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Andressa Navarro Ramalho

Sedimentos
Sedimentos Importante na avaliao do nvel de contaminao dos ecossistemas aquticos.

Contaminantes: Antibiticos, metais, etc.

Antibiticos
Tratamento e preveno de infeces
Por que surgiu o interesse do monitoramento desses frmacos no meio ambiente?

Uso desenfreado pelos humanos (100-200 mil ton.)

Contaminao de recursos hdricos

Microorganismos criam resistncia a esses frmacos


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Pseudomonas aeruginosa
Infecta o aparelho respiratrio, urinrio, queimaduras, infeces sanguneas.

Mais comum em infeces no ouvido, mais freqente colonizador de equipamentos mdicos.


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Coleta dos sedimentos

Pontos de coleta

Compatibilidade entre as caractersticas fsicas, geolgicas e hidrolgicas.


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Coleta dos sedimentos


Equipamentos
A escolha:

Depende das caractersticas do sedimento, volume e objetivos do estudo.


Utiliza-se pegadores ou testemunhadores que devem ser usados sobre uma superfcie de apoio. Ex: Barco ou plataforma.
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Coleta dos sedimentos


Pegador de EkmanBirge
Utilizados em reservatrios; Muito leve.

Coleta dos sedimentos


Pegador Petersen e van Veen
Utilizado em fundos de areia, cascalho e argila.

Coleta dos sedimentos


Amostrador em Tubo ou Testemunhador
Apropriado para a coleta de sedimentos finos em gua doce, esturios e mares.

Coleta dos sedimentos


Draga Retangular
Amostragem por arrasto, geralmente no ambiente marinho.

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Extrao
Extrao dos sedimentos Extrao em fase slida
Prconcentrao do analito

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Determinao
HPLC

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Aplicaes

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Objetivo
Desenvolver um mtodo simples, sensitivo e robusto para a determinao simultnea de quatro classes de antibiticos em sedimentos utilizando UPLC-MS/MS. Sulfonamidas (SAs), Macroldeos (MLs), Fluoroquinolonas (FQs), e tetraciclinas (TCs).

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Sulfonamidas

Tetraciclinas

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Macroldeos

Fluoroquinolona

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Extrao

pH Tampo Solvente

4,7 9 McIlvaine Citrato/cido ctrico Metanol Acetonitrila


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Extrao
2g de amostra Tampo + Acetonitrila Evaporao do sobrenadante 55C

Adio de um padro interno

Sonicao por 15 min.

Escuro a 4C

Centrifugao
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SPE (clean-up e enriquecimento)


Oasis HLB (500mg, 6ml, Waters) Antes da extrao, 0,2g de EDTA foram adicionados e o extrato diludo em gua ultrapura.

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Condicio namento

10mL metanol 10mL gua

Aps, os eluatos contendo metanol foram evaporados Fluxo 5mL/min Adio e redissolvidos com 1mL extratos de metanol e filtrados. Para a anlise por UPLC100uL doEDTA extrato 10mL MS/MS, gua (remoo e impurezas) Lavagem final foram redissolvidos em Metanol:5mM c. Oxlico (35:65) (v/v).
Eluio

10mL metanol

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Condies cromatogrficas
UPLC
Sistema cromatogrfico Agilent 1200; Coluna Zorbax XBD C18 1,8 m a 45C; Fase mvel: Acetonitrila (A) e 5 mM de cido oxlico (B) (Gradiente); Fluxo 0,4mL/min.

MS/MS
Agilent 6460; Triplo Quadrupolo; Ionizao por eletrospray (ESI) (+); Gs nebulizador: 50 psi, 3 L/min; Capilar: 4000 V

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Recuperao
3 concentraes 10, 50 e 100 ug/kg

Classe Sulfonamidas

Recuperao (%) 66,3 123,5

Tetraciclinas
Fluoroquinolonas Macroldeos

48,2 72,0
61,8 160,4 60,6 151,9

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LOD e LOQ

LOQ mais alto para as FQs.

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Concluso
um mtodo sensvel e de boa resoluo; 11 antibiticos foram detectados, onde a maior concentrao encontrada foi no nvel de mg/kg (ppm);

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Aplicaes

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Objetivo
Propor um mtodo de extrao simultnea para 17 frmacos em amostras de solos e sedimentos; Analgsicos, antibiticos, antiinflamatrios, anticonvulsivos, bloqueadores beta, antidepressivos e reguladores de lipdeos.

