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Mtodos Instrumentais de Anlise


Espectroscopia de Absoro Molecular UV-Vis

Prof. MSc. Caryna Janurio Correr

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Anlise quantitativa
Mtodos Qumicos (Clssicos):
(Volumetria) (Gravimetria)

Mtodos Instrumentais

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Mtodos Instrumentais
Espectrais Electroanalticos
Separativos

Relao entre o sinal analtico e a concentrao do analito

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Mtodos Instrumentais
Espectrais
Mede-se a radiao electromagntica

Electroanalticos
Envolve um sinal elctrico

Separativos
Envolve uma separao

Absorvida Emitida

Potencial Condutncia

Em fase gasosa Em fase lquida Podem ser detectados pelos mtodos anteriores

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Mtodos Instrumentais
Espectrais Electroanalticos Potenciometria Condutimetria Separativos GC HPLC

EAM (UV/Vis)
Turbidimetria EAA

EEA (FEC)

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Espectrofotometria de Absoro Molecular UV/Vis

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Deteco por EAM EAM UV/Vis Absoro da radiao eletromagntica por espcies moleculares presentes na amostra.
Interao da matria com a radiao eletromagntica

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RADIAO ELETROMAGNTICA
Natureza ondulatria Natureza corpuscular

ONDA

Interao

entre um campo

eltrico e um campo
magntico, perpendiculares entre si.

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Caractersticas de uma onda


1 nm = 10-9 m ou 1 = 10-10 m Perodo (p) = tempo necessrio para completar um ciclo segundo Freqncia () ciclos/s ou Hertz = c/ onde c a velocidade da luz no vcuo = 3.108 m/s Energia (E) E = h. E = h.c/ onde h a constante de Planck = 6,62 x 10-34 J.s Nmero de onda: = 1/. Mede-se em cm-1. Este smbolo chamado ni barrado.
Max Planck

Comprimento de onda () nanmetro

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Parmetros ondulatrios
E = h. = h.c/
perodo () Amplitude (A)
tempo espao

comprimento de onda ()

Comprimento

de

onda

( )

distncia

entre

dois

pontos

consecutivos na mesma fase de vibrao; expresso em metros (m)

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O ESPECTRO ELETROMAGNTICO

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Fundamentos da Espectrofotometria
Absoro de radiao eletromagntica

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Porque ocorre o fenmeno da absoro?


Molculas que apresentam eltrons que podem ser promovidos a nveis de energia mais elevados mediante a absoro de energia
TRANSIES ELETRNICAS

Nveis discretos de energia so absorvidos devido vibraes e rotaes das molculas


ROTACIONAL E VIBRACIONAL

Por este motivo no se observa uma linha de absoro ntida, mas sim uma banda de absoro
ESPECTRO UV-VISVEL

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Espectros de absoro
Riscas Abs. Atmica Bandas Abs. Molecular
(n limitado de frequncias absorvidas)
Energia

(maior n de estados de energia)

E = h.
E0

E1

tomo
Absorvncia Absorvncia

Molcula
Absorvncia (nm)

(nm)

(nm)

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O que faz com que alguns raios interajam com a matria e outros passem atravs da mesma?
Dois requerimentos devem ser observados para que uma determinada radiao possa ser absorvida por uma molcula: 1. A radiao incidente deve ter o mesmo valor de freqncia que a freqncia rotacional, vibracional, eletrnica ou nuclear existente na molcula; 2. A molcula deve ter um dipolo permanente ou a radiao que se aproxima gera um dipolo induzido.

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INTERAO ENTRE A RADIAO E A MATRIA


RADIAO Raios csmicos Raios Gama Raios X < 1 pm 1 100 pm 100 pm 10 nm INTERAO COM A MATRIA Transies nucleares Transies nucleares Eltrons das camadas internas

UV vcuo
UV Visvel IR prximo IR mdio IR distante Micro-ondas Ressonncia de spin eletrnico Ressonncia magntica nuclear

10 nm 200 nm
200 nm 400 nm 400 nm 700 nm 700 nm 2 m 2 m 25 m 25 m 500 m 500 m 3 cm 3 cm 5 m 5 m 30 m

Ionizao de tomos e molculas


Transio dos eltrons de valncia Transio dos eltrons de valncia Harmnicos Vibraes moleculares Rotaes moleculares Rotao de grupos especficos Orientao do spin eletrnico Orientao do spin nuclear

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Aspectos quantitativos e terminologia


I0 I

I0 Radiao incidente I Radiao emergente (transmitida)

A radiao emergente sempre igual ou menor que a radiao incidente

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ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO UV-VIS


ABSORO DE RADIAO UV-VIS TRANSIES ELETRNICAS

Aumentando...

