UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

INTEGRANTES : 1) 2) 3) 4) Maguia Herrera , Luis Miguel Molina Apaico, Maritza Macavilca Prez, Angel Menacho Rondn, Elizabeth

INTRODUCCION
Plantas herbceas

Familia de las Monocotiledoneas

Existen en el mundo mas de 30mil especies

Existen especies en los trpicos con mas habitualidad. Otras viven en ambientes complejos (subterrneos o semiacuaticos ) Colorido. Forma y duracin de las flores. Pero presenta un problema

Estas representan un grupo de plantas ornamentales apreciadas por

Su reproduccin sexual es complicada

Gran ndice de esterilidad en algunos hbridos

Como consecuencia de lo anterior se desarrollaron una serie de mtodos

El principal es el uso de los biorreactores de inmersin temporal

Casos exitosos mediante el uso de Biorreactores de inmersin temporal

como Vitis vinifera (uva)

Daucus Ananas comos Musa spp. (banano y carota(zana us (pia) pltano) horia)

(Orchidaceae) orqudea olanum tuberosum (pa pa)

BIORREACTORES DE INMERSION TEMPORAL UNA FORMA DE DESARROLLO EN LA INGENERIA AGROINDUSTRIAL

Genera plantas con mejores condiciones nutraceuticas,organoleptica s y de forma .

Propone un mtodo eficiente para la obtencin de materia prima

Genera una fuente de rica de conocimientos biotecnolgicos

Tiempos de subcultivos menores

Plantas con mayores concentraciones de nutrientes y mejor apariencia (seleccin )

Aplicacin de diseos experimentales en diversas plantas oriundas

BIORREACTORES DE INMERSION TEMPORAL UNA FORMA DE DESARROLLO NACIONAL

Asegurar el origen de problemas especficos
Necesidad de productividad Sanidad, trazabilidad, sustentabilidad y generar valor agregado

NACION BIORREACTORES DE INMERSION TEMPORAL Calidad reflejada en la sanidad

Trazabilidad o mtodos de identificacin genticas

GARANTIA DE CONSERVACION DE ESPECIES

Productividad reflejada en el rendimiento de cultivos.

Con una produccin masiva se puede generar formas de crear valor agregado en: -Diseo o presentacin - Propiedades nutraceuticas ( general) -Propiedades fsico-qumicas

BIOSOSTENIBILIDAD

Las orqudeas son plantas herbceas perennes de la familia, clase (Monocotiledneas), ms de treinta mil especies crecimiento se produce a partir de una yema axilar simpodial en sentido horizontal dos tipos bsicos de crecimiento se produce a crecimiento: partir de una yema apical en monopodial sentido vertical, como es el caso de Phalaenopsis.

Phalaenopsis

plantas ornamentales ms apreciados forma y duracin de sus flores, sistema de reproduccin es difcil Dificultad de su multiplicacin vegetativa y reproduccin. altos ndices de esterilidad en algunos de sus hbridos Por ello se ha desarrollado varias formas de propagacin

clonal in vitro de Phalaenopsis

Por formacin de embriones somticos callos y la formacin de cuerpos similares a protocormos a partir

pices de vstagos, secciones de ejes florales y callos, para su posterior regeneracin en plntulas

Cuando la semilla germina produce a su alrededor una masa sin forma de clulas llamada protocormo

PROPAGACIN IN VITRO DE PHALAENOPSIS (ORCHIDACEAE) A PARTIR DE PROTOCORMOS, MEDIANTE EL SISTEMA DE INMERSIN TEMPORAL "RITA".

Los protocormos son cuerpos que se encuentran en un estadio morfolgico intermedio entre un embrin cigtico y un vstago
Cuando estos cuerpos se desarrollan sobre el tejido adulto, reciben el nombre de cuerpos protocrmicos o PLBs. multiplicados exitosamente utilizando un birreactor como sistema de inmersin temporal.

MATERIALES Y MTODOS
Material vegetal y medios de cultivo. Semillas de Phalaenopsis fueron sembradas en frascos de vidrio medio de cultivo solido. Protocormos de tres meses de edad obtenidos despus despus

Llevados al sistema de inmersin temporal

El sistema RITA consiste en un contenedor o frasco plstico de un litro de capacidad, dividido en dos compartimientos. En el compartimiento superior, cuya base es perforada, se coloca el material vegetal sobre una espuma de poliuretano, y en el compartimiento inferior, el medio de cultivo lquido. En el centro del compartimiento superior hay un tubo dispuesto longitudinalmente, a travs del cual se inyecta aire estril por medio de un compresor que est conectado al equipo por mangueras, con el fin de desplazar el medio lquido de la parte inferior a la superior. Este proceso es controlado por un temporizador para regular los tiempos y frecuencias de

Tasa de multiplicacin de los protocormos obtenida en cada uno de los contenedores RITA, en respuesta a las diferentes concentraciones de sacarosa y frecuencias de inmersin.

