UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA CENTRO UNIVERSITARIO DE LA CIENEGA

Profesora: Dra. Karla Mujica Lpez. INTEGRANTES: *Alonso Gmez Mara Guadalupe. *Amezcua Vzquez Luz Mara. *Cruz Martnez Arcelia Guadalupe. *Olvera Vzquez Claudia Elizabeth. *Ramrez Robles Ftima C. *Santilln Neri Patricia Carolina.

ANTICUERPOS

ANTICUERPOS

Definicin:
Los anticuerpos son las protenas que unen antgeno, se encuentran en la membrana de las clulas B, y los secretan las clulas plasmticas.

Comparten caractersticas estructurales. Se unen a antgeno. Participan en un nmero limitado de funciones efectoras.

ESTRUCTURA

Cuatro cadenas pepitdicas.

Dos cadenas ligeras (cadena L de light). Peso molecular aproximado de 25,000. Idnticas y polipeptdicas.

Dos cadenas pesadas (cadena H de heavy). Peso molecular aproximado de 50,000. Idnticas y polipeptdicas.

Cadenas H y L.
Tambin

se llaman inmunoglobulinas. Unin por enlance disulfuro. Interacciones no covalentes. Heterodmeros.

Regiones V.
Segmentos Regin

de secuencia variable.

o H.

aminoterminal de una cadena L

Alrededor

de los 110 primeros AA.

Estos segmentos de secuencia muy variable se conocen como: Regiones V:VL (en cadenas ligeras). Regiones V:VH (en cadenas pesadas). Las regiones de secuencia relativamente constante ms all de las regiones variables se han designado como: Regiones C:CL en cadena pesada. Regiones C:CH en cadena ligera.

ESTRUCTURA BSICA DE LOS ANTICUERPOS

OBSTCULOS PARA LA SECUENCIACIN DEL

ANTICUERPO

Aunque

las propiedades estructurales y qumicas esenciales de diferentes anticuerpos son similares sus especificidades de unin de antgeno , y en consecuencia sus secuencias exactas de aminocidos, son muy distintas.

 Fue

posible analizar la secuenciacin con el descubrimiento del mieloma mltiple , un cncer de clulas plasmticas que producen anticuerpo.

 Normal: Especie Mueren.

molecular de anticuerpo nica.

Contraste: Proliferacin sin antgeno. Sntesis de protenas. Funciones secretoras. Anticuerpo homogneo. Protena mieloma.

ESTRUCTURA
FINA DE LA

INMUNOGLOBULINA

Organizacin primaria: Secuencia de aa. Determina regiones variable y constante. Secundaria: Hoja plegada Beta. Terciaria: dominios globulares unidos a dominios continuos. Cuaternaria: Interaccin de cadenas pesadas y ligeras.

Ambas cadenas poseen varios dominios:

Cadenas ligeras. Un dominio Variable (VL) y uno constante (CL). Cadenas pesadas. Un dominio variable (VH) y tres o cuatro constantes (CH1, CH2 , CH3 CH4)

La comparacin detallada de aa de dominios VL y VH revelan que la variacin de la secuencia se concentra en unas cuantas regiones discretas de esos dominios. Estas regiones se denominaron de manera inicial regiones hipervariables y forman el sitio de unin de antgeno.

Debido a que el sitio de unin del antgeno es complementario a la estructura del eptopo, stas reas se llaman en la actualidad regiones determinantes de la complementariedad (CDR). El resto de los dominios VL y VH muestra menos variacion y se conocen como regiones armazn (FR).

El anlisis de complejos antgeno y anticuerpo demostr que varias CDR pueden entrar en contacto con el antgeno. Al parecer establecen contacto con antgeno ms residuos en las CDR de la cadena pesada que las de la cadena ligera.

La unin de antgeno induce cambios de conformacin en el anticuerpo, el antgeno o ambos. Por lo tanto, adems de la variabilidad de la longitud y composicin de aa de las asas de la CDR, la capacidad de estas para cambiar de modo significativo su conformacin durante la unin de antigeno permite que los anticuerpos adopten una forma complementaria ms eficaz con la de sus epitopos.

DOMINIOS DE REGIN CONSTANTE

Sirven para extender los brazos del Ac para facilitar interaccin con Ag. Conservan juntos los dominios VL y VH debido al enlace disulfuro. Contibuyen a la diversidad de Ac.

Las 5 clases de Ac y sus subclases pueden expresarse como: Inmnoglobulina secretada (sIg). Tiene una secuencia de aa hidrfila en el extremo carboxilo terminal.

inmunoglobulina unida a membrana (mIg). El dominio carboxilo terminal tiene tres regiones: Una secuencia espaciadora hidrfila extracelular compuesta de 26 aa. Una secuencia transmembrabal hidrfoba. Una cola citoplasmtica corta.