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O que cada smbolo? Io = Intensidade do feixe incidente; Ir = Intensidade do feixe refletido, resultado das diferenas do ndice de refrao entre a face externa da cubeta e o ambiente e entre a soluo e a face interna da cubeta; Id = Intensidade do feixe espalhado, resultado de um meio no homogneo (suspenso) e/ou de flutuaes trmicas; Ia = Intensidade do feixe absorvido pelo meio; I = Intensidade do feixe transmitido.

Io = Ir + Id + Ia + I

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Na prtica, para minimizar: Erros derivados da radiao espalhada utiliza-se um branco (tubo B). Este branco contm todos os reagentes exceto a substncia a ser quantificada e as solues devem ser lmpidas e transparentes. Erros derivados da radiao refletida pelas paredes da cubeta para uma mesma determinao, utilizar cubetas do mesmo fabricante.

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APLICAES ANALTICAS DA ABSORO DE RADIAO ELETROMAGNTICA PELA MATRIA

Qualitativa

Quantitativa

Obter o espectro de absoro para identificar a substncia.

Determinar a concentrao de uma substncia em soluo.

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LEIS FUNDAMENTAIS DA ESPECTROFOTOMETRIA


Quando uma onda eletromagntica de definido incide sobre uma amostra, a frao de radiao absorvida uma funo da concentrao da amostra (Beer) e da espessura da cubeta (Lambert) (caminho ptico).

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DOIS CONCEITOS IMPORTANTES!!! Transmitncia (T): define-se como a relao entre a intensidade da radiao no absorvida (I) e a intensidade da radiao incidente (Io).

T = I/Io ou T(%) = I/Io x 100


Absorvncia (A): o logaritmo decimal da inversa da transmitncia. A = log 1/T = - log T = - log I/Io ou T = 10-A

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Transmitncia x Absorvncia
Transmitncia % de Transmitncia Absorvncia
T = I/I0 %T = (I/I0)*100 A = log (I0/I)
I0 Radiao incidente I Radiao emergente

A = - log T; T =

10-A

A = log (100/%T) = 2 log (%T)

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LAMBERT ou BEER?
LAMBERT: relacionou a intensidade da radiao absorvida com a largura o caminho ptico. BEER: relacionou a intensidade da radiao absorvida com a concentrao da soluo.

LEI de LAMBERT e BEER ou LEI de BEER

A = .b.C
Forma linear

T = 10-.b.C
Forma exponencial

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A = absorvncia (adimensional) T = transmitncia (adimensional) = absortividade molar (L.mol-1.cm-1). definida como a absorbncia de uma soluo de concentrao 1 mol/ litro numa cubeta de 1 cm de largura. a caracterstica de uma substncia que indica qual a quantidade de luz que absorvida num determinado comprimento de onda. b = caminho ptico (cm)

C = concentrao da soluo (mol/L)

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Forma linear

Forma exponencial

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Desvios Lei de Beer


A lei de Beer refere o comportamento ideal
de uma soluo quando atravessada por um feixe de energia radiante, o que na prtica impossvel fixar. Desvios Reais, Qumicos ou Fsicos

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Desvios Lei de Beer


Desvios Reais desvios linearidade resultantes do uso de: solues concentradas do analito > 0,01 mol/L interao entre as molculas do soluto suas propriedades sofrem modificaes , inclusive o coeficiente de absortividade molar; Ideal: trabalhar dentro da faixa 0,3 1,5 de absorbncia, ou seja, concentrao 0,01 0,001 mol/L. Usar solues padres e curva de calibrao.

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Desvios Lei de Beer


Desvios Qumicos a causa encontra-se no prprio sistema a analisar (a espcie absorvente sofre associao, dissociao ou reao com outras espcies presentes em soluo gerando produtos que absorvem de uma forma diferente do analito)
A ocorrncia dos desvios qumicos controlada fixando o pH, a fora inica, a concentrao de outras espcies presentes Para saber o certo para trabalhar, se fazem vrios espectros deste equilbrio a diferentes pH e se determina o ponto isosbstico.

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Ponto isosbstico: o ponto onde todos os espectros de um equilbrio qumico se cruzam. Neste ponto, as substncias participantes da reao tm a mesma absorbncia, independentemente do valor de pH.

Ponto isosbstico

Fonte: http://www.scielo.br/img/revistas/qn/v29n3/29293f3.gif

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Desvios Lei de Beer


Desvios Fsicos ou Instrumentais a causa inerente aos instrumentos com os quais se opera: Uso de radiao no monocromtica; Reflexo da radiao incidente; Deficiente estado de conservao das faces de incidncia das clulas que suportam a amostra; No paralelismo da radiao incidente.

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Como escolher o adequado para realizar uma curva de calibrao?

