Histoqumica

Dr. Giovanni Arnoldo Molina Paredes Residente de Primer Ao de Patologa Agosto 2012

Introduccin.

Las imgenes producidas por absorcin, en preparaciones coloreadas, son mucho ms fciles de interpretar que las imgenes de difracciones dada por preparaciones no coloreadas. Los diversos elementos de los tejidos poseen ms o menos el mismo ndice de refraccin, lo que hace que el reconocimiento sea una tarea difcil. Estos dos argumentos hacen comprender la necesidad de las coloraciones para el estudio morfolgico de clulas y tejidos.

Introduccin.
Coloracin:es

el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solucin colorante.

Introduccin.

Colorantes:reciben esta denominacin las sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos. poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromforo, y otro que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina cromgeno.

Introduccin.

Introduccin.
Lascoloraciones

pueden ser:

Ortocromticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solucin colorante empleada. Metacromticas: una sustancia o un componente celular se tie con un color diferente al del colorante empleado.

Introduccin.

Mtodos de coloracin:

Coloracin directa:existe verdadera afinidad entre el colorante y el objeto. Coloracin indirecta:requiere intervencin de intermediarios o mordientes. Coloracin progresiva:se hace actuar el colorante hasta que llegue a su punto ptimo. Coloracin regresiva:se realiza primero una sobrecoloracin y luego se elimina el resto del colorante por medio de diferenciadores. Coloracin simple:se colorean solamente algunos elementos del preparado. Coloracin combinada:se tien elementos nucleares y citoplasmticos. Coloracin panptica:coloracin combinada realizada sucesivamente por colorantes neutros. Coloracin pancrmica:en un solo bao colorante actan todos los colorantes neutros que se necesiten.

Batera de coloracin H-E.

Desparafinar los cortes con dos baos de xileno de 10 a 15 min. c/u. Eliminar el solvente por sucesivos baos en alcohol de 100, 96, 70 de 1 a 2 min. c/u. Hidratar en agua destilada durante 1 a 2 min. Tincin nuclear en hematoxilina durante 2 a 12 min. de acuerdo a la formula utilizada. Viraje de la hematoxilina en agua corriente hasta desprendimiento total del color (3 a 5 min.). Coloracin citoplasmtica con eosina durante 15 a 30 seg. Lavado en agua destilada. Deshidratar, aclarar y montar. Los pasos de la deshidratacin pueden ser suplidos dejando secar el corte en estufa a 37 por 15 a 20 min.

Colorantes y reacciones histolgicas comunes.

Hematoxilina: Eosina:

Ncleo y regiones cidas.

Regiones bsicas y colgena. argnticas: Fibras reticulares. frrica: Msculo, eritrocitos.

Tinciones

Hematoxilina cido

perydico de Schiff: Molculas ricas en carbohidratos y glucgeno. de Wright y Giemsa: Eritrocitos y grnulos de eosinfilos; Ncleos de leucocitos y grnulos de basfilos; Citoplasma de monocitos y linfocitos. de Masson: Ncleos; Msculo, queratina y citoplasma; Mucingeno, colgena.

Colorantes

Tricrmica

Tinciones histoqumicas.

Suponen una reaccin qumica en la que intervienen molculas pertenecientes al propio tejido. Su objetivo es poner de manifiesto una molcula o familia de molculas presentes en una seccin histolgica y estudiar su distribucin tisular "in situ". Estas molculas son difcilmente discernibles con colorantes generales.

Tinciones histoqumicas.

Durante el procesamiento del tejido previo a la reaccin histoqumica, como la fijacin o la inclusin, hay que evitar daar a la molcula que se quiere detectar porque de otra manera resultara en falsos negativos, es decir, no tener tincin cuando en realidad la molcula de inters s est presente en el tejido, aunque deteriorada.

Tinciones histoqumicas.

Periodic acidSchiff (PAS).

Es una tcnica extremadamente til y agradable estticamente. Las sustancias que contienen grupos glicol o sus derivados amino o alquilaminos son oxidados por el cido peridico para formar dialdehdos, que se combinan con el reactivo de Schiff para formar un compuesto insoluble de color magenta. Demuestra el glucgeno y mucosustancias neutrales, esboza las membranas basales, y pone en evidencia la mayora de los tipos de hongos y parsitos. Como curiosidad, cabe aadir que tambin es til para la demostracin de los cristales intracitoplasmticos en el sarcoma alveolar de partes blandas.

Tinciones histoqumicas.

Tinciones para microorganismos.

Incluyen tcnicas para las bacterias gram-positivas y gram-negativas, micobacterias cido-resistentes, hongos y parsitos. La tincin de Gram permite la separacin de las bacterias en aquellas que retienen el complejo violeta-yodo (gram positivos) y aquellas que se decoloran por tratamiento del alcohol o acetona y son teidas por safranina o fucsina. Depende del alta contenido lipdico (cidos miclicos y acidos grasos de cadena larga) en las paredes celulares de las micobacterias, que confieren a la clula la capacidad de formar complejos colorantes bsicos (tales como carbolfucsina) y para retenerlos tras la fuerte decoloracin con alcohol cido. Las tcnicas de este grupo ms utilizados son el de Brown y Brenn (B &B; como una modificacin de la tincin de Gram), la tincin de Ziehl-Neelsen (de microorganismos cido-alcohol resistentes), Grocott hexamina y plata (para los hongos y Pneumocystis), PAS (para los hongos, amebas y tricomonas), y Dieterle o una de sus modificaciones (para Helicobacter, Legionella y organismos de la sfilis y enfermedad de Lyme).

