PERSISTENCIA DE SALMONELLA ENTRICA EN FRO DURANTE LA DESHIDRATACIN Y POSTERIOR ALMACENAMIENTO

Nadia Gruzdev a,b, Riky Pinto a, Shlomo Sela (Saldinger) a,* a Microbial Food-Safety Research Unit, Department of Food Quality and Safety, Institute for Postharvest and Food Sciences, Agricultural Research Organization (ARO), The Volcani Center, POB 6, Beth-Dagan 50250, Israel b Department of Biochemistry and Food Science, Robert H. Smith Faculty of Agriculture, Food and Environment, The Hebrew University, Rehovot, Israel.

Presentado por: Yessith Alzamora Pupo Susana Marin Gongora Daniel Ordosgoitia Novoa Juan Pardo Contreras Karla Yunez Caate Aura Zuleta Morales

INTRODUCCION
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

En este estudio se investigo las condiciones ambientales que afectan a la supervivencia de salmonella despus del almacenamiento en fro y posterior deshidratacin. Para el anlisis se trato cepas bacterianas, para la posterior preparacin del inoculo en una determinada condicin de crecimiento y la deshidratacin en diferentes condiciones ambientales.

INTRODUCCION
La deshidratacin es un mtodo largamente establecido para controlar el crecimiento bacteriano, ya que la mayor parte de las especies patgenas no pueden crecer en condiciones de baja actividad de agua. al obtener los resultados de los anteriores anlisis se procede a presentar la parte estadstica.

OBJETIVOS
GENERAL:

Determinar las condiciones ambientales que afectan a la supervivencia de salmonella despus del almacenamiento en frio y posterior deshidratacin.
ESPECFICOS:

Conocer el efecto en los factores de crecimiento.

Ofrecer una visin prctica sobre el comportamiento de la salmonella debido a los cambios ambientales.

MATERIALES Y MTODOS
CEPAS BACTERIANAS, LA PREPARACIN INCULO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO DEL

Las cepas de Salmonella se hicieron crecer en xilosa lisina desoxicolato (XLD) agar . Una colonia bacteriana fresca se extendi sobre LB Luria-Bertani (LB) En placas de agar con un hisopo estril y se incubaron durante 20 horas a 37 C. Cuando se indica, las placas se incubaron a 25 C durante 60 h. Las clulas se recogieron mediante resuspensin en agua estril doble desionizada (agua SDDW) utilizando una goma de polica estril. Se lavaron tres veces en agua SDDW (3800 g por 5 min) a temperatura ambiente. El sedimento final se resuspendi en agua SDDW a una concentracin final de 2,0x 10^9 CFU / ml.

MATERIALES Y MTODOS
LAS CEPAS BACTERIANAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO

MATERIALES Y MTODOS
CONDICIONES DE DESHIDRATACIN Y PRUEBA DE PERSISTENCIA A LARGO PLAZO Cincuenta micro litros de bacterias (10^8 CFU) se deshidrataron en 96 platos. Las bacterias secas se recuperaron mediante la adicin de 100 ml de agua SDDW y 5 min de incubacin a temperatura ambiente. Tolerancia deshidratacin (DT) se calcul como el porcentaje de bacterias viables a las 22 h; el nmero de bacterias en el tiempo cero (antes de la desecacin) se consider 100%.

MATERIALES Y MTODOS
LA DESHIDRATACIN EN DIFERENTES CONDICIONES AMBIENTALES Ajustado a valores de pH de 3 a 11 mediante la adicin de HCl o NaOH. Se incubaron durante 22 h en los mismos valores de pH. Para probar el efecto de cloranfenicol en DT y LTP, las bacterias fueron deshidratados en agua SDDW suplementado con cloranfenicol (30 mg / ml).

MATERIALES Y MTODOS
LA VIABILIDAD DE TINCIN El sedimento se re suspendi en 30 ml de solucin de tincin y se tieron de igual forma se tieron de manera similar El porcentaje de viabilidad se calcul dividiendo el nmero de viables (verde) clulas por el nmero total de vivo (verde) y muertas (rojas) de las clulas bacterianas.