La clula B inmadura slo expresa mIgM, ms adelante en la maduracin aparece mIgD y se coexpresa con IgM en la superficie de clulas B maduras antes que las active un antgeno. Una clula B de memoria puede expresar mIgM, mIgG, mIgA, o mIgE.

Los anticuerpos no slo deben reconocer antgeno, sino tambin activar respuestas (funciones efectoras) que tienen como resultado la eliminacin del antgeno y la muerte del patgeno.

Son consecuencia de interacciones entre regiones constantes de cadena pesada y otras protenas sricas o receptores de membrana celular.

No todas poseen las mismas propiedades funcionales.

El anticuerpo promueve opsonizacin. Promocin de fagocitosis de antgenos por macrfagos y neutrofilos, factor importante en las defensas antibacterianas.

La unin de receptores Fc del fagocito con molculas del anticuerpo produce una interaccin cuyo efecto es la unin del agente patgeno a la membrana del fagocito.

Crea una va de transduccin de seal que produce fagocitosis del complejo antgeno y anticuerpo. En el fagocito se destruyen los patgenos.

LOS ANTICUERPOS ACTIVAN COMPLEMENTO. Sistema de complemento: grupo de protenas capaces de perforar membranas celulares.

Para la inactivacin y eliminacin de antgenos y la destruccin de patgenos es importante la colaboracin entre el anticuerpo y el sistema de complemento.

Ejemplo: Los glbulos rojos y macrfagos tienen receptores para C3b que da lugar a fagocitosis.

Los glbulos rojos posibilita que el eritrocito lleve los complejos al hgado o al bazo donde los macrfagos lo eliminan sin destruir al glbulo rojo.

ALGUNOS ANTICUERPOS PUEDEN

CRUZAR CAPAS EPITELIALES POR TRANSCITOSIS.

Transcitosis: El transporte de anticuerpo a las superficies mucosas de las vas respiratorias, digestivas y urogenitales y el paso de leche materna requiere la filtracin de inmunoglobulinas a travs de capas epiteliales.

INMUNOGLOBULINA

Es la ms abundante en el suero (80%).

Formada por dos cadenas pesadas gamma y dos ligeras kappa. Las subclases se diferencian en la secuencia de la cadena gamma y por su concentracin srica.

INMUNOGLOBULINA

M
de

Representa 5 a 10% inmunoglobulina srica.

Se expresa como un anticuerpo unido a membrana en clulas B. Las clulas plasmticas secretan la IgM en forma de pentmero. Por su gran tamao IgM no se difunde bien y se encuentra en concentraciones muy bajas en los lquidos intercelulares de los tejidos.

Es la primera clase de inmunoglobulinas que se produce en una respuesta primaria a un antgeno y es la primera Ig que sintetiza el recin nacido.

Funcin: Inmunoglobulina secretoria.

INMUNOGLOBULINA

Constituye 10 a 15% de inmunoglobulinas sricas. Predomina en secreciones externas: leche materna, saliva, lgrimas y moco de las vas bronquiales, genitourinarias y digestivas.

La IgA secretoria tiene una funcin efectora relevante en las superficies mucosas, que son los principales sitios de entrada de la mayor parte de los microorganismos patgenos.

La leche materna contiene IgA secretoria que ayuda a proteger al recin nacido contra infecciones (primer mes).

INMUNOGLOBULINA

Su concentracin srica es en extremo baja pero tiene actividad biolgica potente. Los anticuerpos IgE median las reacciones de hipersensibilidad inmediata que causan los sintomas como fiebre de heno, asma, urticaria y choche anafilactico.

INMUNOGLOBULINA

Constituye alrededor del 0.2% de la inmunoglobulina total en suero.

Junto a IgM, IgD es la principal inmunoglobulina unida a membrana que expresan clulas B maduras y se investiga su funcin.

DETERMINANTES ANTIGNICOS EN INMUNOGLOBULINAS

Los anticuerpos pueden funcionar por si mismos como inmungenos potentes para inducir una reaccin de anticuerpo.

Los determinantes antignicos o eptopos en las molculas de inmunoglobulina corresponden a tres categoras principales:
Isotpico Alotpico Idiotpico

ISOTIPO

Determinantes de regin constante que en conjunto definen cada clase y subclase de cadena pesada y cada tipo y subtipo de cadena ligera dentro de una especie.

Un gen de regin constante separado codifica casa isotipo y todos los miembros de una especie llevan los mismos genes de regin constante.

Las diferentes especies heredan genes de regin constante distintos y por consiguiente expresan diferentes isotipos.