Tinciones histoqumicas.

Tinciones argentafines y argirfilas.

La reaccin argentafn depende de la presencia en el tejido de una sustancia, a menudo del grupo fenlico (tales como las catecolaminas o indolaminas), que reduce las sales de plata (y otros metales); por lo general se utiliza la tcnica de Fontana-Masson en el material incluido en parafina. En la reaccin argiroflicas, es aadido un agente reductor tal como la hidroquinona o la formalina; generalmente se emplea la tcnica de Grimelius no modificada. Se utilizan principalmente para la identificacin de las clulas neuroendocrinas y sus tumores, tambin para la demostracin de fibras de reticulina, melanina y calcio.

Tinciones histoqumicas.
Tinciones

para amiloide.

La tincin llamada rojo Congo es considerada como la tcnica ms fiable y prctica para detectar amiloide.

Tinciones histoqumicas.

Tinciones de retculo.

Demuestran tanto las fibras reticulares como materiales de la membrana basal. Consisten en fibras muy finas de colgeno tipo III, muy extendidas en el tejido conectivo. Las membranas basales se compone principalmente de colgeno tipo IV y laminina. En ambos casos, parece que la adsorcin de la plata y su PAS positividad se deben a un revestimiento de proteoglicanos consolidados. Tradicionalmente, sus principales aplicaciones (como Gomori, Wilder, y Gordon y Sweet) en la patologa tumoral han sido para distinguir: neoplasias epiteliales de no epiteliales, diversas neoplasias mesenquimales de otras, y carcinoma in situ o invasor.

Tinciones histoqumicas.
Tinciones

tricrmicas.

En los mtodos tricrmicos, tales como los elaborados por Masson, Van Gieson, y Mallory, cido fosfotngstico o fosfomolbdico se utilizan en combinacin con varios colorantes aninicos. El valor principal de este grupo de tinciones es en la evaluacin del tipo y cantidad de material extracelular. Las tres estructuras tisulares demostradas por los tres componentes de los tintes son los ncleos, el citoplasma, y el colgeno extracelular, respectivamente.

Tinciones histoqumicas.

Tinciones de Perls, Fontana-Masson y von Kossa.

Las tinciones de hemosiderina (Perls), melanina (Masson-Fontana) y calcio (Von Kossa). En la tcnica de Perls, el cido clorhdrico se separa de la protena unida al hierro, permitiendo que el ferrocianuro de potasio pueda combinarse especficamente con el hierro frrico para formar ferrocianuro frrico (azul de Prusia). En el mtodo de Fontana-Masson para melanina, una solucin de plata amoniacal se utiliza sin un bao de reduccin. Solamente aquellas sustancias capaces de reducir las sales de plata directamente (es decir, argentafines), como la melanina, se demuestran. En el mtodo de von Kossa para el calcio, la plata es sustituida por sales de calcio; que luego es reducida a una plata metlica negra por el uso de la luz o un revelador fotogrfico.

Tinciones histoqumicas.

Tinciones para mucina.

La mucina es el trmino tradicional utilizado para un gran grupo de macromolculas que contiene un grupo cido, que se divide en dos categoras principales: las epiteliales O-glicoprotenas (unido a la membrana o secretado) compuesto de un ncleo de protena y un cido silico que contiene resto de carbohidrato (si sulfatado o no) y los glicosaminoglicanos del estroma, que contienen cido hialurnico y que tambin puede ser sulfatado. Varias tinciones estn disponibles para la demostracin especfica de mucinas altamente cidas. Estos incluyen el azul de Alciano, hierro coloidal, de hierro de alta-diamina, y el clsico mucicarmn Mayer. Se utilizan para clasificar a la metaplasia gstrica incompleta en subtipos (que contienen sialomucina y sulfomucina), que tienen un potencial maligno supuestamente diferente.

Tinciones histoqumicas.
Tincin

de Giemsa.

La tcnica es muy til para la demostracin de varios elementos hematolinfoides (incluyendo los mastocitos) y microorganismos. Los ncleos celulares se tornan de un violeta intenso, la granulacin eosinfila de un pardo rojizo, el citoplasma de linfocitos de un azul definido y sus ncleos de violeta variable.

Tinciones histoqumicas.

Tincin para fibras elsticas.

Las tcnicas tipo Weigert son bastante especficas para la elastina, y son consideradas por muchos como el mtodo de eleccin para la demostracin de estas fibras extracelulares. Sin embargo, la tincin de Gieson Verhoeff-van (VVG) es ms popular porque es rpida y se esbozan las fibras elsticas con un fuerte color negro. Ambas tcnicas se suelen establecer en el contexto tricrmico proporcionado por la tincin de Van Gieson. Como resultados, los ncleos celulares se tien de marrn a negro, la colgena de rosa a rojo y el msculo y citoplasmas de amarillo.

Bibliografa.
Rosai

and Ackerman's Surgical Pathology, 10th Edition, By Juan Rosai. de Anatoma Patolgica, 1a edicin, 1993.

Laboratorio