De acuerdo con los resultados obtenidos, el mejor tratamiento fue la concentracin de 15 g/L de sacarosa con un tiempo de inmersin de un minuto cada cuatro horas

DISCUSION
Concentracin de Sacarosa:

En el tratamiento realizado con medio de cultivo lquido sin sacarosa, se observaron bajas tasas de multiplicacin de los protocormos, a diferencia de los resultados obtenidos por Ishii et al. (1998), quienes indujeron la formacin de gran nmero de PLBs en medio sin sacarosa (a partir de callos previamente cultivados con sacarosa), y por Park et al. (2002), quienes por el contrario no obtuvieron proliferacin de PLBs, bajo estas condiciones. Esto puede deberse a que muy pocos cultivos in vitro son auttrofos e incluso cuando se tiene xito las velocidades de crecimiento son bajas. En los tratamientos realizados con 60 g/L de sacarosa se dieron respuestas similares a las obtenidas sin sacarosa, aunque mucho menores que los resultados publicados por Park et al. (2002), quienes obtuvieron mayores cantidades de PLBs por explante foliar. Quizs esto ltimo porque los protocormos, a diferencia de los PLBs, pueden ser ms susceptibles a la alta osmolaridad del medio que pudo haber causado un estrs osmtico, provocando un desequilibrio de la homeostasia celular y la consecuente disminucin de las tasas de proliferacin de los protocormos.

A pesar de que con 30 y 45 g/L de sacarosa se obtuvieron mejores respuestas proliferativas que las obtenidas con 0 y 60 g/L, la prueba de Newman-Keuls indic que no hubo diferencia significativa entre las mismas. Sin embargo, vale la pena anotar que, a diferencia de los resultados obtenidos con 45 g/L de sacarosa tanto en la presente investigacin como en la de Park et al. (2002), Park et al. (2000) reportaron una multiplicacin masiva de PLBs a esta concentracin, utilizando un biorreactor como sistema de inmersin temporal. No obstante, de acuerdo con la prueba de Newman-Keuls, solo con 15 g/L de sacarosa se obtuvo una diferencia significativa respecto a las dems, a diferencia de los resultados obtenidos por Park et al. (2002)

Es importante recordar que el resultado obtenido a esta concentracin se dio a una frecuencia de inmersin de cuatro horas. Cabe resaltar que en ensayos previos a esta investigacin no se obtuvieron tasas de multiplicacin de protocormos de Phalaenopsis, en medios de cultivo slido con 0, 15, 30, 45 y 60 g/L de sacarosa, bajo las mismas condiciones de cultivo in vitro.

TIEMPO Y FRECUENCIA DE INMERSIN

A pesar de que el tiempo y la frecuencia de inmersin reportados para la propagacin in vitro de Phalaenopsis fueron de cinco minutos y dos horas respectivamente (Park et al., 2000), Etienne y Berthouly (2002) mencionan que para evitar la vitrificacin de varias especies deben usarse tiempos cortos y frecuencias espaciadas de inmersin, ya que el contacto continuo de los tejidos con el medio de cultivo lquido es fuente de hiperhidratacin.

Interaccin entre la concentracin de sacarosa y las frecuencias de inmersin Probablemente con 15 g/L de sacarosa y una frecuencia de inmersin de ocho horas, se dio un lapso de tiempo entre inmersiones demasiado espaciado, que no permiti lograr un contacto efectivo entre el medio lquido y los protocormos, como para darse una respuesta proliferativa similar a la obtenida con la misma concentracin de sacarosa, pero a una frecuencia de inmersin de cuatro horas. Incluso a 15 g/L de sacarosa pero con la frecuencia de inmersin de ocho horas, se obtuvo una tasa media de multiplicacin an menor que con las obtenidas a 30 y 45 g/L de sacarosa (con ambas frecuencias de inmersin), pero de igual manera no representa una diferencia significativa comparada con las tasas obtenidas en dichos tratamientos.

VITRIFICACIN

A pesar de que el tiempo de inmersin fue de un minuto y que los explantos se dispusieron sobre una malla metlica en los RITA con el fin de evacuar el medio lquido en el menor tiempo posible despus de cada inmersin, se observ que en algunos casos, de manera aleatoria, no haba una buena evacuacin del medio de cultivo alrededor de los protocormos, con lo cual se alter el tiempo de inmersin real de algunos de ellos; razn por la cual se sugiere el uso de una malla con mayor tamao de orificios. Fenolizacin

Uno de los problemas que se presentan en el cultivo in vitro de Phalaenopsis es la liberacin de compuestos fenlicos por los tejidos y la consecuente oxidacin del medio de cultivo, aun con medios lquidos en los cuales es ms fcil y rpido diluir los productos txicos. Como consecuencia de lo anterior, se debieron realizar cambios de medio al mes de iniciados los tratamientos, pues estos compuestos impiden el crecimiento y desarrollo de los propios tejidos vegetales.

CONCLUSIONES

La multiplicacin masiva de protocormos de Phalaenopsis mediante el sistema de inmersin temporal "RITA" involucra una serie de factores que son claves para obtener xito en su propagacin, como la concentracin de sacarosa del medio de cultivo y la frecuencia de inmersin. La mejor respuesta proliferativa con 8,2 protocormos adventicios por protocormos por mes, se diera con 15 g/L de sacarosa y un tiempo de inmersin de un minuto cada cuatro horas. De esta manera se concluye que la interaccin entre estos factores es fundamental para lograr altas tasas de multiplicacin. Es igualmente importante tener en cuenta la porosidad del material sobre el cual se disponen los protocormos, con el fin de evitar la vitrificacin y Fenolizacin de los tejidos.