A simple, reproducible and sensitive spectrophotometric method to estimate microalgal lipids

Yimin Chen, Seetharaman Vaidyanathan

Revista Analytica Chimica Acta Fator de impacto 4,555

INTRODUO

Problemas recorrentes do uso de combustveis fsseis reservas de leo iro acabar entre 2050 e 2075 (Walsh, 2000);

As microalgas so fontes de biomassa promissoras para a produo de biocombustveis (capazes de acumular leo); Maior eficincia fotossinttica; Alta produtividade (10 vezes maior que a produtividade da palma) (Chisti, 2007);

A produo de biocombustveis a partir das microalgas no compete com a indstria de alimentos;

INTRODUO

Nannoclholopsis sp.

Moazami, M. et al. 2012

INTRODUO

Fases de crescimento Microalgas

Moazami, M. et al. 2012

Produo de leo em microalgas

Teor de lipdios

Massa seca

Nutrientes

INTRODUO

Biodiesel de Microalgas

Chisti, Y. 2007

INTRODUO

INTRODUO

Lei de Beer-Lambert

a absortividade molar da substncia K o coeficiente de extino

INTRODUO

Extrao de lipdios: solventes orgnicos Determinao de lpidios: gravimetria, cromatografia em camada fina (TLC), o lquido de alto desempenho cromatografia (HPLC) ou cromatografia gasosa (GC)

Desvantagens: Grandes quantidades de amostras Extrao completa de lpidos Demorado Necessidade de instrumentos especiais

INTRODUO

Vermelho do Nilo Vantagens DMSO + Temperatura alta Lipdeos neutros Sensibilidade Desvantagens: Concentrao para cada organismo - Interferncia Absoro por diferentes clulas Fluorescncia Mudanas na integridade da parede celular

INTRODUO

Acumulao de lipidos de armazenamento de microalgas: cidos graxos ligados

Determinao: medio espectrofotomtrica do complexo FA-metal (cobre ou cobalto); Ions de cobre e de cobalto, podem reagir com FA para formar complexos coloridos, que podem ser extrados com clorofrmio na presena de trietanolamina (TEA);

Sensibilidade

INTRODUO

Complexo FA-60Co Sensibilidade X Radioatividade e detector Reagente desenvolvidor de colorao: reage com o cobre em solventes orgnicos Intensidades sensveis aos ons de cobre e qualquer contaminao de trao de cobre pode causar a falha de medio.

Objetivo

Criar uma metodologia para a quantificao de lipdios em microalgas: simples, barata, com a utilizao de um espectrofotmetro e com alta sensibilidade.

MTODOS

Nannochloropsis oculata e Dunaliella salina

Coleo de Cultura de Algas e Protozoa (CCAP, UK); Cultivadas em meio F/2; 25 C, com fotoperodo de 12 h; As clulas de microalgas de diferentes fases de crescimento foram

colhidas por centrifugao e os sedimentos celulares foram

congelados a -20 C at anlise.

MTODOS

Padres de cidos Graxos utilizados: cido chiqumico (C7) Decanoato de sdio (C10)

Dodecanoato de sdio (C12)

cido Palmtico (C16) cido linoleico(C18)

MTODOS

MTODOS

Quantificao das referncias lipdicas: Lipdios totais foram extrados a partir da biomassa N. Oculata e D. salina e quantificada gravimetricamente.

Resultados e discusso

Fig. 1. An overlay of UVvis spectra of reference 2 (Mix 1), N. oculata cells without copper (Mix 2), cells after reaction with copper (Mix 3 (algal extract)) and sodium palmitate after reaction with copper (Mix 3 (C16)), all against reference 1 (Mix 0). (For interpretation of the references to colour in this figure legend, the reader is referred to the web version of the article.)

Resultados e discusso

O limite de deteco do mtodo : 2 nmol

Fig. 2. Absorbance of FA standards (shikimic acid (C7), decanoic acid (C10:0), dodecanoic acid (C12:0), palmitic acid (C16:0) and linoleic acid (C18:2)) as a function of concentration at 260 nm (a). The inset (b) shows the relationship in the lower range.

Resultados e discusso

Resultados e discusso

Razo molar TEA/Cu em (a): cerca de 1:1 e de TEA:Cu:FA em (b): 1:1:2

TEA: Anftero: melhora a ligao e a hidrofobicidade de complexos de Cu-FA e do complexo ternrio de TEA-Cu-FA

Resultados e discusso

Fig. 4. Standard curves of D. salina (DS) and N. oculata (NO) lipid concentration, decanoic acid (C10), palmitic acid (C16) and linoleic acid (C18) in terms of mg mL1 (trireplicates).

Resultados e discusso

Fig. 5. Growth curve and lipids content (of N. oculata (a) and D. salina (b). The lipids were estimated using the protocol given in this paper, one with lipid extracts from the respective microalgae as standard, and the other with palmitate (C16:0) as the standard.

Concluses

Foi demonstrado que os cidos graxos combinam com o complexo Cu-TEA , que pode ser medido a 260 nm e ser utilizado como base para estimar a concentrao de lipdios em microalgas; cidos graxos com diferentes cadeias de carbono possuem resposta similar no protocolo proposto; Extrato de microalgas e cidos graxos (ex. C16) puro podem ser utilizados como soluo padro para mensurao de lipdeos.