UNIDAD N 3:

REPLICACIN

Blgo. Ms. Pablo Chuna Mogolln

Profesor Asociado T.C. Area Biologa Departamento Acadmico de Ciencias - UPAO

REPLICACIN DEL DNA

CARACTERSTICAS
Semiconservativa Bidireccional Asimtrica Semidiscontnua Asincrnica El agregado de nucletidos es uno a la vez Es multifocal en eucariotas Requiere de cebadores Ocurre en el perodo S.

Bidireccional y Asimtrica

Semidiscontnua

Multifocal en Eucariotas

PROTENAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION (1)

FUNCIN
Reconocimiento del origen de replicacin DNA helicasa que desenrolla la doble hlice parental Sintetiza RNA primer, actividad primasa Mantienen las cadenas de DNA separadas Relajacin de superenrollamientos, decatenacin

PROCARIOTAS
Dna A

EUCARIOTAS
Protenas ORC (origin recognition complex) Protena MCM 2 (minichromosome maintenance) Subunidad primasa de DNA pol /primasa RPA (replication protein A) Topoisomerasa I y II

Protena dna B Dna G

Protenas de unin a cadenas simples - SSB (single- strand binding)

Topoisomerasa I, II (gyrasa) y IV

Sintetiza cadena lder y fragmentos de okasaki

Subunidad de la holoenzima DNA pol III

DNA polimerasa y DNA polimerasa

PROTENAS REQUERIDAS EN LA REPLICACION (2)

FUNCIN PROCARIOTAS EUCARIOTAS
PCNA (proliferating cell nuclear antigen), trabaja con DNA pol o
RFC Parte de subunidad de la DNA pol y RNA asa H1, Fen 1 (flap endonuclease) DNA polimerasa DNA ligasa

Protena de enganche Anillo , trabaja con deslizante (sliding clamp), que DNA Pol III une polimerasa al DNA molde

Protena de enganche de carga (clamp loader)

Actividad exonucleasa de lectura de prueba (proofreading) Remocin de RNA primer Reemplazo de RNA con DNA Unin de fragmentos

Complejo Subunidad de la DNA pol II RNAasa H, DNA Pol I DNA polimerasa I DNA ligasa

Helicasa
Helicasa

Primasa Primosoma

Primasa

Protenas SSB

Topoisomerase I

Figure 5-22 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Topoisomerase II (DNA Gyrase)

Antibiticos: cido nalidxico, norfloxacina, novabiocina y ciprofloxacina inhiben la DNA gyrasa.

DNA Polimerasas
Muchas DNA polimerasas tienen una larga hendidura compuestra de tres dominios que asemejan a una mano. DNA corre a travs de la palma en una hendidura ceada por los dedos y el pulgar.

La nueva cadena sintetizada es replicada en direccin 5 - 3

La incorporacin de desoxiribonucletidos trifosfato o dNTPs (p.e. dATP, dCTP, dTTP o dGTP depende del apareamiento de bases con la cadena molde)
Figure 5-3 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Hay dos propiedades importantes de las DNA polimerasas: Fidelidad y procesividad

La FIDELIDAD se refiere al seguimiento exacto

de la secuencia que sirve como molde. En promedio, las DNA pol cometen 1 error/109 nts
La actividad exonucleasa 3 5 de la DNA pol contribuye a la fidelidad pues tiene actividad correctora (proofreading). La PROCESIVIDAD se refiere a la capacidad de una DNA pol de elongar una cadena de DNA por muchos nucletidos antes de disociarse del complejo que forma con el sustrato. La DNA pol I tiene una procesividad baja. La DNA pol III tiene una procesividad alta.

1. INICIACIN 1. Replication begins at origin (oriC) 2. ELONGACIN 2. Replication bubble forms. Replication forks progress in opposite directions.

ETAPAS DE LA REPLICACION

4. Second strand at each fork is synthesized discontinuously in Okazaki fragments 5 to 3 (lagging strand).

3. One strand at each fork is synthesized continuously 5 to 3 (Leading strand).

3. TERMINACIN 5. Replication ends at terminus at termination (ter) sites.

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ORIGEN DE REPLICACIN EN E. coli

Replicacin empieza en oriC

La protena DnaA reconoce los 4 segmentos de 9bp = caja de DnaA Participacin de las protenas HU (histone like) para permitir que el DNA se doble sobre s mismo

 El cargador de helicasa (DnaC) coloca la helicasa (DnaB) en cada extremo del origen
Dna C Helicasa

Sntesis de DNA Cromosomal es catalizada por DNA polimerasa III (DNApol III)

La DNApol III requiere la ayuda de una abrazadera deslizante a fin de unirse al DNA y empezar la replicacin La abrazadera deslizante sin embargo requiere un complejo de protenas (p.e. el complejo de enganche de carga) ms la energa liberada de la hidrlisis del ATP para ser cargada al DNA

Figure 5-18c Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Direccin de nueva sntesis Nueva cadena sintetizada

DNA polimerasa III

RNA primer

Molde de cadena lder

Tau

DNA helicasa

DNA girasa

DNA parental DNA polimerasa III DNA primasa RNA primer

Nueva cadena sintetizada Direccin de nueva sntesis

Molde de cadena retardada

Protenas de unin a cadena simple

2012 Pearson Education, Inc.

RNasa H Remueve los cebadores

Ambas horquillas se mueven al sitio ter

El Movimiento es simultneo hasta encontrarse en el sitio de trmino El Replisoma se desemsambla en el sitio ter

Replisoma Eucaritico

Diferencias en Replicacin en Procariotas y Eucariotas

PROCARIOTAS
No protenas unidas al DNA Un origen de replicacin Cinco polimerasas (I, II, III, I y V) Funcin de polimerasas. I. involucrada en sntesis, proofreading, reparacin y remocin de primers II: es una enzima de reparacin III: es la principal enzima polimerizante IV y V: son enzimas de reparacin bajo condiciones inusuales Polimerasas son tambin exonucleasas

EUCARIOTAS
Protenas histonas unidas al DNA Varios orgenes de replicacin Cinco polimerasas (, , , , y ) Funcin de polimerasas: : una enzima polimerizante : es una enzima de reparacin : principal enzima polimerizante : enzima polimerizante : sntesis de DNA mitocondrial No todas tienen actividad exonucleasa

Fragmentos de Okasaki de 1000 a 2000 Fragmentos de Okasaki de 150 a 200 nucletidos de longitud nucletidos de longitud La velocidad es de ~1000 pb/seg El tiempo de replicacin es ~42 min. La velocidad es de ~100 pb/seg El tiempo de replicacin es ~8 horas.