Seminrio de Biotecnologia II

Docente: Florena Discentes: Ayslan, Fernanda, Laryssa, Rafaela

Ouro Preto, 2013

O QUE SO ANTICORPOS?

Anticorpos (Ac), ou gamaglobulinas;

imunoglobulinas

(Ig)

Glicoprotenas sintetizadas e excretadas por clulas plasmticas derivadas dos linfcitos B, os plasmcitos. Esto presentes no plasma, tecidos e secrees que atacam protenas estranhas ao corpo, chamadas de antgenos. Tem funo de realizar a defesa do organismo (imunidade humoral).

Os anticorpos podem existir em diferentes formas conhecidas como isotipos ou classes.

ESTRUTURA As imunoglobulinas so molculas e possuem estrutura tridimensional. Qualquer imunoglobulina possui duas cadeias pesadas. Cada uma das cadeias pesadas est unida a uma cadeia leve por duas pontes de enxofre e as duas cadeias pesadas esto unidas entre si.

Cada cadeia leve tem, aproximadamente, 220 aminocidos. E as cadeias pesadas 440 aminocidos.
Essas cadeias possuem, na sua extremidade aminoterminal, uma regio varivel, na qual a sequncia de aminocidos varia bastante entre anticorpos especficos para diferentes antgenos. As regies variveis contm regies de variabilidade ainda maior (regies hipervariveis) que correspondem ao stio de ligao ao antgeno. A extremidade carboxiterminal de cada cadeia referida como regio constante, visto que a sequncia de aminocidos bastante conservada em todos os anticorpos de uma determinada classe de imunoglobulinas.

As cadeias leves podem ser classificadas em dois tipos: kappa () ou lambda (). Tipos de cadeias pesadas: (,, , , ), que correspondem s cinco classes de anticorpos (IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM). Essa classificao baseada na sequncia de aminocidos da regio constante das cadeias pesadas.

PRODUO DE ANTICORPOS NA BIOTECNOLOGIA

A Biotecnologia = engenharia + cincias da vida. Atravs da manipulao dos seres vivos ou os seus componentes tem o objetivo de obter produtos teis com aplicaes no melhoramento de diversos problemas em diversas reas, como no ambiente, na sade e na produo de alimentos.

Um dos aspectos mais importantes da Biotecnologia a sua contribuio para o diagnstico e a teraputica de doenas.
Nestes casos, os processos biotecnolgicos tm um papel importante na imunologia, mais especificamente na produo de anticorpos. A utilizao e o estudo dos linfcitos B conduziram formao de dois tipos de anticorpos:

Os anticorpos policlonais, Os anticorpos monoclonais.

A produo de anticorpos monoclonais realiza-se ento em cinco etapas: 1) Imunizao de um animal, do qual se retira os linfcitos; 2) Isolamento de linfcitos B a partir do bao; 3) Fuso dos linfcitos B com mielomas; 4) Crescimento clonal dos hibridomas; 5) Recolha e purificao dos anticorpos monoclonais.

Aps este processo, os anticorpos monoclonais podero ser aplicados em diversas reas da biomdica:
Testes sorolgicos, para identificar microrganismos causadores de infeces. Testes de gravidez, em que o uso de anticorpos monoclonais serve para detectar a presena de certas substncias na urina, indicadoras de gravidez.

So utilizados ainda no tratamento de alguns cnceres, como o cncer da mama.

Os anticorpos utilizados nestes tratamentos designam-se genericamente por imunotoxinas, e so capazes de reconhecer determinadas molculas presentes em clulas cancerosas, destruindo-as sem afetar as restantes clulas do organismo.

PLANTAS PRODUTORAS DE ANTICORPOS

VANTAGENS EM RELAO AOS SISTEMAS MICROBIANOS E ANIMAIS

As plantas transgnicas podem ser exploradas como uma alternativa atrativa e de custo reduzido em relao aos sistemas microbianos e animais para a produo de biomolculas. Sistemas microbianos: possuem uma capacidade limitada para realizar as modificaes ps-traducionais de protenas eucariticas. Fermentao bacteriana: frequentemente resulta na produo de agregados insolveis, e custos substanciais esto envolvidos em solubilizar e remontar estes agregados em protenas nativas.

