PLASMIDOS

Los plsmidos (tambin llamados plasmidios) son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente en bacteria, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula. Las molculas de ADN plsmidico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los plsmidos no tienen protenas asociadas. Hay algunos plsmidos integrativos, vale decir tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Digamos que rompe el cromosoma y se sita en medio, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma.

Cada plsmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicacin u ORI (un punto inicial para la replicacin del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosomal. Los plsmidos de la mayora de las bacterias son circulares, pero tambin se conocen algunos lineales, los cuales reensamblan superficialmente los cromosomas de la mayora de eucariotes

TIPOS DE PLSMIDOS
Segn su control de replicacin vegetativa: Plsmidos de control estricto del nmero de copias: tienen bajo nmero de copias por cromosoma en la misma clula. Suelen ser plsmidos de tamaos medianos (unas 30 kb) a grandes (cientos de kb) P. ej., el factor F se mantiene a 1-2 copias por cromosoma. Plsmidos de control relajado: alto n de copias por cromosoma (ms de 10). Suelen ser plsmidos pequeos (menos de 10 kb). Algunos de ellos tienen un sistema de replicacin especial, y son amplificables cuando a las bacterias que los poseen se les aade cloramfenicol: este antibitico detiene la sntesis de protenas, lo que afecta a la replicacin del cromosoma, ya que para que se inicie cada ciclo de replicacin cromosmica se necesita un nuevo "pool" de determinadas enzimas. Pero esto no afecta a la replicacin del plsmido, que de este manera se "amplifica" y aumenta an ms su proporcin respecto del cromosoma.

El ADN plsmido puede aparecer en uno de cinco conformaciones, las cuales (para un tamao dado) corren a diferentes velocidades en un gel durante electroforesis. Las conformaciones se muestran abajo en orden de movilidad electrofortica (velocidad para un voltaje dado), del ms lento al ms rpido: Mellado abierto circular: el ADN tiene un solo corte filamentario. Lineal: ADN tiene terminales libres, ya sea porque los filamentos fueron cortados o porque el ADN era linear in vivo. Usted puede modelar este como un cordn que no se ha conectado as mismo. circular relajado: ADN que interacta completamente con ambos filamentos sin cortar, pero que ha sido enzimticamente relajado. Usted puede modelar este dejando un cordn relajado y luego conectndolo a s mismo. superespiral desnaturalizado: ADN como el ADN superespiral o superenrollado (ver ms abajo), pero que tiene regiones sin unir que lo hacen ligeramente menos compacto; esto resulta de una excesiva alcalinidad durante la preparacin del plsmido. ADN superespiral: Es un ADN totalmente intacto con los filamentos sin cortar, y con forma de remolino, resultando en una forma compacta. La tasa de migracin de pequeos fragmentos lineales es directamente proporcional al voltaje aplicado (en el caso de voltajes bajos). En el caso de altos voltajes, grandes fragmentos migran continuamente a diferentes tasas. Por lo tanto, la resolucin del gel decrece con el incremento del voltaje. A un bajo voltaje determinado, la migracin de un pequeo fragmento lineal de ADN esta en funcin de su longitud. Fragmentos lineales largos (de 20kb) migran a cierta tasa sin importar la longitud. Esto es debido a que las molculas reptan desde el centro de la molcula siguiendo el sentido de la matriz de gel. La digestin restrictiva se usa frecuentemente para analizar fragmentos purificados de plsmidos. Estas enzimas rompen especficamente el ADN en ciertas secuencias cortas.

Una forma de agrupar plsmidos es por su habilidad de transferirse a otra bacteria. Los plsmidos conjugativos contienen tra-genes, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugacin, como la transferencia sexual de plsmidos a otra bacteria. Los plsmidos no-conjugativos, son incapaces de iniciar una conjugacin, de all que ellos pueden transferirse nicamente con la asistencia de los plsmidos conjugativos y lo hacen por accidente. Una clase intermedia de plsmidos son los mobilizables los cuales llevan solo un subtipo de genes requeridos para la transferencia. Ellos pueden parasitar un plsmido conjugativo, transfirindose a una alta frecuencia solo en su presencia. Es posible para plsmidos de diferentes tipos el coexistir en una celular simple. Siete tipos diferentes de plsmidos han sido encontrados en la E. Coli. Pero normalmente plsmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo una de ellos sobrevive en la lnea celular, debido a la regulacin de las funciones vitales de los plsmidos. Por lo tanto, los plsmidos pueden ser diferenciados de acuerdo a grupos de compatibilidad.

Segn el tipo de fenotipos que codifican (y dejando aparte a los plsmidos crpticos, de los que se desconoce su funcin fenotpica): Plsmidos R, que codifican una o ms resistencias a drogas (antibiticos) y/o resistencia a metales pesados. Plsmidos bacteriocinognicos, que codifican alguna bacteriocina y simultneamente confieren inmunidad frente a esa bacteriocina a la bacteria que lo posee. Dentro de ellos, de los ms estudiados son los plsmidos Col, que producen colicinas (bacteriocinas de E. coli). Plsmidos de virulencia, que codifican funciones relacionadas con la virulencia en muchas bacterias patgenas. Por ejemplo: plsmido de la toxina tetnica en Clostridium tetani. plsmido de la toxina del ntrax en Bacillus anthracis. Plsmidos que codifican factores de colonizacin (para la invasin de los tejidos de su hospedador). Plsmidos de cepas de Pseudomonas, que confieren rutas metablicas capaces de utilizar como fuentes de carbono y energa sustancias que otros organismos no pueden catabolizar: plsmidos OCT (degradacin del octano); plsmidos TOL/XYL (degradacin del tolueno y xileno); plsmidos NAF (degradacin del naftaleno), etc. Plsmidos de cepas de Rhizobium responsables de funciones relacionadas con el establecimiento de las simbiosis fijadoras de nitrgeno en los ndulos radicales de las leguminosas (pSym y otros tipos). Plsmidos Ti y Ri de Agrobacterium, responsables de la produccin de tumores en numerosas plantas dicotiledneas. Existen igualmente plsmidos que codifican ms de un tipo de fenotipos: p. ej., plsmidos que suministran resistencia a antibiticos y capacidad de virulencia.