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PLE (pressurized liquid extraction)


Sistema ASE 200 1g de amostra Adio dos padres internos Adio de EDTA Clula de extrao Filtros na parte inferior e superior da clula 90C, 7min. 500psi
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SPE (solid phase extraction)


Cartuchos SAX e Oasis HLB

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Condicio namento

5 mL metanol 5 mL gua

Adio extratos

40 mL do extrato proveniente da PLE 10 mL de gua destilada, fluxo de 10mL/min

5 mL gua Lavagem Secagem vcuo 1mL metanol Eluio Fluxo 1 mL/min


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Remoo do cartucho SAX

Extrao
O extrato foi evaporado; Foi adicionado 1 mL de metanol/gua (25/75) (v/v); Filtrao.

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Condies cromatogrficas
Modo positivo: Sistema cromatogrfico Alliance 1200; Coluna Sunfire C18 3,5 m e Gemini C18 (cartucho de guarda) Fase mvel: cido frmico 0,1% em metanol (A) e cido frmico 0,1% em gua (B) (Gradiente); Fluxo 0,2 mL/min. Modo negativo: Sistema cromatogrfico Alliance 1200; Coluna Luna C18 3 m e Gemini C18 (cartucho de guarda) Fase mvel: Acetonitrila/metanol (60:40, v/v) (A) e acetato de amnia 10 mM em gua (B) (Gradiente); Fluxo 0,2 mL/min. 35

Condies cromatogrficas
Anlise MS/MS Triplo Quadripolo; Rdio frequncia: 0,5 V; Temperatura de dessolvatao: 350C Gs de coliso: Ar; Fluxo de nitrognio: 50 L/h; Fluxo do gs de dessolvatao: 600 L/h Voltagem no modo (+): 4000 V Voltagem no modo (-): 3200 V
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Aplicaes

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Aplicaes

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Aplicaes

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Aplicaes

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Concluso
PLE e SPE mostrou eficiente limpeza, com taxas de recuperao maior de 70%. Fenofibrato e diclofenaco foram a exceo, com recuperaes at a 34%. Alta sensibilidade;

O mtodo adequado para a determinao de frmacos em solos e sedimentos.


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Aplicaes

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Objetivo
Desenvolvimento de um mtodo utilizando uma combinao de MAE e SPE para remoo de interferncias; Extrao e prconcentrao de frmacos, produtos de cuidados pessoal e hormnios; Determinao por GC-MS.
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MAE (microwave-assisted extraction)


1g de amostra foi liofizada; 10mL de metanol/gua (3:2); Microondas 500W, durante 6 minutos; O sobrenadante foi filtrado e seco; Volume final: 200 L

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Aplicaes

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SPE (solid phase extraction)


Extrato 200 L Coleta de 35 L do extrato Fluxo ultrapuro de N2

10 mL de gua, pH 7

Eluio com 400 L de acetato de etila + IS

Determinao GC-MS

Soluo padro aquosa (2,520000 ng/kg)

Aspirao da amostra, fluxo 4mL/min


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Condies cromatogrficas
Focus GC, espectrmetro de massas DSQ II Coluna capilar de slica DB-5 (0,25 m) revestida com 5% de fenilmetilpolisiloxano. Gs Hlio em um fluxo de 1mL/min; Foi programada uma rampa de temperatura para a coluna; Ionizao por impacto de eltrons: 70eV 200C;
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Aplicaes

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Aplicaes

1: ibuprofen; 2: niflumic acid; 3: metoprolol; 4: naproxen; 5: flunixin; 6: triclosan; 7: ketoprofen; 8: pyrimethamine; 9: carbamazepine; 10: diclofenac; 11: estrone; 12: 17-estradiol; 13: 17-ethinylestradiol; 14: chloramphenicol; 15: paracetamol; 16: propranolol; 17: florfenicol; and IS: internal standard.
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Concluso
Recuperao eficiente dos analitos (91-101%) e, a remoo eficaz de interferentes da matriz; Mtodo sensvel e preciso; Limites de deteco (0,8-5,1 ng /kg) melhores do que as dos mtodos j existentes.

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Referncias
http://www.quimica.com.br/revista/qd431/cromatografia1.htm Acesso em 23/05/2013 Guia nacional de coleta e preservao de amostras - gua, sedimento, comunidades aquticas e efluentes lquidos (CETESB) YANG, J.F. et al. Simultaneous determination of four classes of antibiotics in sediments of the Pearl Rivers using RRLC-MS/MS. Science of the Total Environment, n. 408, p. 3424-3432, 2010. AZZOUZ, A.; BALLESTEROS, E. Combined microwave-assisted extraction and continuous solid-phase extraction prior to gas chromatographymass spectrometry determination of pharmaceuticals, personal care products and hormones in soils, sediments and sludge. . Science of the Total Environment, n. 419, p. 208-215, 2012. ROIGA, P. V. et al. Determination of pharmaceuticals on soils and sediments by pressurized liquid extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A, n. 1217, p. 2471-2483, 2010.

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