UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL II

PARASITOLOGA PRCTICA NO. 4: HEMOPARSITOS

GRUPO:2752
EQUIPO: 4 VILA MNICA MONSERRAT ROMERO MARTNEZ MARCO ANTONIO SANTANA ESLAVA YATZIRI SOTO ALCANTAR MARA DE LOS NGELES
HERNNDEZ

OBJETIVO
Aprender a realizar tcnicas hematolgicas para determinar parsitos presentes en la sangre. Adquirir el conocimiento de las tcnicas que se utilizan actualmente para determinar parsitos en sangre. Familiarizarse con el manejo de muestras sanguneas para su anlisis posterior.

QU ES UN HEMOPARSITO?

En general, este trmino incluye todos aquellos organismos

(parsitos, protozoos, helmintos) que viven en la sangre de su

husped.

Entre los que frecuentemente encontramos: Trypanosoma

cruzi,

Plasmodium

sp,

Microfilarias.

HEMOPARSITOS EN MXICO
PARSITOS AGENTE FORMAS INFECTIVAS PARA EL HOMBRE
Esporozoitos

MECANISMO DE INFECCIN

Malaria

Plasmodium sp

Picadura del mosquito Anopheles hembra/ transmisin congnita Picadura de flebtomos Deyecciones de Triatminos/transmisin congnita

Leishmaniosis Enfermedad de chagas

Leishmania sp Trypanosoma cruzi

Promastigotes Tripomastigotes

Filariosis

Wuchereria bancrofti/ Brugia malayi

Onchocerca volvulus

Larva filariforme metacclica

Microfiliarias

Picadura de dpteros hematfagos

Picadura de simulido

Oncocercosis

PALUDISMO

Transmitido mosquito hembra definitivo).

por

el

Anopheles (Husped

Se

caracteriza

por

episodios especie Plasmodium.

febriles de

tpicos de acuerdo a la

Plasmodium que parasitan al humano.

P. malariae

P. falciparum

P. vivax

P. ovale

LEISHMANIASIS
Es transmitida por la picadura de las moscas

de la familia Psychodidae y subfamilia Phlebotominae, (Huspedes intermediarios) afecta a piel, mucosa y vsceras.
Algunos agentes causantes de leishmaniasis

son:
Leishmania mexicana (dao cutneo) Leishmania

brasiliensis

(dao

muco-

cutneo)

TRIPANOSOMIASIS
Enfermedad de hombres y animales

principalmente hay 2 tipos:

Mal de chagas:

Es causada por Trypanosoma cruzi, se transmite por Triatoma infestans

(Husped Intermediario). Se presenta en tres fases, aguda, intermedia y crnica donde resulta mortal.
Enfermedad del sueo (frica):

Es causada por Trypanosoma brucei, se transmite por medio del vector Glossina sp.

MICROFILARIAS

Nematodos largos delgados, transmitidas por artrpodos. Se alojan en sistema linftico y tejido subcutneo y conectivo profundo. Hombre: Wuchereria bancrofti Brugia malayi

Brugia malayi

Wuchereria bancrofti

TCNICAS HEMATOLGICAS

FUNDAMENTO

Varias especies parasitarias pueden ser halladas en la sangre de los seres humanos en algn estadio de sus ciclos vitales.

Casi en la totalidad de los casos, el parsito se identifica sobre la base de sus caractersticas morfolgicas si ha sido preparado de manera adecuada para su estudio microscpico.

TOMA DE MUESTRA Y SITIO DE

PUNCIN

Los frotis deben prepararse con muestra de sangre anticoagulada lo antes posible despus de la recoleccin. La exposicin prolongada al anticoagulante puede distorsionar la morfologa de los ezquizontes maduro y de gametocitos. Es preferible la recoleccin de muestra de sangre capilar.

QU ES UN FROTIS?

Es la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjetos, al cual se le aplica una tincin para ser analizado posteriormente.

En la mayora de los laboratorios los colorantes ms empleados para la tincin hematolgica se basan en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la

mezcla de eosina (cido) y azul de metileno (bsico).

GOTA FINA

Se forma con sangre esparcida, una capa de tal manera que el espesor disminuya hacia el borde, donde los eritrocitos no se superponen . Su utilidad es principalmente en la identificacin definitiva de especies de plasmodios y otros parsitos intraeritrocitos y para estudiar detalles de los hemates y de los parsitos en la sangre. Al prepararlas hay que tener cuidado que la cola este esparcida en forma regular, no presente espacios vacios, rayas u otro artefacto de tcnica.

GOTA GRUESA

Consta de una capa gruesa de eritrocitos lisados. Estos frotis contienen una concentracin 30X de elementos parasitarios cuando se compara con una rea igual de una de gota fina.

Es til para el diagnostico rpido de las parasitemias, pero no sirve para estudios anatmicos finos.

Por lo tanto, tiene una utilidad particular para la detencin de

los parsitos del paludismo.

La sangre debe obtenerse por puncin(por lo general la parte lateral de la falange terminal de un dedo, en los lactantes, el

lobulo de la oreja o el taln) dejar que fluya libremente.

Se limpia con alcohol al 70% y se seca con gasa limpia.

XENODIAGNSTICO

Se emplea fundamentalmente para diagnosticar la enfermedad de chagas. El xenodiagnstico, uno de los mtodos que se aplica durante la etapa crnica de la enfermedad y cuyo resultado final en algunas ocasiones se consigue despus de los 90 das.