Fazer o espectro da substncia e estabelecer o onde a absoro mxima. Por qu?

Nos mximos e nos mnimos, a derivada da absorvncia em funo de igual a zero.

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Desvios Lei de Beer


3
Absorvncia

1 2

Concentrao

1 - Verifica-se a lei de Beer 2 - Desvio negativo 3 - Desvio positivo

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Anlise Quantitativa
A metodologia deve obedecer lei de Beer na mais ampla possvel gama de concentraes Quando a espcie a determinar

pouco ou nada absorvente deve ser


transformada
Reaco de desenvolvimento de cor (derivatizao) Ex. crmio, ferro, etc

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Mtodos de Calibrao em Anlise Instrumental


Resposta do Mtodo Analtico Avaliao com quantidades conhecidas do analito

PADRES Como trabalhar com os padres? 2. Adio-padro


1. Curva de calibrao (padro externo)

3. Padres interno (mtodo bsoluto)

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1. Curva de calibrao:
Grfico que mostra a resposta do mtodo analtico em funo de quantidades conhecidas do analito.
Solues-padro: contm concentraes conhecidas de analito.

Solues em branco ou branco: contm todos os reagentes e solventes usados na anlise, mas nenhum analito.

O branco mede a resposta do mtodo analtico para impurezas, espcies interferentes ou cor dos reagentes.

Com ele se calibra o zero do equipamento.

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Mtodo da curva de Calibrao (padro externo)

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preparao de padres de concentraes C1, C2, C3, ... Cn, a que correspondem valores de

absorvncia medidos A1, A2, A3, ... An


An A3 Ax
A2 A1 C1 C2 Cx C3 Cn
ab

referente amostra

A = .b.C

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A curva de calibrao construda utilizando a planilha Excel. O programa fornece a equao da reta e o coeficiente de regresso linear (R2).
Este coeficiente indica a relao entre os valores experimentais (y) e os calculados atravs da equao da reta ( = valor estimado). Quanto mais prximo de 1 (um) melhor a correlao entre estes valores.

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2. Adio-padro:
Quantidades conhecidas do analito so adicionadas amostra desconhecida. Este mtodo apropriado quando o sinal analtico afetado pela matriz EFEITO MATRIZ.

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Mtodo da Adio de padro


Amostra problema

Cx

An A3 A2 A1

Amostra problema acrescida de uma concentrao C1, C2,...Cn

Cx
Cx+C1 Cx+C2 Cx+C3 Cx+Cn

C1 C2 C3 Cn + + +

Cx Cx Cx Cx

Pode-se medir o valor de Ax correspondente a Cx

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3. Padro interno uma quantidade conhecida de um composto S, diferente do analito X, que adicionada amostra desconhecida. O sinal do analito comparada com o sinal do padro interno para determinar a quantidade de analito presente.

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O fator F calculado utilizando a frmula anterior a partir


de concentraes conhecidas de X (analito) e S (padro interno). Usado quando a resposta do instrumento varia

ligeiramente a cada anlise por razes difceis de controlar. Exemplos: Vazes de gs ou lquido em GC ou HPLC;

Flutuaes da chama em Absoro Atmica.

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ESCOLHA DO SOLVENTE PARA ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS

Bom dissolvente para a substncia a analisar. No deve interagir com o soluto. No absorver radiao na faixa de em que ser realizada a anlise. Compostos inorgnicos: usa-se gua. Compostos orgnicos: Solventes orgnicos. ATENO!!! Solventes orgnicos podem absorver no UV.

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Todo reagente a ser usado em espectrofotometria identificado com sendo de qualidade espectrofotomtrica. Impurezas: Quando se suspeita da presena de impurezas deve-se: 1. Realizar o espectro do solvente 2. Se no absorver radiao na faixa de de interesse, pode ser utilizado. 3. Caso contrrio, purific-lo com mtodo adequado.

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CRITRIOS PARA OPTAR POR UMA ANLISE ESPECTROFOTOMTRICA


No visvel: a amostra deve ser colorida Proporcionalidade entre concentrao e cor Estabilidade da cor Reprodutibilidade Limpidez da soluo Sensibilidade elevada

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Instrumentos usados em espectroscopia de UV/VIS

Fotmetros
O usado nas anlises selecionado de modo discreto ou descontnuo;
A seleo do usado efetuada por filtros que limitam a radiao incidente a uma determinada banda de comprimentos de onda.

Espectrofotometros
O usado nas anlises selecionado em gamas limitadas, de forma contnua e varivel em toda a zona do espectro;
A seleco do usado efetuado por um monocromador.

