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PROJETO IC / PIBIC 2013 ALUNO: FELIPE EDUARDO CIAMPONI ORIENTADORA: DR KATLIN BRAUER MASSIRER
CONCEITOS IMPORTANTES...
NMD (Nonsense Mediated Decay):
uma via de vigilncia de RNAs existente em eucariotos. Sua principal funo reduzir erros na expresso do genoma, eliminando mRNAs que possuem stop codons prematuros.
http://sm.nwsuaf.edu.cn/mb/admin/upload/files/gzk/htm/chapter7_5.htm
CONCEITOS IMPORTANTES...
TDP-43 (TAR DNA-BINDING PROTEIN 43):
uma protena que pode se ligar tanto ao DNA quanto ao RNA, possuindo diversos papeis na regulao da expresso gnica.
Figura 01: TDP43 e seus domnios. Trinta mutaes, espordias (vermelho) e familiares (preto), relacionadas a ALS. (Lagier-Tourenne et al, 2009)
CONCEITOS IMPORTANTES...
ELA (Esclerose Lateral Amiotrfica):
uma doena neurodegenerativa progressiva que incapacita o portador.
Dificuldade na locomoo Perda de destreza nas extremidades Impedimentos da fala e deglutio Eventual bito por impedimento na respirao.
do portador
CONCEITOS IMPORTANTES...
miRNAs (micro RNAs):
So pequenos RNAs no codantes, normalmente entre 19 e 25 nt.
Atuam na regulao ps-transcricional em eucariotos. Reconhecem seus alvos no mRNA por pareamento de bases So incorporados a complexos de protenas de silenciamento (RISC*).
INTRODUO
Doenas neurodegenerativas apresentam um acmulo de
e fosforilao anormal da protena e falha no sistema de translocao da TDP-43 do nucleo para o citoplasma.
INTRODUO
Falhas
INTRODUO
Camundongos submetidos a inibio da TDP-43
miR-128. Esse miRNA altamente expresso em clulas neuronais em diferenciao, onde leva a represso da via de NMD.
HIPTESE
OBJETIVOS E CRONOGRAMA
1.
Definir a lista de mRNAs-candidatos truncados que podem ser gerados em decorrncia da depleo/mutao de TDP-43 Verificar se o nvel de expresso destes mRNAs truncados naturalmente menor no crebro que em outros tecidos Avaliar a dependncia destes mRNAs truncados em relao a via de NMD
2.
3.
METODOLOGIA
Analise de dados computacionais
Lista de mRNAs truncados Seleo de RNAs candidatos
Avaliao da expresso
Desenho de Primers
Transfeco de siRNA
Avaliao da expresso
RESULTADOS ESPERADOS
Ns esperamos que a expresso desses mRNAs truncados
seja naturalmente mais baixa em tecidos nervosos, como balano fisiolgico pela inibio da via de NMD devido a ao do miR-128
Tambm acreditamos que a inibio do NMD leve a um
acumulo dos transcritos truncados, mostrando que sua produo dependente da via de vigilncia de RNAs.
POSSIBILIDADES FUTURAS...
Avaliar se existe um aumento sinegstico da toxicidade de
O acumulo de protenas truncadas dever ser txico para a celula, levando a morte neuronal e recapitulando a situao da ELA.
A reativao da via de NMD em neurnios j diferenciados dever resultar em clulas nervosas defeituosas reverterem para um fentipo normal.