Consiste en colocar en la espalda o en el antebrazo del paciente al transmisor sano. Al alimentarse estos de la sangre del paciente se llevan los tripanosomas que se multiplicarn activamente en el aparato digestivo del insecto. De esta manera, las posibilidades de encontrar los hemoflagelados aumenta de forma importante.

TINCIN DE WRIGHT Y DE GIEMSA

TINCIN DE WRIGTH

Las estructuras con carcter cido tales como los cidos nucleicos

o las protenas cidas son afines por compuestos bsicos como lo

es el azul de metileno. Por el contrario las estructuras de carcter bsico tales como la hemoglobina y otras protenas bsicas son

afines a la eosina por lo que a la vista estas estructuras tendrn un

color rojo-rosado.

TINCIN DE GIEMSA

Es una modificacin de la coloracin de Romanowsky, resulta de la combinacin de eosina y azul de metileno en una misma solucin. Es la tincin ms confiable y preferida para identificar parsitos en la sangre (en lo frotis de gota fina o gruesa), como en el caso de la malaria (Plasmodium sp) y la tripanosomiasis (Trypanosoma cruzi).

Contiene: Polvo de Giemsa (es una mezcla de azul de metileno, eosina y varios azures) Glicerina Fosfato de sodio dibsico anhidro Fosfato de sodio monobsico

Fundamento: se basa en la distinta afinidad que demuestran las clulas y sus componentes a los distintos colorantes incluidos en el colorante de Giemsa.

Resultados: -Los ncleos se tien de violeta -El citoplasma se tie de color rosa

TCNICA DE ELISA

TCNICA DE ELISA
(ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY)
La tcnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimtico ampliamente

empleado en el rea mdica para la

cuantificacin especialmente de de molculas, aquellas que

experimentan cambios en diferentes estados infecciones como por pueden bacterias, ser virus,

hongos o parsitos o fases activas de enfermedades autoinmunes.

FUNDAMENTO DE LA TCNICA DE ELISA

Se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con
una enzima.

Al estar uno de los componentes marcado con una enzima e

insolubilizado sobre un soporte, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especifico que cuando acta la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro

TIPOS DE ELISA
Anticuerpos marcados: ELISA Directo o ELISA sndwich.

Antgeno marcado:

ELISA Indirecto
ELISA competitivo

ELISA "SANDWICH DIRECTO

Un anticuerpo primario (monoclonal o policlonal) se une a las paredes de la fase solida. Se aade la muestra que se sospecha que contienen el antgeno, hay una reaccin antgeno-anticuerpo. A continuacin, un anticuerpo secundario ligado a una enzima que es capaz de reaccionar con el antgeno se aade. Cuando un sustrato incoloro se aade, un color se desarrolla, indica la presencia de antgeno

1) 2) 3) 4)

Un anticuerpo monoclonal o policlonal anti antgeno suele estar ya unido a la placa. Se incuba con la muestra problema. Se aade el conjugado. Por ltimo el sustrato.

Todos los pasos van precedidos de incubaciones y lavados.

ELISA INDIRECTO
1) El 2 se pega a la placa 2) Se aade el suero problema. 3) Posteriormente, el conjugado. 4) Por ltimo, el sustrato
Todos los pasos van precedidos de incubaciones y lavados.

LOS ELEMENTOS QUE SE USAN EN LA TCNICA DE ELISA SON:

1. Fase solida.
2. Etapas de lavado. 3. Muestra a ensayar. 4. Antgeno. 5. Conjugado (mtodos de

Nakane o el de Avrameas). 6. Sustrato y cromgeno.

MTODO

Utilizar las laminillas obtenidas en la prctica nmero tres y teirlas con las tcnicas de Giemsa y/o Wright. *Los tiempo sealados para realizar las tinciones sern modificados de acuerdo a la madurez de los colorantes.
TINCIN DE WRIGHT
No es necesario fijar el frotis Colocar el portaobjetos en la canastilla para tincin y sumrjir en el recipiente que contiene el colorante de Wright sumergiendo por completo la canastilla.

Deje secar y leer al microscopio, en seco dbil 10X, seco fuerte 40X y a inmersin 100X.

Despus de cinco minutos enjuagar con agua de la llave.

Despus de cinco minutos escurrir la canastilla para eliminar los restos decolorante y sumerjir la canastilla en solucin amortiguador (amortiguador de fosfatos o agua destilada).

TINCIN DE GIEMSA

En un frotis delgado es necesaria la fijacin con metanol.

Colocar los portaobjetos en canastillas para tincin y sumrjir en un recipiente con metanol durante veinte minutos.

Sacar y dejar secar la preparacin y lavar con solucin amortiguador (unas gotas del colorante en agua destilada) por 5 minutos.

Colocar la canastilla en el recipiente que contiene colorante de giemsa durante 10 minutos.

Dejar secar el frotis al aire.

*Es

Si se llega a sobre teir repetir el lavado

Secar y leer al microscopio a seco dbil 10X, seco fuerte 40X e inmersin 100X.

importante marcar los portaobjetos antes de realizar las tinciones, para identificar las diferentes preparaciones. Se recomienda el uso de lpiz con punta de diamante. *Para las improntas realizadas repita el proceso de esta tincin.

REFERENCIAS

Ash L, Orihel T. Atlas de parasitologa humana. 5 ed. Buenos Aires:

Mdica Panamericana, 2011.

Becerril M, Romero R. Parasitologa mdica de las molculas a la enfermedad. Mxico: McGraw-Hill Interamericana, 2007.

Siachoque H. Inmunologa diagnstico e interpretacin de las

pruebas de laboratorio. Bogot: Centro Editorial Universidad del Rosario, 2006.