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Diagnstico Laboratorial das Viroses

Prof: Marcos L. Moreli

Diagnstico Laboratorial das Viroses


Introduo

Isolamento e Identificao de Vrus

Diagnstico Sorolgico das Infeces

Virais

Diagnstico Molecular de Infeces

Virais

Diagnstico Laboratorial das Viroses


Introduo

O diagnstico de infeces virais baseado em dois parmetros:

Isolamento e Identificao do vrus:

Atravs de sistemas vivos( cultura de clulas) nos quais os vrus so propagados.


Deteco direta do vrus, antgenos e genomas virais.

Sorologia: So utilizados mtodos para deteco de anticorpos especficos, produzidos pelo hospedeiro em resposta infeco viral.

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Isolamento e Identificao de vrus:

A colheita do material deve ser feita na fase aguda da doena.

O material deve ser transportado imediatamente para o laboratrio, mantido em temperatura baixa( gelo). No entanto, sem congelar. As partculas virais apresentam instabilidade a fatores ambientes.

Quando o material for remetido para locais distantes, deve ser acondicionado em gelo seco.

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Tipos de materiais indicados para exame virolgico

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Isolamento e Identificao de vrus:

Inoculao experimental de vrus em sistemas

hospedeiros

Propagao de vrus em animais de laboratrio

Propagao de vrus em ovos embrionados


Propagao de vrus em culturas de clulas

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Reao

de Hemaglutinao Os vrus se ligam diretamente s hemcias formando agrupamento s visveis.

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Reao de

Hemadsoro Uma suspenso de hemcias adicionada cultura e estas iro se ligar s protenas virais expressas na superfcie das clulas infectadas.

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Diagnstico sorolgico das infeces virais

Finalidades
Diagnosticar uma enfermidade causada por vrus.

Identificar novos tipos de vrus isolados.


Estudar epidemiologicamente o comportamento de

uma virose numa dada comunidade.

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Teste de

Neutralizao
Os vrus infecciosos quando interagem com o anticorpo especfico so neutralizados e por conseguinte perdem a capacidade de infectar clulas permissivas

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Teste de

Inibio da Hemaglutinao A capacidade de hemaglutinao de um vrus bloqueada quando esse vrus reage com o anticorpo especfico

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Teste de Fixao do Complemento
O complemento, um agente ltico, fixado por um complexo AgAc.

1 fase: o Ac, Ag e o complemento so misturados e incubados. 2 fase: O complexo formado por hemciaAc anti-hemcia adicionado a mistura

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Teste de Imunofluorescncia Direta Um conjugado de especificidade conhecida adicinado as clulas infectadas por vrus que esto fixados numa lmina de microscpio, ocorrendo formao de complexo Ag-Ac que visualizado pela imunofluorescncia

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Teste de Imunofluorescncia Indireta 1 fase:Ac no marcados so adicionados a clulas infectadas fixadas a uma lmina de microscpio. Aps incubao, as lminas so lavadas.

2 fase:Um Ac imunoglobulina + fluorescena conjugado e visto a microscopia de fluorescncia

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Teste de Aglutinao Passiva Ag livres so agrupados com partculas carreadoras com Ac especficos

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Teste Imunoenzimtico (ELISA) Ac conjugados com enzimas. O resultado dado pela mudana de cor da reao.

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Immunoblotting - Western Blotting (WB) Blotting significa transferncia de DNA. Separao das protenas virais usando o mtodo de eletroforese em gel.

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Diagnstico Molecular de Infeces Virais Deteco Qualitativa do cido Nuclico Viral Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) Reao de Hibridizao