ALOTIPO

Existen mltiples alelos para algunos de los genes. Estos alelos codifican diferencias sutiles de aminocidos, llamadas determinantes alotpicos.

La suma de los determinantes alotpicos individuales que muestra una anticuerpo establece su alotipo.

En el humano

Alotipos para:
4 subclases de IgG 1 subclase de IgA Cadena ligera de kappa Por lo menos 25 diferentes alotipos Gm (cadena gamma)

Se designan: clase, subclase y numero de alelo

Ejemplo: G1m(1), G2m(23), G3m(11), G4m(4a)

IDIOTIPO

Los determinantes idiotpicos se forman a partir de la secuencia de las regiones variables de las cadenas pasada y ligera. Cada determinante antignico individual de la regin variable se conoce como idiotopo. la suma de los idiotopos individuales se llama idiotipo del anticuerpo.

RECEPTOR DE CLULA B

Michael Reth

mIg mide Seal de activacin despus del contacto con un antgeno.

Las

IgM e IgD de membrana tienen colas citoplasmticas cortas formadas por tres aminocidos (lisina, valina y lisina).

La

mIg no constituye el receptor de unin de antgeno completo en clulas B.

 El

receptor de clula B es un complejo protenico transmembranal compuesto de mIg y heterodmeros enlazados por disulfuros llamados Ig-alfa/Ig-beta.

*Ig- alfa tiene una cola citoplasmtica de 61 aminocidos. *Ig- beta tiene una cola citoplasmtica de 48 aminocidos.

LOS RECEPTORES FC SE ENLAZAN A REGIONES FC DE ANTICUERPOS

Receptores Fc (FcR)

Clulas que poseen glucoprotenas de membrana

Afinidad por las porciones Fc de las molculas de anticuerpo secretadas.

Paso de anticuerpos a travs de las membranas celulares y la transferencia de IgG de la madre al feto. Permiten la adquisicin pasiva de anticuerpos por muchos tipos de clulas. Proporcionan un medio por el cual los anticuerpos pueden incorporar elementos celulares fundamentales de la inmunidad innata.

Receptor poli-Ig Receptor Fc Neonatal (FcRn) Fc aR Fc eR FcyR

SUPERFAMILIA DE LAS INMONUGLOBULINAS

Grupo de protenas solubles y de superficie celular que estn implicadas en procesos de reconocimiento, unin o adhesin celular de las clulas. La asignacin de una molcula a esta superfamilia se basa en que comparten rasgos estructurales con las inmunoglobulinas. Todas ellas poseen un dominio conocido como dominio o plegamiento inmunoglobulina.

Los dominios Ig reciben su nombre de las molculas de inmunoglobulina. Constan de entre 70-110 aminocidos y se clasifican en diferentes tipos de acuerdo a su tamao y funcin.

PROTENAS REPRESENTATIVAS DE LA SUPERFAMILIA

Heterodmero Ig-alga/ Ig-beta. Receptor Poli-Ig. Receptores de clulas T. Protenas Accesorias de Clulas T. Molculas de MHC Microglobulina Beta2 Molculas de adherencia celular. Factor de crecimiento derivado de plaquetas.

ANTICUERPOS MONOCLONALES

En 1975 disearon un mtodo para obtener anticuerpo monoclonal

Georges Kohler

Cesar Milstein

Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y nica clula madre y una clula plasmtica tumoral.

USOS CLNICOS DE IMPORTANCIA

Diagnostico de microorganismos patgenos Medicin de las concentraciones sanguneas de varios frmacos Valorar la compatibilidad de antgenos de histocompatibilidad Reconoce antgenos causados por varios tumores Deteccin de embarazo

INTERACCIONES ANTGENOANTICUERPO

Puentes de hidrogeno Enlace inico Interacciones hidrfobas

Interacciones de van der Waals Enlaces inicos

CARACTERSTICAS
Especificidad Rapidez

Espontaneidad
Reversibilidad

MEDIDA CUANTITATIVA DE LA FUERZA DE LA UNIN.

LA AFINIDAD DE ANTICUERPO ES UNA

La fuerza combinada de las interacciones entre un sitio de unin de antgeno nico en un anticuerpo y un eptopo nico es la afinidad del anticuerpo por ese eptopo. Se define por una constante de equilibrio (Ka).

Determinacin de la constante de afinidad mediante dilisis de equilibrio.

AVIDEZ DE LA UNIN AG-AC

Fuerza con la que un anticuerpo multivalente se une a un Antgeno multivalente. Su valor es mucho mayor quela suma de las afinidades

REACTIVIDAD CRUZADA

Tambin es posible que un mismo eptopo se encuentre con dos antgenos diferentes en cuyo caso el anticuerpo reaccionara con los dos antgenos, dicindose entonces que existe una reactividad cruzada.

