Capacitacin No. 1 Lic.

Marvin Zacarias Planta de Betalactmicos Abril 2013

Hay dos teoras para explicar el proceso cromatogrfico: 1. Teora clsica o esttica 2. Teora cintica o dinmica

Teora clsica o esttica: propuesta en 1941, en la cual se asimila la columna cromatogrfica con
una columna de destilacin.

Teora cintica o dinmica: propuesta en 1956 por Van Deemter, que considera el proceso
dinmico de la separcin.

Teora clsica o esttica: se considera un sistema esttico en equilibrio, en el cual el soluto recorre la columna mediante una serie de equilibrios, cada uno de los cuales se alcanza, en toda su extensin, en un segmento o porcin de la columna, llamado plato terico. se supone que la columna cromatogrfica est dividida en una serie de segmentos o platos tericos, donde se producen un equilibrio de distribucin del soluto entre la fase mvil y la estacionaria. Af.mvil Af. esta

Dado que la separacin se produce como consecuencia de estas transferencias, la eficacia de la columna depender del nmero de equilibrios que tiene lugar en el interior de la columna durante la elucin, es decir, depende del nmero de platos tericos que tenga la columna, N. Cuanto ms estrecho sea el plato terico, mayor nmero de ellos habr para una longitud L de columna, por tanto, la eficacia de la columna ser inversamente proporcional a la altura equivalente del plato terico: AEPT= H=L/N

TEORA CINTICA O DINMICA. La eficacia de la columna para separar los componentes de la muestra vendr dada por dos factores: 1. La diferencia de la velocidad de migracin de los solutos de la mezcla, que origina la separacin fsica entre los picos

2. La velocidad que tarda en alcanzarse el equilibrio en cada plato terico que traer consigo un ensanchamiento del pico cromatiogrfico.

Eficiencia:

Se define ste como la seccin terico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de particin durante el flujo de fase mvil. Cuanto mayor sea el nmero de platos terico (N) mayor ser la eficiencia de la columna. El nmero de platos tericos mide la capacidad de la columna para separar los componentes, no la retencin de los mismos. La eficiencia o el nmero de platos se puede observa directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos.

Donde N es el nmero de platos tericos, L es la longitud de la columna, H es la altura de cada plato, t'R es el tiempo corregido de retencin de un componente y ai es la anchura del pico cromatogrfico. Y:

Si H tiene un valor pequeo, la distancia entre platos es menor y por tanto la eficiencia ser mayor. Por el contrario, si H es grande la columna es poco eficiente para separar ese componente ya que sus molculas estarn muy difundidas. La velocidad de la fase mvil influye en la eficiencia del sistema cromatogrfico, ya que si la velocidad es pequea los componentes tendrn ms tiempo parta que se pueda realizar el equilibrio de reparto, por lo que el nmero de platos ser mayor y la altura de los platos menor.

El numero de platos tericos de una columna , depende lgicamente de su longitud, por lo que para comparar la eficacia de columnas de diferente longitud, se introduce otro termino, denominado altura equivalente de plato un terico, que relaciona la eficacia de la columna con su longitud y se define como el cociente entre la longitud de la columna y su numero de platos tericos: H = L/N

Condiciones Cromatogrficas
Columna de cualquier longitud Columna de cualquier tamao de partcula Longitud de onda 254 nm Flujo: 1mL/min Volumen de inyeccin: 10 L Fase mvil: Acetonitrilo: agua (75:25)