirse desde la burbuja de gas a cada clula individual. Para ello deben ser superadas varias resistencias parcialmente independientes: a.- La resistencia dentro de la pelcula de gas a la interfase. b.- La penetracin de la interfase entre la burbuja de gas y el lquido.

c.- Transferencia desde la interfase al lquido.

d.- Movimientos dentro de la solucin de nutrientes.

e.- Transferencia a la superficie de la clula.

Oxigeno
La ley de Henry describe la solubilidad del oxgeno en soluciones de nutrientes en relacin a la presin parcial del oxgeno en la fase gaseosa:

P0 C= H
Donde: C = concentracin de O2 de la solucin de nutrientes a cierta saturacin P0 = presin parcial del gas en la fase gaseosa H = constante de Henry que es especfica para cada tipo de gas.

Temperatura La temperatura es otro de los parmetros esenciales para el xito de una fermentacin. Los microorganismos que crecen a una temperatura inferior a la ptima tienen retardado su crecimiento y por lo tanto reducida la produccin celular, es decir su productividad.

Temperatura
Por otro lado, si la temperatura es demasiado alta, pero no letal, se puede inducir una respuesta de estrs al choque trmico con la consiguiente produccin de proteasas celulares que ocasionan una disminucin en el rendimiento de los productos proteicos. A fin de obtener rendimientos ptimos, las fermentaciones deben ser llevadas a cabo en un margen estrecho de temperatura y a ser posible constante.

Temperatura
La velocidad de produccin de calor debida a la agitacin y a la actividad metablica de los microorganismos no se ve compensada por las prdidas de calor que resultan de la evaporacin, por lo que se debe recurrir a sistemas de refrigeracin. Dentro de stos, los ms utilizados en las fermentaciones industriales son las camisas de agua.

Temperatura
La relacin temperatura-velocidad de crecimiento esta dada por la ecuacin de Arrhenius: = Ae Ea/RT

Donde = velocidad de crecimiento A = constante de Arrhenius Ea = energa de Activacin (kcal/mol) R = constante de los gases T = Temperatura absoluta

pH
La mayor parte de los microorganismos crecen ptimamente entre pH 5,5 y 8,5. Pero durante el crecimiento en un fermentador, los metabolitos celulares son liberados al medio, lo que puede originar un cambio del pH del medio de cultivo. Por lo tanto se debe controlar el pH del medio de cultivo y aadir un cido o una base cuando se necesite para mantener constante el pH.

pH
Esta adicin del cido o base debe ser mezclada rpidamente de tal manera que el pH del medio de cultivo sea el mismo en todo el fermentador.

Agitacion

La agitacin es la operacin que crea o que acelera el contacto entre dos o varias fases. Una fermentacin microbiana puede ser considerada como un sistema de tres fases, que implica reacciones lquido-slido, gas-slido y gas-lquido.

1 La fase lquida contiene sales disueltas, sustratos y metabolitos. Puede existir, en algunos casos, una segunda fase lquida si existe un sustrato inmiscible en agua como por ejemplo los alcanos. 2 La fase slida consiste en clulas individuales, bolitas de micelio, sustratos insolubles o productos del metabolismo que precipitan. 3 La fase gaseosa proporciona un reservorio para el suministro de oxgeno, para la eliminacin del CO2 o para el ajuste del pH con amonio gaseoso.

Agitacion

Una adecuada agitacin de un cultivo microbiano es esencial para la fermentacin ya que produce los siguientes efectos en las tres fases:
1 Incrementar la velocidad de transferencia de oxgeno desde las burbujas de aire al medio lquido; los microorganismos no pueden utilizar oxgeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en disolucin.

2 Aumentar la velocidad de transferencia de oxgeno y nutrientes desde el medio a las clulas. Debido al movimiento se evita que las clulas creen reas estancadas con bajos niveles de oxgeno y nutrientes. 3 Impedir celulares. la formacin de agregados

4 Aumentar la velocidad de transferencia de productos metablicos de las clulas al medio. 5 Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de refrigeracin del fermentador.

Tipos de fermentacion
En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor puede ser de tres modos distintos:

Lote (Batch) o discontinua

Lote alimentado (Fed-Batch) Continuo o quimiostato

Fermentacin discontinua
Una fermentacin por lotes (Batch) o discontinua puede ser considerada como un "sistema cerrado".

Al inicio de la operacin se aade la solucin esterilizada de nutrientes y se inocula con el microorganismo, permitiendo que se lleve a cabo la incubacin en condiciones ptimas de fermentacin.

