PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

ANTIGLOBULINA HUMANA

Se obtiene inyectando animales mamferos, generalmente conejos, con globulinas humanas purificadas. Prueba el suero de los conejos y se escogen los que han respondido mejor a la inmunizacin. Se obtiene sangre total se hace una mezcla de plasmas , reactivo especifico capaz de detectar globulinas humanas, gamma globulinas Aadido a hemates sensibilizados producir su aglutinacin

ANTIGLOBULINA HUMANA

SUERO HUMANO

CONTROL INMUNOHEMATOLOGICO SENSIBILIZACIN

FABRICACIN DE REACTIVOS

TIPOS DE REACTIVOS ANTIGLOBULINA

Poliespecfico: Anti IgG y Anti C3D

Monoespecfico: Anti IgG Anti IgA Anti C3D Anti IgM

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA

Detecta los auto anticuerpos o componentes del complemento fijados in vivo en los hemates de un paciente.

Estos anticuerpos algunas veces destruyen los glbulos rojos y causan anemia.

Se realiza este examen anemia, ictericia o anomalas en la apariencia de los glbulos rojos bajo el microscopio.

COOMBS DIRECTO ES POSITIVO:

Diagnstico de laboratorio de anemia hemoltica y enfermedad EHRN. Investigacin de reacciones dudosas en una transfusin. Investigacin de enfermedades autoinmunes que involucran la unin de inmunoglobulinas y/o fracciones del complemento a los glbulos rojos. Reacciones contra medicamentos que alteran la membrana.

Hasta el 3% de las personas que estn hospitalizadas sin un trastorno sanguneo conocido tendrn un resultado anormal en el examen de Coombs directo La prueba de coombs directo es positiva cuando se observa aglutinacin despus de la centrifugacin inmediata o posterior a la incubacin a temperatura ambiente.

Los glbulos rojos recubiertos con IgG suelen revelar reacciones inmediatas, mientras que los recubiertos con complemento podran demostrar con ms facilidad despus de la incubacin.

La prueba de coombs directo negativo no siempre significa que los glbulos rojos no tengan inmunoglobulinas fijadas.

Los reactivos anti-IgG y C3D Poliespecfico pueden detectar 200 a 500 molculas de IgG por clulas, pero los pacientes podran presentar anemia hemoltica autoinmune con valores de IgG ms bajos.

INVESTIGACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Son los que se dirigen frente a los antgenos de eritrocitos diferentes a los del grupo sanguneo ABO. Son capaces de inducir reaccin hemoltica con acortamiento In vivo de los hemates incompatibles. Se los denomina aloanticuerpos.

COMO SE FORMAN LOS ALOANTICUERPOS

Por estimulacin antignica: 1. Transfusin de hemates. 2. Embarazos o abortos 3. Mecanismos desconocidos

Incidencia: 1. Poblacin general: 0,3 a 2,0% 2. Politransfundidos: 9% 3. Anemias falciformes: 36% 4. Talasmicos: 10%

Importancia de la determinacin
Importantes: Anti D, Anti C, Anti c, Anti E, Anti e, Anti K, Anti Fy, Fy b, Jka, JKb, S, s. Importancia cuestionable: Anti Lea, Le b, Lub, M, N, P1, I.

Cuando estudiarlos Evaluacin prenatal Evaluacin EHRN Evaluacin enfermedades hemolticas Resolucin de Reac. Transfusionales.

Tcnicas para Investigar anticuerpos.

Grupo sanguneo ABO/Rh Deteccin de anticuerpos Identificacin de anticuerpos Paneles dirigidos Titulacin de anticuerpos Fenotipo antignico completo

Coombs directo

Deteccin de Anticuerpos

Reactivos utilizados:

1. Pantallas: Hemates 0 Ag comunes y conocidos.

2. LISS: potenciador de la reaccin, solucin de baja fuerza inica. 3. Inmuno amplificador: Antiglobulina humana 4. Hemates de control (C.C): Glbulos rojos sensibilizados con IgG.

Tcnica en tubo

1. Salina: centrifugacin inmediata

2. Incubacin: fase trmica

3. Coombs: fase antiglobulina

Si el resultado de la determinacin es positivo en cualquiera de la fases:

Se debe leer el inserto de las pantallas para que nos direccione hacia donde buscar, si se sospecha de un Ac del sistema Rh.

Se debe realizar un panel de clulas.

Al identificar el anticuerpo se debe hacer una titulacin del anticuerpo si es preciso, en el Banco de Sangre no se lo utiliza con frecuencia, pero en evoluciones prenatales es de suma importancia.

Titulacin de Anticuerpos
En ocasiones hace falta conocer la fuerza del anticuerpo en el suero, para ello hay que titularlo. Se realiza con diluciones progresivas del suero que reaccionan frente a una cantidad constante de eritrocitos portadores del antgeno que corresponda al anticuerpo a titularse. Cuanto mayor sea el ttulo mayor ser la concentracin del anticuerpo.

 La titulacin de anticuerpos se lleva a cabo cuando se identifica un anticuerpo antieritrocitario irregular clnicamente significativo en el suero de una mujer gestante o en un paciente con anemia hemoltica autoinmune por anticuerpos fros.

Si bien el ttulo de anticuerpos maternos se correlaciona, realmente, de forma escasa con la gravedad de la enfermedad hemoltica en el feto incompatible, suele emplearse como parte del algoritmo teraputico de la EHRN.

Los valores de la titulacin ayudan a determinar de manera semicuantitativa la concentracin del Ac en el suero y tambin el grado de expresin del Ag, sobre la superficie del hemate Dado que el ttulo de un Ac por si solo puede ser engaoso es conveniente determinar el Score del Ac, se determina asignando un puntaje al grado de aglutinacin, observando las diferentes aglutinaciones del Ac. El Score permite interpretar con mayor precisin el grado de reactividad del anticuerpo con su respectivo antgeno.

AGLUTINACIN 4+ 3+
2+ 1+ DBIL (w)

SCORE 12 10
8 5 2

TITULACIN
Rotular 10 tubos con titulaciones seriadas dobladas, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.

Colocar 100ul de S.S en 10 tubos.

Colocar 100 ul de suero en el primer tubo y seguimos pasando 100 a cada tubo el ltimo se desecha. Se hace una mezcla de las pantallas y se lava para obtener una concentracin de clulas al 5%.

Se incuba, posterior a esto se identifica hasta el punto de la aglutininacin.

Ttulo de Coombs
Pre tratamiento

Dilucin

16

32

64

128

256

512

1024

2048

Ttulo

P.final

Score

Grado

4+

4+

4+

4+

4+

3+

3+

2+

1+

256

512

96

Valor

12

12

12

12

12

10

10

Post tratamiento
Dilucin 1 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 Ttulo P.final Score

Grado

4+

4+

4+

3+

3+

2+

2+

2+

1+

256

512

88

Valor

12

12

12

10

10

10,000 IgG/GR 4+ 100-350IgG/GR 1+