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mikros (= muy pequeo), bios (= vida), logos (= ciencia, estudio) y significa pues literalmente: "ciencia o estudio de la vida pequea. Segn sto, podemos definir la microbiologa como la ciencia que estudia los microorganismos, o sea, los seres vivos que son tan pequeos que no son observables a simple vista, dicho de otra manera, los organismos microscpicos o microorganismos. stos microorganismos incluyen seres vivos pertenecientes a varios grupos: procariotas (bacterias), eucariotas (hongos, microalgas y protozoos) y virus (no celulares). Los microorganismos, "son un grupo grande y diverso de seres vivos que pueden existir como clulas individuales o como agrupaciones simples de clulas. Una clula microbiana sola es, generalmente, capaz de llevar a cabo los procesos vitales de crecimiento, respiracin y reproduccin con independencia de otras clulas del mismo tipo o de tipo diferente"
BREVE HISTORIA
La Microbiologa nace con el microscopio:
El nacimiento de la Microbiologa estuvo vinculado al invento y posterior desarrollo de los microscopios. Un comerciante holands, Antony van Leeuwenhoek (16321723), construy los primeros microscopios, rudimentarios pero con un alto poder de resolucin que le permitieron 1676 el descubrimiento de "animaculos" en el agua y en otros fluidos. Describi y dibuj con precisin lo que hoy conocemos como protozoos, algas, levaduras y bacterias as como los hemates y los espermatozoides. El microscopio de van Leeuvenhoek era un instrumento compuesto de una lente biconvexa fija y un tornillo de desplazamiento para el objetivo. Su procedimiento de medida consista en comparar los elementos que vea con objetos de dimensiones conocidas como un grano de mijo. Se sorprenda al comprobar que sus "animaculos" eran de tamao al menos 1000 veces inferior al de dicho grano.
Qu es una Infeccin?
Implantacin y desarrollo de seres vivos patgenos en un organismo, accin morbosa de los mismos y reaccin orgnica consecutiva. Cuando un vertebrado se infecta con un microbio patgeno, su organismo desarrolla rpidamente un sistema interno de defensa (respuesta inmune especfica) que se caracteriza fundamentalmente por dos aspectos: -Contribuye a la recuperacin de la enfermedad -Produce una proteccin ante una posterior reinfeccin . El estudio de esta "respuesta inmune" ha dado origen a un nuevo campo de la ciencia: la Inmunologa, que estudia el proceso mediante el cual las sustancias extraas que se introducen en un organismo (Antgenos) provocan la aparicin de clulas especficas y de protenas circulantes (Anticuerpos) con una gran afinidad por dichos antgenos. Estudia asi mismo las propiedades, interacciones y funciones de estas clulas y protenas.
El laboratorio de Microbiologa, a la hora de prestar ayuda al mdico clnico ante las enfermedades infecciosas, ofrece tres caminos diferentes con objetivos bien diferenciados:
Desde el campo de la Serologa es posible: -Determinacin de la presencia de patgenos en el organismo (deteccin directa de sus antgenos) - Determinacin de la huella que estos patgenos dejan en el sistema inmunolgico del paciente (deteccin y cuantificacin de los anticuerpos que nuestro organismo produce contra dicho patgeno)
El antibiograma
Por qu realizar un antibiograma? -El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales. -El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales.
TINCIN GRAM
Es una tincin diferencial, clasificando a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared celular: LOS PASOS A SEGUIR:
1 Fijamos la muestra mediante calor. 2 Violeta cristal (Tie todas las bateras, gram + y -) 1. 3 Fijamos con Lugol, 1. 4 Decoloremos con una mezcla alcohol-cetona (los gram - se decoloren). 5 Safranina (colorante de contraste, tie a los gram -), 1.
. En la tincin se observarn de color azulvioleta las gram + y de color rosa las gram
se observan estreptococos gram + y bacilos gram -.
Ejemplos de algunos grupos de bateras que no se tien con esta tcnica, por lo que podemos usar:
Gnero Legionella: uso de tincin de Diertele, Gimenez o Fluorescencia. Gnero Treponema: tincin argntica o de Fontana-Tribondeau Gnero Mycoplasma: tincin de Giensa. Gnero Mycobacterium: tincin Zeil-Nilsen.
PRUEBAS BIOQUIMICAS
1. Fermentacin de la lactosa (Mc Conkey)
Es un medio slido, diferencial y selectivo. Se usa para la discriminacin de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -).Composicin g/l : - Peptona 20.0 : fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -. - Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +. - Sales biliares 2.5 : le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +. - Cloruro sdico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis). - Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloracin. Si las bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que darn al medio un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificar por el uso de la peptona y se tornar amarillo.
2.
Es un medio slido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de fermentacin de dos azucares (glucosa y lactosa), en la produccin de c. sulfhdrico y en la produccin de gas. Composicion g/l:
Extracto de carne 3.0 Peptona 20.0 Glucosa 1.0 Extracto de levadura 3.0 Lactosa 10.0 Cloruro sdico 5.0 Tiosulfato sdico 0.5 : fuente de azufre, las bacterias lo reducen produciendo c. sulfhdrico (precipitado negro)
Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosceo , indica basicidad del medio, si es amarillo indica acidificacin (derivada de c. de la fermentacin)
G: productora de gas
1 Fermentador glucosa, productor c. sulfhdrico y de gas. 2 3 Fermentador glucosa, lactosa y productor de gas.
4. Citrato de Simmons
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno. El medio contiene citrato sdico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornar azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradacin del fosfato amnico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.