Fermentacion discontinua

A lo largo de toda la fermentacin no se aade nada, excepto oxgeno (en forma de aire), un agente antiespumante y cidos o bases para controlar el pH.
La composicin del medio de cultivo, la concentracin de la biomasa y la concentracin de metabolitos cambia generalmente como resultado del metabolismo de las clulas observndose las cuatro fases tpicas de crecimiento: fase de latencia, fase logartmica, fase estacionaria y fase de muerte.

Fermentacion discontinua Cuando se ha alcanzado el nivel deseado de reaccin, se vaca el reactor, se limpia y el proceso se repite.

En los procesos comerciales la fermentacin frecuentemente se interrumpe al final de la fase logartmica (metabolitos primarios) o antes de que comience la fase de muerte (metabolitos secundarios).

Desventajas

- Dificultad de controlar la velocidad de crecimiento, excepto variando la composicin del medio o las condiciones de proceso. - Altas concentraciones de nutrientes pueden inhibir el crecimiento debido al aumento de la presin osmtica del medio o toxicidad de nutrientes.
- Alta demanda de oxgeno puede generar una limitacin debido a una insuficiente capacidad del reactor para transferir O2 al medio. - Inconvenientes para remover calor. - Tiempos muertos productividad. entre procesos disminuye la

Fermentacion discontinua alimentada

Una mejora del proceso cerrado discontinuo es la fermentacin alimentada. En los procesos alimentados, los sustratos se aaden escalonadamente a medida que progresa la fermentacin. La formacin de muchos metabolitos secundarios est sometida a represin catablica (efecto glucosa).

Fermentacion discontinua alimentada

Por esta razn en el mtodo alimentado los elementos crticos de la solucin de nutrientes se aaden en pequeas concentraciones al principio de la fermentacin y continuan aadindose a pequeas dosis durante la fase de produccin.

F(t) SR(t)

Vf, Xf VR = Vf - V0 V0, X0, S0

RESERVORIO

BOMBA BIORREACTOR

Fermentacion discontinua alimentada

El batch alimentado es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular y/o la formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante, es decir cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del metabolito buscado se ven afectados.
As, este mtodo se emplea cuando se quieren evitar fenmenos de inhibicin por sustrato y se requiere alcanzar una alta concentracin de biomasa.

Ventajas
- Limitar la demanda de O2 del cultivo. - Obtener altas concentraciones de sustrato evitando el efecto osmtico y txico de nutrientes.

- Incrementar la tasa de produccion (metabolitos secundarios, protenas recombinantes) para maximizar el coeficiente de rendimiento.
- Maximizar el crecimiento Crabtree en levaduras). celular (efecto

Fermentacin continua En la fermentacin continua se establece un sistema abierto. La solucin nutritiva estril se aade continuamente al biorreactor y una cantidad equivalente de solucin utilizada de los nutrientes, con los microorganismos, se saca simultneamente del sistema.

Fermentacin continua En algunos sistemas continuos el medio nutriente es inoculado con el cultivo microbiano al entrar al reactor y los organismos llevan a cabo su actividad a medida que el lquido fluye a travs del sistema y salen del sistema junto con el medio.

Fermentacin continua

Los organismos pueden separarse de la corriente que lleva al producto y reciclarse para inocular el lquido de alimentacin.
En un sistema continuo con mezcla completa, las condiciones son uniformes en todo el reactor, en un equilibrio de mezcla de nutrientes, organismos y productos.

Ventajas
- Opera por periodos largos; tiempos muertos bajos. - Costos de operacin y trabajo bajos. - El cultivo se mantiene con coeficientes de crecimiento constantes. - Crecimiento balanceado, composicin celular constante. -Generacin de biomasa productividad y conversin. constante como

- Volumen de reactor reducido en comparacin a la productividad similar en proceso por lotes.

Desventajas
- Alto costo por alta calidad de equipos y accesorios. - Requiere gran reservorio para almacenamiento de medio o suministro continuado de sustrato. - Esterilizacin continuada, separacin continuada de producto y niveles de purificacin. - Biosensores sofisticados y automatizacin computarizada para operacin ptima.

Desventajas - Se incrementa el riesgo de contaminacin debido a la amplia operacin. - Posibilidad de mutacin, incremento de fagos por los cambios genticos debido a la presencia de plasmidios e incremento de estos. - La conversin total de sustrato exige sistema de multiniveles, inmovilizacin celular o recirculacin celular que encarece el costo de operacin.