As culturas de clulas animais necessitam de meios de cultura caros, e o uso de animais transgnicos levanta muitas preocupaes pblicas e ticas. Plantas transgnicas so facilmente produzidas; linhagens homozigotas podem ser rapidamente obtidas, estocadas como sementes, e posteriormente, propagadas. As plantas so simples e baratas de cultivar, no requerendo recurso especializado ou meio de cultura elaborado.

A maioria dos anticorpos, so produzidos em animais e isolados a partir do soro ou fludo asctico, ou so produzidos em cultura por clulas especializadas(hibridoma.) Para isso, faz-se necessria a fuso de uma clula de mieloma de camundongo com um linfcito B normal, oriundo de um camundongo imunizado com o antgeno de interesse. A clula hbrida formada um hibridoma, que conserva a capacidade de diviso exacerbada do mieloma juntamente com a informao para a sntese do anticorpo especfico desejado. Dificuldade de cultivo do hibridoma; Meio de cultura caro; Pessoal tcnico e laboratrio altamente especializado; O crescimento pode parar ou podem ser contaminados por micoplasma.

APLICAES DOS ANTICORPOS

PRODUZIDOS EM PLANTAS

Dos compostos bioativos produzidos, os anticorpos so os que apresentam maior variedade de aplicao; Esses anticorpos monoclonais so utilizados para:
Reagentes farmacuticos Diagnsticos Modificaes de caractersticas da prpria planta

A produo desses anticorpos a partir das plantas possvel graas a similaridade entre as maquinarias das clulas animais e vegetais para produzir cadeias leves e pesadas, formando anticorpo completo e funcional; Esses anticorpos possuem beneficio na aplicao tpica das mucosas, local passvel de infeco, como medida profiltica contra vrus, fungos e bactrias.

Exemplo: Imunoglobulina multimrica complexa SIgA:

Mais efetiva que IgG contra bactrias por ligar-se polivalentemente ao antgeno.

SIgA = 2 IgA unidas por um pequeno peptideo J e complexada com um peptideo maior (componente secreto)

Cada componente foi expresso individualmente em uma planta de fumo, aps sucessivos cruzamentos das plantas transgnicas e seus filiais, houve a produo de plantas que expressassem todas as unidades levando a produo da SIgA corretamente montada e funcional (mostrando a flexibilidade dos vegetais na montagem de molculas complexas)

A grande disponibilidade de IgA secretria leva a oportunidades para terapias do sistema imune das mucosas:
Intestinal (E. coli, clera); Respiratria (influenza); Doenas sexualmente transmissiveis.

APLICAES DOS ANTICORPOS

PRODUZIDOS EM PLANTAS

Modificaes causadas na prpria planta:

Resistencia a doenas; Modulao das vias metablicas para produzir caractersticas nutricionais e de desenvolvimento; Biorremediao, onde ocorreria a expresso de um anticorpo recombinante de clulas vegetais e o uso dessa planta para o sequestro ( especifico de 1 poluente) de poluentes no ambiente.

APLICAES DOS ANTICORPOS

PRODUZIDOS EM PLANTAS

Os anticorpos aps a purificao podem ainda:

Preparao de colunas de afinidade; Kits de diagnstico;

Clinico Deteco de poluentes ambientais

De forma rpida e menos onerosa.

DIOXINAS

Perigosos Poluentes Ambientais

INTRODUO

H uma extensiva poluio de nossos ambientes por pesticidas orgnicos e outros qumicos industriais. reas afetadas incluem lagos, rios, gua potvel, solo, etc.

A fabricao de pesticidas, a incinerao de qumicos contendo halgenos, a fabricao de papel e plsticos, entre outros processos de produo de clorinas, podem resultar na produo no intencional de compostos qumicos que so potenciais poluentes ambientais.
Dentre estes poluentes ambientais destacam-se as dioxinas.

As dioxinas so hidrocarbonetos aromticos clorados, que incluem o 2,3,7,8 tetraclorodibenzopdioxina (TCDD), um dos mais potentes agentes txicos. So contaminantes do ecossistema, que, mesmo em baixas doses, so altamente teratognicos e carcinognicos.

A dioxina no solvel no ar ou na gua, mas atrada por leos e gorduras, acumulando-se em nveis altssimos nos corpos das espcies que esto no topo da cadeia alimentar, causando efeitos txicos que incluem:

anorexia, severa perda de peso hepatotoxicidade, hepatoporfiria leses vasculares, atrofia do timo e supresso imune Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento, lceras gstricas, teratogenicidade e morte

CASOS:

BRASIL: Houve o relato de que a Alemanha, Holanda e Blgica proibiram a entrada naqueles pases de farelo de casca de laranja, usado como matriaprima na produo de alimentao animal, devido contaminao por dioxina em dois carregamentos brasileiros destinados Europa.