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Espectrofotometros de UV/VIS
Espectrofotometros: incluem monocromadores que permitem fazer incidir radiao com uma banda de comprimentos de onda muito estreita

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Componentes de um espectrofotmetro
I0
Fonte de radiao

DET

AMP

Detector
b Monocromador Compartimento de clulas 0.841 Registador

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1. Fontes de radiao eletromagntica


o dispositivo emissor da radiao; Deve produzir um feixe de radiao com intensidade suficiente para proporcionar a medida; Pode ter mais que uma fonte emissora; O feixe deve ser estvel.

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Fontes de radiao electromagntica


Zona do visvel: lmpada de tungstnio de filamento incandescente, atinge 3000K e abrange a faixa de 320 a 2500nm. Tempo de vida: 10.000h

Zona ultra-violeta: lmpada de descarga eltrica de hidrognio ou de deutrio (D2). Uma descarga eltrica provoca dissociao de deutrio e a emisso de radiao UV de 200 a 400nm. Tempo de vida: 1.000h

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2. Seletores de comprimento de onda


Dispersam a radiao nos que as compem e selecionam o desejado. So constitudos por:
Fendas de entrada e sada da REM ajustveis ( reduzem e fixam as dimenses do feixe de radiao) Lentes ou espelhos colimadores (focam o feixe de radiao) Unidades de disperso da REM

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Unidade de disperso
Componente mais importante do monocromador que separa a radiao policromtica nos diversos comprimentos de onda

Espelhos colimadores

Prismas
Redes de difrao
1 2

Prisma

Rede de difraco Fenda de Fenda de entrada sada

Rede de difraco

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3. Compartimento de clulas
Deve garantir um elevado estanquicidade luz ambiente; grau de

Pode ter mais que um tipo de suporte de clulas.


Podem ser: Vidro uso em Visvel Quartzo Uso em UV ou com materiais corrosivos; Poliestireno: descartvel; 340nm < < 800nm; Polimetacrilato: descartvel; 280nm < < 800nm

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4. Sistema de deteco
Detector Amplificador Medidor do sinal elctrico amplificado

O sinal eltrico deve ser uma funo linear da intensidade da radiao

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Detectores:
Sistemas eletrnicos que permitem detectar a luz transmitida atravs do sistema e transform-la em um sinal capaz de ser medido (eltrico).

a) Clula fotomultiplicadora: dispositivo de grande sensibilidade, onde os eltrons emitidos pela superfcie fotossensvel atingem uma segunda superfcie (dinodo) que positiva em relao anterior, arrancando mais eltrons. Estes, por sua vez, atingem outro dinodo repetindo a operao at atingir uma coleta de ~ 106 eltrons por cada fton que atingiu a superfcie.

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b) Conjunto de fotodiodos ou dispositivo sensvel carga:


um detector extremamente sensvel que armazena cargas geradas por ftons em um arranjo bidimensional. constitudo de Si dopado tipo p em um substrato de Si dopado tipo n, tudo recoberto por uma camada de SiO2 (1). uma situao eletrnica particular.
A situao eletrnica perturbada por exposio luz (2). Gerao de corrente eltrica proporcional quantidade de luz.
Os eltrons so armazenados abaixo do eletrodo positivo e deslocado para um registrador (2).

(1)

(2)

Fotografias de arranjos de diodo com 1024 elementos (detectores de diodo): a. vista de topo; b. vista de perfil.

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Tipos de espectrofotometros
Feixe simples - sempre que se varia o comprimento de onda, necessrio ajustar o zero de absorvncia, porque a sensibilidade do detector depende do comprimento de onda: anlise quantitativa (a um s ) Feixe duplo - o feixe de radiao dividido em dois feixes: um atravessa uma clula de referncia e o outro atravessa a clula contendo a amostra

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Feixe Simples

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Feixe Simples

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Modo de utilizao: 1 - Depois de ligar o equipamento, esperar cerca de hora, para garantir a estabilizao trmica dos componentes elctricos. 2 - Procede-se ao acerto do 0 de absorvncia ou 100%T colocando no trajecto ptico uma clula com o branco (soluo com composio semelhante da amostra em que est ausente a espcie a determinar) 3 - Procede-se leitura de solues de calibrao e amostras utilizando a mesma clula do branco

As clulas devem ser colocadas na mesma posio ou com a mesma face para a REM incidente.

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Duplo Feixe

Apresentam duas vantagens importantes: O sinal do branco e da amostra so comparados em simultneo, no sendo necessria a estabilizao trmica do equipamento Possibilitam o traado dos espectros de modo automtico: 1 - as duas clulas so preenchidas com o branco. O equipamento corrige todos os valores de absorvncia para 0. 2 - substitui-se a soluo do branco pela amostra e procede-se ao traado do espectro.

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Comparando os dois equipamentos:

Normal quality - Espectrofotometria.flv