METABOLITOS

EMPLEO DE MICROORGANISMOS COMO UNIDADES DE

PRODUCCIN, DE CONTROL O DE DIAGNOSTICO

VENTAJAS DE LOS MICROORGANISMOS COMO UNIDADES DE PRODUCCIN Rapido crecimiento debido a la favorable relacin rea/ volumen Diversidad metablica Estabilidad genetica Crecimiento en gran escala y separacion facil de productos y sustratos * Adaptabilidad a distintos ambientes y condiciones de crecimiento (sustratos slidos, lquidos, frascos, fermentadores) Incrementar la productividad * Facilidad de manipulacin gentica Modificar los productos finales * Habilidad para sintetizar enantimeros especficos. * Tecnologias limpias

Los microorganismos pueden emplearse como :

Productores de metabolitos primarios y secundarios

Productores de biomasa y sus constituyentes (Protenas y

aminoacidos, Vitaminas, Acidos Nucleicos, Polmeros de H de C y esteres, Biomasa)

Huespedes para la expresion de genes homologos y heterologos Unidades de Biotransformacion

METABOLITOS PRIMARIOS
1Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: proteinas, acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y poliesteres (PHB y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles (ergosterol)

2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa), cidos organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico, propionico, succinico, fumarico), alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y guanilico), polisacaridos y poliesteres de reserva.

Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.

Etanol
Producido por : 1- Levaduras * Saccharomyces (a partir de hexosas) * Kluyveromyces fragilis (a partir de lactosa) * Cndida o Pichia (a partir de pentosas)

2- Bacterias* Clostridium (a partir de celulosa) (termfilos, anaerobios) * Zymomonas

3- RecombinantesE.coli recombinante: Introduccin de los genes Alcohol deshidrogenasa y piruvato decarboxilasa de Zymomonas.

Pir

acetaldehido

etanol

Aminocidos
Principales productores: Bacterias de los gneros Corynebacterium y Brevibacterium * Mutantes auxotrofas y regulatorias * Mutantes alteradas en la secrecion * Cepas recombinantes Principales productos: Acido glutmico 600,000
ao U$S 915 milliones Lisina U$S 500 milliones Fenilalanina U$S 200 millones Aspartato U$S 43 milliones

Toneladas/

Vitaminas
Vitamina B12Microorganismos productores: Bacterias de los generos Propionibacterium shermani y Pseudomonas denitrificans. Produccin: 150 mg/ L. BiotinaMicroorganismo productor: cepas modificadas (mutantes) de Serratia marcescens.Produccin: 150-600 mg/ L. Vitamina B2 (Riboflavina)Microorganismos productores: -hongos (Eremothecium ashby y Ashbya gossypii) Candida sp Bacillus subtilis recombinante Produccin: 20 -30 g/ L

PRODUCCION DE METABOLITOS SECUNDARIOS

Los metabolitos secundarios funcionan en los organismos que los producen como: Reguladores del crecimiento Ionoforos Defensa frente a otros microorganismos (antibiticos, toxinas, pesticidas) Agentes de simbiosis Efectores de diferenciacin Respuesta a Stress

ANTIBIOTICOS
Desde 1940 se han introducido una gran variedad de molculas con actividad antibitico para su uso en medicina y agricultura. En el mercado hay 160 antibiticos en uso por un valor de 23,000 millones de U$S. Se han descripto 6,000 antibiticos de los cuales 4,000 se han aislado de Actinomycetes, y se describen alrededor de 500 antibiticos nuevos por ao. Una sola cepa de Streptomyces hygroscopicus produce aproximadamente 200 antibiticos. Muchos nuevos antibioticos se obtienen por semi-sintesis, es decir, por modificacion de antibioticos existentes

INHIBIDORES ENZIMATICOS Ej. Estatinas y acido zaragozico Inhibidores competitivos de la HMGCo A reductasa y escualeno ciclasa, por lo cual se emplean como anti- colesterolemicos. Microorganismo productor: Aspergillus terreus (hongos) Ej. Acido clavulanico (inhibe penicilasas) Ej. Acarbosa: Inhibidor de la glucosidasa intestinal. Disminuye la hiperglucemia y tambin la sntesis de triglicrido en los tejidos adiposos, el hgado y las paredes intestinales de individuos obesos, diabticos o con trastornos de la lipemia. Microorganismo productor: Actinoplanes (actinomycetes)

BIOPESTICIDAS Se aislaron en un principio como agentes antibiticos y luego, en las sucesivas investigaciones, surgieron nuevos usos o usos mas especficos. Fungicidas: kasugamycin, polyoxins, anfotericina Insecticidas: toxina de Bacillus thuringiensis Herbicidas: bialaphos antihelminticos: avermectinas Reguladores del crecimiento de plantas: giberellinas Inmunosupresores: ciclosporinas Agentes antitumorales: mitomycin, bleomycin Antivirales: inhibidores de la transcriptasa reversa y de la proteasa de HIV (ritonavir, nevirapine, etc)

EMPLEO DE LOS MICROORGANISMOS COMO VECTORES DE GENES HETEROLOGOS Los principales huespedes que se emplean para la produccion de proteinas recombinantes son E. coli, B. subtilis, S. cerevisiae, Pichia pastoris, Hansenula polimorpha y Aspergillus niger. Quimosina recombinante (Clonado del gen de la quimosina bovina en una levadura). Se emplea para la coagulacion de la caseina, en la obtencion de quesos.