Plsmidos segn el grupo de incompatibilidad. Recordar la definicin de incompatibilidad entre plsmidos que se dio oportunamente, y la base de este fenmeno: dos plsmidos son incompatibles (no pueden permanecer establemente en la misma clula) porque comparten un mismo sistema de replicacin y segregacin de las copias. Como se sabe, los plsmidos se pueden clasificar segn su pertenencia a un mismo grupo de incompatibilidad. As p. ej., el plsmido F pertenece al llamado grupo IncFI; Los plsmidos R1 y R100, de resistencia a antibiticos, pertenecen al grupo IncFII. Obsrvese que dos plsmidos conjugativos pertenecientes a grupos de incompatibilidad diferentes pueden poseer regiones tra semejantes, y tipos de pelos sexuales parecidos. Esto es precisamente lo que ocurre con el F comparado con el R1 o el R100.

Prin
Los priones o protenas prinicas son partculas acelulares, patgenas y transmisibles. Se caracterizan por producir enfermedades que afectan el sistema nervioso central (SNC), denominadas encefalopatas espongiformes transmisibles (EET). Los priones no son seres vivos. El aislamiento de priones a travs del seguimiento del nivel de infectividad en las EET demuestra que las partculas infectivas estn constituidas total o parcialmente por una forma modificada de la protena prion. La protena se expresa en varios tejidos, principalmente en neuronas del SNC, y se une a las membrana celular externa mediante una molcula de glicosil fosfatidil inositol (GPI). No se conoce en la actualidad cmo ocurre este cambio de estructura in vivo y cmo es que este cambio conduce a la EET. Los resultados experimentales sugieren que la accin patgena de los priones est muy relacionada con la forma modificada de una protena natural existente en el organismo que, al entrar en contacto con las protenas originales, las induce a adoptar la forma anmala del prin, mediante un mecanismo todava desconocido. Todo ello en una accin en cadena que acaba por destruir la operatividad de todas las protenas sensibles.

 Teoras ms recientes apuntan a que los priones son protenas modificadas bajo ciertas circunstancias que favorecieron su cada a un nivel energtico muy estable al oligomerizarse, lo que las hace insolubles, inmunes a las proteasas y les cambia su conformacin tridimensional. Esta estabilidad provoca que dichas protenas se acumulen en el sistema nervioso, pero se desconoce todava cmo esta aparicin de una nueva estructura provoca enfermedades por acumulacin. De hecho, la infeccin con protenas prinicas se debe a que, al consumirse, empiezan a actuar en el tejido nervioso como ncleos en torno a los cuales ms protenas se desnaturalizan bajo su accin y se acumulan, formando generalmente fibrillas insolubles.

Propiedades Fsicas y Qumicas Filtrable con poros 25 nm o 100 nm. Es invisibles al microscopio ptico y electrnico. Resistente a: Formaldehido EDTA Proteasas ( Tripsina, pepsina ), aunque reducen la infectividad Nucleasas ( ribonucleasas A y III, desoxiribonucleasa I ) Radiacin ultravioleta ( 2540 ) Radiacin ionizante Mtodos de inactivacin Autoclave >134 C, 18 minutos Hipoclorito sdico (20C, 1hora) Hidroxido sdico 2N Fenol 90% Eter Acetona Permanganato potsico 0.002 M Urea 6 M

Propiedades Biolgicas Largo periodo de incubacin ( meses, aos, dcadas). No producen respuesta inflamatoria No antignicos. Patologa crnica progresiva. Fatal en todos los casos. Carecen de cuerpos de inclusin. Presencia de cido nucleico no demostrada. El nico componente conocido es la protena PrP. Pueden existir en mltiples formas moleculares Periodo de adaptacin a nuevos hospedadores. Control gentico de la susceptibilidad de algunas especies. Existencia de distintas cepas.

INTEGRONES
Los integrones son una familia de elementos genticos potencialmente mviles capaces de integrar y expresar genes de resistencia a los antibiticos ESTRUCTURA Y CLASIFICACIN Los integrones han sido detectados principalmente en bacilos Gram negativos fermentadores, de las familias Enterobacteriaceae y Vibrionaceae, y en algunos no fermentadores, como Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii. Adems, se ha descrito un integrn funcional en bacterias Gram positivas, en una cepa de Corynebacterium glutamicum. Hasta la fecha se han descrito varias familias de integrones, al menos tres de ellas estn relacionadas con la expresin de genes de resistencia. Sus integrasas presentan entre 45% y 58% de homologa, sugiriendo una divergencia evolutiva por un perodo superior a 50 aos, lo que corresponde, aproximadamente, a la era antibitica. Los integrones no pueden realizar autotransposicin pero se asocian frecuentemente a secuencias de insercin o bien, a transposones y plsmidos conjugativos que les sirven como vehculos para su transmisin inter e intra especie. Se han encontrado integrones de las clases 1 y 2 en plsmidos y transposones, en tanto aquellos de clase 3 slo han sido observados en plsmidos. Por ltimo, los integrones de clase 4 o "superintegrones" se han identificado principalmente en el cromosoma de Vibrio cholerae.