JAPO:
um nvel recorde de dioxinas foi detectado nas cinzas eliminadas pelo incinerador de lixos do Hospital Kasori, na cidade de Chiba. A quantidade de agentes qumicos cancergenos encontrados totalizaram 19 mil picogramas/grama. o maior nvel j encontrado em cinzas liberadas por incineradores.

BLGICA:
mais de 1.100 produtos alimentcios foram retirados das prateleiras por suspeita de contaminao por dioxina (Folha de So Paulo de 9/6/99).

Portanto, h necessidade de se adotar um procedimento que seja especfico para os congneres mais txicos da dioxina e que seja relativamente simples e rpido na deteco do stio de contaminao, dados os prejuzos que esses compostos causam ao ecossistema e sade humana e animal.

TCNICAS ANALTICAS:

Cromatografia gasosa Espectroscopia de massa So de alto custo, e requerem laboratrios dedicados, equipamentos especializados, pessoal altamente treinado e no so disponveis para a aplicao in situ. Portanto, NECESSARIO o desenvolvimento de procedimentos alternativos que possam ser especficos, bastante sensveis, adaptveis para a anlise de mltiplas amostras e simples de serem manipulados, para a rpida aplicao no stio de contaminao, quantificao e retirada desses poluentes do ambiente.

Os imunoensaios preenchem esses critrios e fornecem provas efetivas na deteco de compostos importantes. Pode-se constatar que a produo em larga escala de anticorpos contra dioxina altamente desejvel, visto que o uso de kits de deteco produzidos com esses anticorpos purificados, a partir das plantas transgnicas, bem como o potencial uso dessas prprias plantas em um sistema de biorremediao, parecem ser estratgias bastante promissoras na tentativa de eliminar do ambiente esse perigoso poluente.

EXPRESSO DE ANTICORPOS ANTIDIOXINAS

EM PLANTAS DE FUMO

Com o objetivo de expressar o anticorpo anti-dioxina completo, em plantas de fumo, desenvolveu-se, uma estratgia de clonagem envolvendo os cDNAs para as cadeias leve e pesada do anticorpo IgG1a que reconhece o TCDD.

Aps experimentos usando clones como DD1 e DD3 , sob o controle do promotor constitutivo 35S do vrus do mosaico da couve-flor, foi possvel o conhecimento das seqncias das regies variveis de ambos os cDNAs. Em seguida, as construes resultantes, aps a seleo dos fragmentos, foram as introdues destes em plantas de fumo. Foram realizados mais experimentos.

Por fim as plantas foram levadas para vasos com terra, mantidos em casa de vegetao em condies adequadas de luz, temperatura e umidade, at o momento da colheita das folhas para as anlises moleculares e a extrao de protenas.

A anlise do DNA genmico por Southern blot confirmou a presena dos genes esperados, e a deteco do anticorpo nas plantas transgnicas cotransformadas, atravs da anlise imunolgica por slot blot., revelou claramente a presena da IgG anti-dioxina em quatro plantas testadas

A revelao foi feita por quimioluminescncia. Nos extratos da planta controle no houve reao, mostrando a ausncia do anticorpo. Esse imunoensaio mostrou que as plantas transgnicas de fumo foram capazes de produzir o anticorpo anti-dioxina.

O anticorpo anti-dioxina produzido pelas plantas de fumo poderia ento, ser utilizado na fabricao de um imunoensaio para a deteco da contaminao por dioxina, aps sua purificao.

Uma outra intrigante possibilidade para o uso dessas plantas transgnicas, seria biorremediao das reas poludas pela dioxina.

CURIOSIDADES

REFERNCIAS:
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 23 novembro/dezembro 2001 Abbas, A.K.; Lichitman, A.H.; Pober,J.S. Cellular and Molecular Immunology.2nd edition, edited by W.B. Saunders Company, 457 p,1994. http://www.newsmedical.net/news/2005/03/23/10/Portuguese.aspx (Acessado em 18/013) http://pt.wikipedia.org/wiki/Imunoglobulina (acessado em 18/06/13) http://www.receptabiopharma.com.br/site/anticorpo s-monoclonais/ (acessado em 18/06/13)