MATERIALES Y MTODOS
CONDICIONES DE RECUPERACIN Para determinar el efecto de recuperacin del medio, las clulas deshidratadas se incubaron durante 90 min a 25 o 37 C en agua SDDW, caldo LB de soja trptico (TSB), y la infusin de cerebrocorazn(BHI). Despus de la incubacin el nmero de bacterias supervivientes (CFU) fue determinado, como se ha descrito anteriormente (Condiciones de deshidratacin y largo plazo ).

MATERIALES Y MTODOS
EL ANLISIS ESTADSTICO Todos los experimentos se realizaron por triplicado. Los resultados se presentan como valores medios con desviaciones estndar. En comparacin de los medios de DT y LTP se realiz por medio de un anlisis de la varianza. La prueba de Tukeye-Kramer comparaciones mltiples utilizando GraphPad software Instat3, las diferencias se consideraron significativas a P <0,05.

RESULTADOS
DT Y LTP EN CEPAS DE SALMONELLA ENTRICA La tolerancia a la deshidratacin de la salmonella typhimurium 1344 SL fue comparada con 5 cepas diferentes de salmonella typhimurium y los otros tres serotipos de salmonella entrica. Los resultados estn basados en la reduccin de CFU en logaritmo base 10 un periodo de 12 semanas a una temperatura constante de 4C.

RESULTADOS

Los valores entre parntesis indican la desviacin estndar de la media (n = 9)

RESULTADOS
EFECTO DE LA FASE DE CRECIMIENTO Y EN MEDIO SLIDO DT Y LTP DURANTE ALMACENAMIENTO EN FRO

La S. Typhimurium SL 1344 se deshidrat y se realiz un ensayo de DT y LTP en paralelo, de la bacteria cultivada en agar LB en un medio solido plano donde lograron sobrevivir mejor.

RESULTADOS
Dicho efecto se representa en la siguiente grafica:

RESULTADOS
EFECTO DE LAS CONDICIONES DE CRECIMIENTO EN DT Y LTP DURANTE EL ALMACENAMIENTO EN FRO Las condiciones de cultivo pueden influir en la respuesta al estrs bacteriano debido a las diferencias en la expresin gnica. De acuerdo a la experimentacin realizada a 25 y 37C, se determino que la salmonella cultivada a 25C logro sobrevivir mejor a la desecacin que la de 37C, sin embargo la cultivada 37C presento mejor DT que la de 25C.

RESULTADOS

RESULTADOS
Adems se realiz un estudio con distintas concentraciones de sal ya que la salmonella puede crecer bajo una amplia gama de concentraciones de sal. Este estudio arroj como resultados que la DT de la salmonella fue mayor cuando se cultiv en un medio con 0.5 y 1% de NaCl, sin embargo ningn aumento adicional se observ en medios suplementados con 5% de NaCl.

RESULTADOS
Dichos resultados se muestran en la siguiente grafica:

RESULTADOS
EFECTO DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES EN LA DT Y LTP EN ALMACENAMIENTO FRO

RESULTADOS

RESULTADOS
La pre-exposicin de Salmonella a pH leve demostr aumentar la tolerancia, la DT fue mxima a pH 8,0 y disminuy a valores de pH inferiores o superiores, mientras que la LTP fue siempre menor en los ambientes cidos.

RESULTADOS
EFECTO DEL TIEMPO DE DESHIDRATACIN EN CLORANFENICOL DT Y LTP

Visualizacin de bacterias viables y muertas, verde: vivas, rojas: muertas. A. antes de la deshidratacin, B. pasadas 22h, C. durante el almacenamiento a las 48 semanas y D. a las 100 semanas.

CONCLUSIONES
S. Typhimurium se pueden presentar por distintas condiciones y crecimientos, incluyendo la temperatura, la concentracin de NaCl y la deshidratacin llevada de la mano con el PH bsico. Por medio de un buen almacenamiento en fro se puede mejorar la DT y LTP de la bacteria. El almacenamiento en fro de una gran proporcin de clulas deshidratadas DIFICULTARA la deteccin del patgeno en productos alimenticios secos. Una tasa lenta deshidratacin aumenta la supervivencia bacteriana.