Antgenos del grupo sanguneo ABO

REACCIONES DE PRECIPITACIN:

El antgeno y el anticuerpo soluble que interactan en solucin acuosas forman un enrejado que se convierte en un precipitado visible.

LA FORMACIN DE UN ENREJADO DEPENDE DE LA

VALENCIA TANTO DEL ANTICUERPO COMO DEL ANTGENO:

El anticuerpo debe ser bivalente

El antgeno debe ser bivalente o polivalente

REACTANTES NO ESTN EN EXCESO.

SE PROPICIA CUANDO LOS

Manteniendo constante uno de los reactantes y variando la concentracin del otro en la mezcla de reaccin, se obtienen precipitados cuya masa varia segn la cantidad proporcional de antgeno y anticuerpo presentes.

Curva de precipitacin

La adicin de una pequea o grande cantidad de uno de los reactantes a una cantidad fija del otro, conduce a la formacin de complejos antgenoanticuerpo que dada la multivalencia de sus componentes, se mantiene en solucin

REACCIONES DE AGLUTINACIN

La interaccin entre el Ac y un Ag particulado resulta en un agrupamiento visible llamado aglutinacin. Estas reacciones dependen del enlace cruzado de antgenos polivalentes.

Efecto prozona: inhibicion de las reacciones de aglutinacin. Mecanismos:

Concentraciones altas de Ac El # de sitios de union de Ac puede exceder el de epitopos Esto provoca la unin a Ag de forma univalente.

APLICACIONES: HEMAGLUTINACIN

Para tipificar los glbulos rojos suelen llevarse a cabo reacciones de aglutinacin. En la tipificacin para g ABO se mezclan GR en un portaobjetos con antisuero a los Ag del grupo A oB. Si el Ag se encuentra en las clulas, stas se aglutinan.

APLICACIONES: AGLUTINACIN
BACTERIANA

Una infeccin bacteriana suele estimular la produccin de Ac sricos especficos para Ag de superficie en las clulas bacterianas. La presencia de estos Ac puede detectarse mediante aglutinacin.

TCNICAS

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

Unin competitiva de una antgeno radiomarcado y un antgeno no marcado a un anticuerpo de alta afinidad. El antgeno no marcado adicional a la mezcla de estudio compite con el antgeno radiomarcado por el abastecimiento limitado de anticuerpo.

Con objeto de determinar la cantidad de antgeno marcado unida, el complejo Ag-Ac se precipita para separarlo del antgeno libre (no unido a Ac) y se mide la radiactividad en el precipitado con un contador de radiacin.

ENSAYO DE INMUNOABSORCIN LIGADA A ENZIMA (ELISA)

Una enzima conjugada con un anticuerpo reacciona con un sustrato incoloro para generar un producto con reaccin de color. A este sustrato se le denomina sustrato cromgeno. Ms segura y menos costosa.

QUIMIOLUMINISCENCIA

Las versiones de ELISA que recurren a la quimioluminiscencia usan un sustrato luxgeno (que genera luz) en lugar de sustrato cromgeno de las reacciones convencionales.

Limite de deteccin 10 veces ms. Mas de 200 veces cuando se adicionan agentes de realce.

WESTERN BLOTTING

Identificacin de una protena especfica en una mezcla de protenas. Una mezcla de protenas se separa por medios electroforticos en un gel de poliacrilamida SSD. Las bandas de protena se transfieren electroforticamente en nitrocelulosa y se identifican con anticuerpo o antgeno marcados.

INMUNOPRECIPITACIN

Permite el aislamiento del antgeno de inters para un anlisis ms amplio. Un extracto obtenido de la alteracin de clulas o tejidos se mezcla con un anticuerpo contra el antgeno de inters a fin de formar un complejo antgeno anticuerpo que se precipitar.

INMUNOFLUORESENCIA

Si las molculas de anticuerpo se marcan con un colorante fluorescente, o fluorocromo, los complejos inmunitarios que contienen estos anticuerpos marcados con fluorescencia pueden detectarse por la emisin de color cuando se excita con una luz de longitud de onda apropiada.

CITOMETRIA DE FLUJO Y FLUORESCENCIA

Mtodo cuantitativo. El citmetro de flujo recurre aun rayo lser y un detector de luz para contar clulas intactas aisladas en suspensin.

MICROSCOPIA INMUNOELECTRNICA
La especificidad fina de los anticuerpos los convierte en instrumentos potentes para observar componentes tisular intracelulares especficos. Un marcador electrodenso se conjuga con la porcin Fc de un anticuerpo especifico para tincin directa o con un reactivo antiinmunoglobulina para tincin indirecta.

BIBLIOGRAFIA