API 20E
(Sistemas de identificacin multipruebas)
es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Bsicamente consta de 21 tests bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.
Prueba ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX
Reaccin / Enzimas Beta-galactosidasa Arginina deshidrolasa Lisina descarboxilasa Ornitina descarboxilasa Utilizacin del citrato Produccin de H 2 S Ureasa Triptfano desaminasa Produccin de indol Produccin de acetona (Voges-Proskauer) Gelatinasa Fermentacin/oxidacin de glucosa Fermentacin/oxidacin de manitol Fermentacin/oxidacin de inositol Fermentacin/oxidacin de sorbitol Fermentacin/oxidacin de ramnosa Fermentacin/oxidacin de sacarosa Fermentacin/oxidacin de melobiosa Fermentacin/oxidacin de amigdalina Fermentacin/oxidacin de arabinosa Citocromo oxidasa
0104140
Shigella flexneri Salmonella paratyphi A Pasteurella multocida Yersinia enterocolitica Pasteurella multocida Shigella boydii Acinetobacter calcoaceticus Achromobacter sp. Alcaligenes faecalis Alcaligenes sp. Proteus mirabilis Salmonella paratyphi A Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pasteurella sp. Klebsiella ozaenae Shigella sonnei
0104452
0104504 0104521 0140004 0144042 0206042 0210004 0210004 0210004 0314000 0504512 0676001 0776000 1000004 1014743 1104112
1214012
1214773
2206004 2504752 3005573
Salmonella spp.
Enterobacter cloacae Aeromonas hydrophilia Salmonella cholerasuis
3246527
4004550 4004550 4104100 4357106 4404112 4404510 4404540 4504010 4604552 4704500 5004024 5044124 5046753 5100100
Salmonella typhi
Salmonella gallinarun Vibrio parahemolyticus Salmonella gallinarum Salmonella cholerasuis Salmonella tiphy Salmonella pullorum Salmonella spp. Salmonella cholerasuis Pseudomonas cepacea Vibrio cholerae Serratia odorifera Yersinia ruckeri
Hafnia alvei Salmonella arizonae Escherichia coli Serratia rubidae Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Enterobacter gergoviae
5317761
5704412 5704552 6004540 6144204 6404112 6504750 6604512 6704342
Serratia marcescens
Salmonella arizonae Salmonella arizonae Salmonella typhi Plesiomonas shigelloides Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp. Salmonella spp.
6704532
6704752 7244126 7305773 7704752 7704752
Salmonella spp
Salmonella gallinarum Aeromonas hydrophila Enterobacter cloacae Salmonella arizonae Salmonella spp.
Escala de Mc Farland
La utilidad de la escala es poder realizar suspensiones bacterianas ajustadas a un patrn, generalmente se suele usar el 0,5 Mc Farland, para esto se toma una muestra de nuestra bacteria y la inoculamos en un tubo con solucin salina, en el momento en que se produzca un poco de turbidez ya estamos en el 0,5 (de forma visual). La finalidad, es establecer una relacin entre una precipitacin qumica y una suspensin bacteriana. Creamos 10 estndares (en la tabla aparece la composicin de estos) y por espectrofotometra, creamos una recta patrn, de forma que vamos a poder detectar la concentracin de nuestras diluciones bacterianas (de manera aproximada, ya que depende de factores como el tamao de la bacteria, la formacin de agregados,...). La escala se basa en la capacidad de precipitacin del cloruro de bario en presencia de cido sulfrico.
Antibiograma
Se usa para establecer de una forma relativamente cuantitativa, la actividad de un conjunto de antibiticos. El mtodo se basa en la formacin de halos de inhibicin del crecimiento en una placa inoculada homogneamente por accin de discos antibiticos de concentracin conocida, la difusin de este hacia el medio va a originar la inhibicin del crecimiento. Posteriormente mediremos el dimetro del halo generado, para comprobar la efectividad del antibitico (existen tablas que en funcin de los mm del halo, determinan si la bacteria es resistente o no).
- lactaminas Penicilinas G M
Penicilina G Penicilina V Meticilina Oxaciclina Ampicilina Carbencilina Cefalosporina C Cefalotina Cefaloridina Estreptomicina Neomicina Framicetina Paromomicina Kanamicina Gentamicina Tobramicina
(Sntesis)
Cefalosporina
Cephalosporium acremonium
Ligosacaridos
Tetraciclina
Tetraciclina Clorotetraciclina Dimetilclorotetra ciclina Oxitetraciclina Cloranfenicol Tianfenicol Eritromicina Oleandomicina Espiramicina Kitamicina Lincomicina Virgimicina
S. texasi S. aureofaciens S. aureofaciens S. rimosus S. venezuelae (Sntesis) S. erythraeus S. antibioticus S. ambofaciens S. kitasaensis S. lincolnensis S. virgineae S. pristinae-spiralis S. mediterranee S. mediterranee Bacillus polymyxa B. licheniformis B. brevis Fusidium coccineum S. spheroides S. orientalis Nocardia lurida
Cloranfenicol Macrolidas
Sinergistina
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Fig.1
Fig.2
Fig.3
Fig.4