Insulina humana (en E.coli) Hormona de crecimiento humana (en E.coli y levaduras) Vacuna Hepatitis (en levaduras ) Farmacos (interferon 2 alfa)
EMPLEO DE PLANTAS TRANSGENICAS CON GENES BACTERIANOS CLONADOS (bt)

MAIZ Y ALGODON BT

Uso de Microorganismos en biotransformaciones

Reacciones Quimicas realizadas por microorganismos: Oxidaciones

* Hidroxilacion : introduccion de grupos HO con regio y estereo especificidad. Ej obtencion de esteroides Produccion de 11OH derivados y eliminacion de cadena lateral (cortisol, prednisolona, testosterona, etc) * Epoxidaciones * Desaturaciones * Rupturas oxidativa de anillos

Reducciones

Reacciones hidroliticas
Condensaciones

Overexpression in E.coli

PRINCIPALES ETAPAS DE UN PROCESO DE PRODUCCION Bsqueda y (Screening) seleccin de microorganismos

Organismos mesofilos Organismos extremofilos SI BIEN LOS MICROORGANISMOS SON BUENOS PORDUCTORES DE UNA GRAN VARIEDAD DE COMPUESTOS, LOS PRODUCEN EN BAJA CANTIDAD, POR LO QUE SE REQUIERE :

Aumentar los rendimientos mediante:

Obtencin de mutantes (tecnicas de mutagnesis, recombinacin gentica, fusin de protoplastos) Empleo de tecnologa de DNA recombinante (para aumento del dosaje gentico de enzimas claves, utilizacin de nuevos sustratos, etc). Diseo y seleccin de medios de cultivo que maximicen la produccion, disminuyan los costos o faciliten la recuperacion de productos. Diseo y seleccin de las condiciones y sistemas de cultivo mas convenientes

PRINCIPALES PRODUCTOS
PRODUCTO ORGANISMO PRODUCCION (Ton/ao) 20 millones 2000 500,000 50,000

Solventes Etanol Acetona/butanol

Biomasa Starters para alimentos Proteina unicelular Acidos organicos Acido citrico Acido gluconico Acido lactico Aminoacidos Acido glutamico Lisina Fenilalanina arginina

Saccharomyces cerevisiae Clostridium acetobutylicum Levaduras y bacterias lacticas Candida utilis

Aspergillus niger Aspergillus niger Lactobacillus delbrueckii

250,000 50,000 50,000

Corynebacterium glutamicum Brevibacterium flavum Corynebacterium glutamicum Brevibacterium flavum

300,000 30,000 2000 1000

PRODUCTO Enzimas Proteasas Alfa-Amilasas Glucoa-amilasa Glucosa isomerasa Pectinasa Renina otras Vitaminas B12 Riboflavina Vacunas Difteria Tetanos Pertussis Polio Rubola Hepatitis B

ORGANISMO

PRODUCCION (Ton/ao) 600 500 500 500 100 50 50 10

Bacillus spp Bacillus amyloliquefasciens Aspergillus niger Bacillus coagulans Aspergillus niger Mucor o levaduras recombinantes

Propionibacterium shermanii Eremothecium ashbyii

Corynebacterium diphteriae Clostridium tetani Bordetella pertussis Virus atenuado crecido en rion de mono o celulas diploides humanas Idem anterior Antigenos de superficie expresados en levadura Claviceps paspali

< 0.1

Alcaloides del ergot

PRODUCTO Pigmentos Shikoninas Beta-carotenos Proteinas de uso teraputico Insulina Hormona de crecimiento Eritropoyetina FactorVIII-C Activador del plasminogeno Interferon alfa2

ORGANISMO

PRODUCCION (Ton/ao) < 0.1

Lithospermum (plantas) Levaduras E. coli recombinante E. coli recombinante o celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante E. coli recombinante

< 0.1

Antibioticos Penicilinas Cefalosporinas Tetraciclinas Macrolidos (eritromicina) Polipeptidicos (gramicidina) Aminoglicosidos (estreptomicina) Aromticos (griseofulvina) Insecticidas Esporas bacterianas Anticuerpos monoclonales

Penicillum chrysogenum Cephalosporium acremonium Streptomyces aureofaciens Streptomyces erythreus Bacillus brevis Streptomyces griseus Penicillum griseofulvum

80,000 15,000 15,000 10,000 2,000 1,000

Bacillus thuringiensis Celulas de hibridoma

< 0.1 < 0..01